蒲公英提取物及其在制备预防和治疗妇女阴道疾病药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了蒲公英提取物及其在制备预防和治疗妇女阴道疾病药物中的用途，所述蒲公英提取物主要由4‑香豆酸、阿魏酸、槲皮素戊糖苷、3,5‑二‑O‑咖啡酰奎尼酸、4,5‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸和木犀草素组成。试验结果显示，蒲公英提取物对白假丝酵母菌和加德纳菌有良好的抑制作用，对白假丝酵母菌和加德纳菌的最低抑菌浓度分别为0.4mg/mL和0.2mg/mL，可用于制备预防和治疗由白假丝酵母菌和加德纳菌引起妇女阴道疾病药物。本发明专利技术所用蒲公英提取物的原材料取材方便，生产成本低，产品质量好，价格低廉，绿色环保，适合推广应用。因此，可成为一种新型的中药阴道病治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
蒲公英提取物及其在制备预防和治疗妇女阴道疾病药物中的用途
本专利技术属于药物
，具体涉及一种蒲公英提取物，以及该提取物在制备预防和治疗由白假丝酵母菌和加德纳菌引起的妇女阴道疾病药物中的用途。
技术介绍
阴道病又名阴道炎症，是妇科门诊多见和频繁发生的病症。妇女的健康阴道对细菌、真菌等病原微生物的入侵有天然防御能力，而当健康阴道的天然防御系统被破坏时，病原体趁虚而入，打破了菌群与阴道之间原有的生态平衡，某些致病菌在此适宜的生长条件下迅速生长，进而引发阴道炎症。由于临床工作中诊断不正确、对治疗规范理解不透彻和对一些新的阴道感染、混合感染认识不足，以及日常生活中妇女们对妇科疾病缺乏全面正确的认识，缺乏相关的自身保健，加之多种不良生活作息等，使生理健康每况愈下，导致一些女性常年病魔缠身，且反复发作或久治不愈，给个人的正常工作和学习、家庭生活带来诸多不便。临床上常见的阴道病有：细菌性阴道病、假丝酵母菌性阴道病、滴虫性阴道病、老年性阴道病及幼女性阴道病。其中细菌性阴道病和假丝酵母菌性阴道病是两种常见性阴道病，它们分别主要是由加德纳菌和白假丝酵母菌引起的。近年来，抗生素的滥用引起了细菌和真菌耐药等许多生物安全问题，所以寻找一种抑菌性能良好的天然药物成分作为阴道病治疗药物是极为重要的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种蒲公英提取物，并为该蒲公英提取物提供一种新的用途。针对上述目的，本专利技术的蒲公英提取物包含下述相对质量百分含量的成分：4-香豆酸11％～12％、阿魏酸3.5％～4.5％、槲皮素戊糖苷10％～11％、3,5-二-O-咖啡酰奎尼酸34％～35％、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸3.5％～4.5％、木犀草素11％～12％。上述蒲公英提取物由下述方法获得：(1)水提取干燥的蒲公英全草粉碎并过60～80目筛，按照料液比1g:25～35mL加入蒸馏水，于50～70℃下浸提30～40min，浸提2次，过滤，合并滤液，滤液浓缩2～3倍，离心分离，收集上清液。(2)初步纯化将上清液用0.45μm孔径的滤膜抽滤后超声5～10min，然后上预处理好的D101大孔吸附树脂柱，水洗2个柱体积后，用体积浓度为50％～70％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩4～6倍。(3)再次纯化将浓缩后的洗脱液用等体积的乙酸乙酯萃取，收集萃取液并浓缩5～6倍后，真空干燥，得到蒲公英提取物。本专利技术蒲公英提取物在制备预防和/或治疗由白假丝酵母菌和加德纳菌引起的妇女阴道疾病药物中的用途。试验结果显示，本专利技术蒲公英提取物对白假丝酵母菌和加德纳菌有良好的抑制作用，对白假丝酵母菌和加德纳菌的最低抑菌浓度分别为0.4mg/mL和0.2mg/mL，可用于制备预防和治疗由白假丝酵母菌和加德纳菌引起妇女阴道疾病药物。本专利技术所用蒲公英提取物的原材料取材方便，生产成本低，产品质量好，价格低廉，绿色环保，适合推广应用。因此，可成为一种新型的纯中药的阴道病治疗药物。附图说明图1是实施例1得到的蒲公英提取物的HPLC分析图，其中1是4-香豆酸；2是阿魏酸；3是槲皮素戊糖苷；4是3,5-二-O-咖啡酰奎尼酸；5是4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸；6是木犀草素。图2是实施例1得到的蒲公英提取物对白假丝酵母菌的抑菌试验。图3是实施例1得到的蒲公英提取物对加德纳菌的抑菌试验。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实施例。实施例1制备蒲公英提取物(1)水提取新鲜蒲公英全草于60℃真空烘至恒重，烘干后粉碎并过80目筛，然后按照料液比1g:30mL加入蒸馏水，于60℃下浸提30min，浸提2次，过滤，合并滤液，滤液浓缩至2～3倍，在8000r/min离心10min，收集上清液。(2)初步纯化将步骤(1)收集的上清液用0.45μm孔径的滤膜抽滤器抽滤后，超声10min，然后上预处理好的D101大孔吸附树脂柱，水洗2个柱体积后，用体积浓度为60％的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩4～6倍。(3)再次纯化将步骤(2)浓缩后的洗脱液用等体积的乙酸乙酯萃取，收集萃取液并浓缩5～6倍后，在60℃真空干燥箱中烘干，得到蒲公英提取物。采用高效液相色谱(HPLC)测定所得蒲公英提取物的组成，HPLC系统由一个配备有DiKMADiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)的Agilent1100HPLC系统和二极管阵列检测器(DAD)组成。样品用体积浓度为80％的甲醇水溶液溶解，柱温保持在40℃，流动相由乙腈(洗脱液A)和体积浓度为0.1％的磷酸水溶液(洗脱液B)组成，等度洗脱液的流速为1.0mL/min，按照20％A、80％B洗脱47min，进样量为10μL。所有多酚化合物的峰面积在280nm波长处测定。如图1所示，HPLC检测出6种化合物，分别是4-香豆酸、阿魏酸、槲皮素戊糖苷、3,5-二-O-咖啡酰奎尼酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和木犀草素，这6种化合物在此提取物中相对百分含量分别为11.45％、3.96％、10.48％、34.24％、3.91％和11.80％。实施例2实施例1的蒲公英提取物对白假丝酵母菌和加德纳菌的抑制性能(1)抑菌活性试验通过纸片法测定蒲公英提取物对白假丝酵母菌(Candidaalbicans，CMCC85021)和加德纳菌(Gardnerellavaginalis，ATCC14018)的抑菌作用。将实验菌种复苏，活化2次。白假丝酵母菌传代于沙式液体培养基，在37℃、190r/min培养12h；加德纳菌使用HTM琼脂培养基平板在37℃5％CO2条件下培养12h，用液体培养基将菌落洗涤下来制备成菌悬液。用分光光度计测定各自菌体OD600nm值。当OD600nm＝0.6～0.7时，为最佳涂布浓度；若OD600nm>0.7时，用液体培养基进行适当稀释，再进行涂布。配制沙式琼脂培养基和HTM琼脂培养基，分别于115℃和121.3℃下灭菌20min，无菌辅酶Ⅰ(NAD)溶液在培养基冷却至50℃加入HTM琼脂培养基，混匀，分别制备平板。用移液枪吸取100μL经活化且浓度适宜的菌悬液于平板表面，用无菌L形玻棒将菌液涂匀。实验组：吸取10μL用40％二甲基亚砜溶解的样品溶液滴加到直径6mm无菌滤纸片上，适度烘烤，贴于平板表面。空白组：将10μL无菌40％二甲基亚砜(DMSO)滴加到直径6mm无菌滤纸片上，适度烘烤，贴于平板表面。分别于37℃、5％CO2条件下倒置培养18～36h，观察实验结果，测定抑菌圈直径大小。试验结果显示，空白组40％DMSO纸片周围基本无抑菌圈，表明二甲基亚砜对真菌和细菌生长无影响；实验组蒲公英提取物周围有抑菌圈，表明蒲公英提取物对白假丝酵母菌和加德纳菌具有明显抑菌作用(见图2)。当蒲公英提取物的浓度为0.40～2.28mg/mL，白假丝酵母菌的抑菌圈直径为6.00～10.53mm，其中蒲公英提取物浓度为2.28mg/mL时，对白假丝酵母菌的平均抑菌圈直径为10.38±0.15mm；当蒲公英提取物的浓度为0.20～3.80mg/mL，加德纳菌的抑菌圈直径为6.00～11.85mm，其中蒲公英提取物浓度为3.80mg/mL时，对白假丝酵母菌的平均抑菌圈直径为11.86±0.17mm。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蒲公英提取物，其特征在于：所述的蒲公英提取物包含下述相对质量百分含量的成分：4‑香豆酸11％～12％、阿魏酸3.5％～4.5％、槲皮素戊糖苷10％～11％、3,5‑二‑O‑咖啡酰奎尼酸34％～35％、4,5‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸3.5％～4.5％、木犀草素11％～12％。

【技术特征摘要】
1.一种蒲公英提取物，其特征在于：所述的蒲公英提取物包含下述相对质量百分含量的成分：4-香豆酸11％～12％、阿魏酸3.5％～4.5％、槲皮素戊糖苷10％～11％、3,5-二-O-咖啡酰奎尼酸34％～35％、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸3.5％～4.5％、木犀草素11％～12％。2.根据权利要求1所述的蒲公英提取物，其特征在于所述的蒲公英提取物由下述方法获得：(1)水提取干燥的蒲公英全草粉碎并过60～80目筛，按照料液比1g:25～35mL加入蒸馏水，于50～70℃下浸提30～40min...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁引库，段红波，张萍，高飞雄，李云祥，
申请(专利权)人：陕西理工大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61