一种医用纳米复合物制造技术

本发明专利技术提供一种医用纳米复合物，包括：（a）用于分子识别的寡核苷酸或多肽适配体；（b）超顺磁氧化铁纳米微粒；（c）生物相容性双亲性葡聚糖嵌段共聚物载体，用于超顺磁氧化铁纳纳米粒子和连接用于分子识别的寡苷酸酸或多肽适配体。本发明专利技术使用适配体、超顺磁性氧化铁纳米微粒与聚乙二醇、聚己内酯和多糖的嵌段共聚物组装成为的医用纳米复合物，利用适配体与靶分子特异性结合的靶向作用及SPIO纳米微粒的磁共振造影特性，通过生物相容性的嵌段共聚物构建复合纳米胶束，进入体内后，靶向定位微小病灶，通过常规的核磁共振造影诊断设备用于体内外微小病变的早期靶向定位诊断。本发明专利技术通过选择合适的靶分子适配体，也可以用于细胞信号传导、代谢过程、基因检测、病毒侦测、肿瘤探测等生物研究。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种医用纳米复合物，包括：（a）用于分子识别的寡核苷酸或多肽适配体；（b）超顺磁氧化铁纳米微粒；（c）生物相容性双亲性葡聚糖嵌段共聚物载体，用于超顺磁氧化铁纳纳米粒子和连接用于分子识别的寡苷酸酸或多肽适配体。本专利技术使用适配体、超顺磁性氧化铁纳米微粒与聚乙二醇、聚己内酯和多糖的嵌段共聚物组装成为的医用纳米复合物，利用适配体与靶分子特异性结合的靶向作用及SPIO纳米微粒的磁共振造影特性，通过生物相容性的嵌段共聚物构建复合纳米胶束，进入体内后，靶向定位微小病灶，通过常规的核磁共振造影诊断设备用于体内外微小病变的早期靶向定位诊断。本专利技术通过选择合适的靶分子适配体，也可以用于细胞信号传导、代谢过程、基因检测、病毒侦测、肿瘤探测等生物研究。【专利说明】一种医用纳米复合物
本专利技术涉及一种医用纳米复合物，适用于微小病变定位的早期的辅助治疗。
技术介绍
由于当前老龄化社会的趋势和世界范围内人们寿命的延长，人们逐渐意识到如何实现个人健康生活的重要性。相应地，人们一直强调对于诸如癌症和其它威胁生命的重大疾病早期诊断的必要，因此一直迫切需要开发一种在认为需要的时候能够用于早期诊断，并且具备微小病变精确定位的诊断技术。在此背景下人们一直努力开发新颖的诊断和治疗技术，应用人类基因组计划所获得的丰富的生物信息与纳米技术相结合，将两者结合巧妙地用于制造高度敏感及具有精确靶向的生物传感器件，结合常规的核磁共振影像技术，从而实现体内外微小病变的早期靶向定位诊断及其它生物目的研究，如细胞信号传导、代谢过程等等研究。SELEX技术是近年来发展起来的一种研究核酸结构、功能及进化等的一种新的组合化学技术，它不仅在基础研究、生物筛查等方面均有很好的应用，而且在临床诊断方面显示了广阔的前景。通过指数富集配基的系统进化技术体外筛选得到的一组能与目标靶分子高亲和、高特异性结合的寡核苷酸系列(单链DNA或RNA)，称为适配体(Aptamer)。作为一类新型的功能分子，适配体克高亲和力和高特异性地识别不同的分子。它的亲和力和特异性可与抗体相媲美，被认为是“挑战”抗体地位的一种新型试剂，已在生命科学、化学等领域获得越来越多的应用，以不同类型的示踪分子标记适配体后，该类适配体探针可以直观地将适配体与靶分子的特异性识别转化为灵敏的示踪信号，从而为靶分子的检测提供一种灵敏、特异的新型模式，在疾病诊断和治疗中发挥越来越重要的作用。最近Santa-ColomaTA等报道了用IE标切换技术制备的高特异性“monoclonal oligobody (单克隆寡核苷酸适配体)”或 “synthetic oligobody (合成寡核苷酸适配体)” (Bianchini M et al, J.1mmunol, methods, 2001, 252:191-197)可以特异性识别相应的蛋白质,应用于蛋白质印迹、免疫组化、免疫共沉淀等分析试验中。相对于适配体，蛋白类抗体的产生和应用存在以下限制:病毒性抗原免疫,动物无法产生耐受免疫,免疫原性弱导致抗体难以产生；杂交瘤单克隆抗体，在人体的排异反应；抗体生产成本高、费时费力，稀有抗体需要大量筛选才能得到，克隆细胞株需要传代培养；批间质量不均一，需要重新优化标定，体内外识别特异性差异；抗体对温度敏感，寿命有限，需要低温保存等缺点。而适配体在体外筛选，特性可依要求设计改变；动力学参数可依照诊断条件的要求而改变；无毒性抗原和免疫原性弱的抗原所受限制；在体外化学合成，可以保证时间、质量和数量的特别需要；特异性不受组织或样品中非靶蛋白的干扰；可以在合成时精确、定点、随意连接其它功能集团和分子，如巯基、氨基、荧光素、生物素、酶等；比抗体分子小，更适合于体内影像诊断和治疗；变性和复性可逆,而且速度快,可反复使用、长期保存和室温下运输。目前在影像探针的研究领域，可用作药物载体的聚合物胶束已受到越来越多的关注，这些聚合物胶束通过双亲性两嵌段聚合物在水溶液中自组装而形成核-壳结构。经自组装形成的聚合物胶束体系具有较低临界胶束浓度(CMC)、较低药物毒副作用和较长血液循环时间等优点，是包裹功能性纳米粒子如SPIO和量子点灯的良好载体，用于生物成像的研究。聚合物胶束包裹纳米粒子所形成的纳米复合物除保留纳米粒子原本的磁学和光学特性外，还提高了它在体内外的生物相容性，尤其突出的是多个磁性纳米微粒可以在胶束疏水核内形成致密的团簇结构，从而在同样铁浓度下产生比单个氧化铁粒子更强的T2效应，这一独特结构是开发高灵敏度磁共振影像探针的重要基础。同时两嵌段聚合物胶束的亲水段可以和适配体连接，从而具有了靶向特异性。多糖是一类具有良好生物相容性的天然聚合物，其中葡聚糖、透明质酸、硫酸软骨素和壳聚糖等在药物和基因转导中已有广泛的应用。右旋糖酐等葡聚糖因其良好的生物安全性而在临床上用于血浆替代品，它也是Feridex和Resovist两种SPIO造影剂得包被材料。但单一的葡聚糖本身并不能够使疏水性SPIO颗粒在水溶液中稳定分散。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种医用纳米复合物，包括: Ca)用于分子识别的寡核苷酸或多肽适配体； (b)超顺磁氧化铁纳米微粒； (c)生物相容性双亲性葡聚糖嵌段共聚物载体，用于超顺磁氧化铁纳纳米粒子和连接用于分子识别的辅助治疗。进一步的，上述寡核苷酸或多肽适配体是筛选可特异性结合某些靶标；具体包括肿瘤、病毒、细菌、信号蛋白、抗原、抗体，核酸、有机小分子、金属离子及某些特异性细胞等。进一步的，上述生物相容性双亲性葡聚糖嵌段共聚物，是通过缩合反应连接分子识别寡核苷酸或多肽适配体，通过乳液挥发包裹超顺磁氧化铁纳米粒子。进一步的，基于上述适配体的寡核苷酸或多肽与超顺磁氧化铁纳米颗粒在生物相容性嵌段共聚物中组合成为具有靶向功能的纳米复合影像造影剂，利用适配体的靶向识别革巴分子。上述靶分子包括蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、药物、维生素、有机化合物、无机化合物、细胞、细菌、病毒、肿瘤、信号蛋白、抗原、抗体、金属离子中的一种或多种组合。一种医用纳米复合物的应用，可用于体内、体外靶向定位微小病灶，通过常规的核磁共振造影诊断设备用于体内外微小病变的早期靶向定位诊断，也可用于细胞信号传导、代谢过程、基因检测、病毒侦测、肿瘤探测等生物研究。具体实施例选用叶酸作为靶标分子，将叶酸、福氏免疫佐剂、磷脂、胆固醇适量混合研磨制备免疫原,将上述免疫原小鼠大腿、背部皮下多点免疫注射,30-60天后采血检测叶酸抗体。采小鼠血清提取叶酸抗体，将小鼠抗叶酸抗体用PBS缓冲液稀释后在合适的温度条件下包被聚乙烯小孔板。实验时将叶酸稀释适量加入已包被抗叶酸抗体的聚乙烯小孔板孵育适当时间，用PBS缓冲液清 洗未结合的游离叶酸分子，真空低温抽干密封储存于4°C冰箱备用。把约0.5nmol生物素标记的随机ssDNA和上述聚苯乙烯微孔板在500ul含1%BSA的结合 TE 缓冲液(IOmM Tris-HCl, PH 7.5，ImM EDTA, lmMCaC12, ImM MgCl2)中孵育，轻轻震荡，4°C过夜。倾去孵育液，然后用0.5 ml TE缓冲液洗涤3次微孔板，然后用7M尿素在94°C反应10分钟洗脱结合的寡核苷酸，然后用酚/氯仿/异丙醇(本文档来自技高网...

【技术保护点】
医用纳米复合物，其特征在于，包括：（a） 用于分子识别的寡核苷酸或多肽适配体；（b） 超顺磁氧化铁纳米微粒；（c） 生物相容性双亲性葡聚糖嵌段共聚物载体，用于超顺磁氧化铁纳纳米粒子和连接用于分子识别的寡苷酸酸或多肽适配体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亚玲，
申请(专利权)人：上海长征富民金山制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31