一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物制造技术

本发明专利技术提供了一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，包括所述生物标志物为FHIT基因或其所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示，其中所述生物标志有HPV整合位点；以及MZF1基因，其核苷酸序列如SEQ NO.2所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。利用本发明专利技术所述的生物标志物检测人乳头瘤病毒阳性患者高危人群的标志物具有快速、精准、方便、假阳性率低等优点，具有重要的临床诊断意义。

A molecular marker for predicting cervical high-grade intraepithelial neoplasia in HPV-positive patients

【技术实现步骤摘要】
一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物
本专利技术涉及分子诊断
，具体涉及一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物
技术介绍
宫颈癌是全球范围内最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率及死亡率均居女性恶性肿瘤第四位。据报道，世界每年宫颈癌新发病例约为52.8万，每年死亡26.5万人以上，发达国家和发展中国家每年新发病例分别为8.3万和44.5万，每年死亡人数分别为3.5万及23万，约87％的宫颈癌死亡病例发生在发展中国家。在我国，宫颈癌的发病率在女性生殖道肿瘤中高居首位，每年有超过13万的宫颈癌新发病例，约占世界宫颈癌新发病例总数的1/3，并有年轻化的趋势，已经成为重大的公共卫生问题，严重危害了广大妇女的健康和生命。宫颈癌病因明确，高危型人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)感染是导致宫颈癌最主要的致病因素。持续感染高危型HPV可导致宫颈癌前病变及浸润癌。大约80-90％宫颈癌患者为HPV阳性。然而，并非所有的HPV感染都可以导致癌变，即便是高危型HPV感染的妇女也只有少部分罹患宫颈癌。事实上，许多妇女一生中曾有过HPV感染，但大部分只是一过性感染，会被机体的是自身免疫力清除，只有不到1-4％的患者发展成为宫颈癌前病变(CIN1/2/3)和宫颈癌。其中，在宫颈癌前病变CIN1的患者当中，60％的患者会自然回退，10％的患者会进展为CIN3，仅有1％的患者会进一步进展为宫颈癌。而在宫颈癌前病变CIN3的患者当中，30％的患者会自然回退，仅有12％的患者会进一步进展为宫颈癌。由此可见，早期发现并判别宫颈病变级别，针对高危持续感染的人群进行重点筛查与干预，基于HPV整合情况及基因状况，发现有效的临床预警分子标记物，可有利于阻断宫颈癌的发生发展，降低宫颈癌的防治费用，提高宫颈癌防治效果，重塑广大妇女的身心健康。为了降低宫颈癌的发病率，实行广泛且高效的宫颈癌筛查势在必行。目前应用最广泛的宫颈癌筛查办法为宫颈液基细胞学检查和高危型HPV检测。然而，这两种办法均存在自身的局限性，影响了筛查的效果。宫颈液基细胞学检查的局限性表现在：(1)敏感性较低，一项覆盖欧洲和北美6万余人次的数据显示，细胞学检查在初筛过程中遗漏了约有一半的CIN2、CIN3及宫颈癌患者，常造成对患者的漏诊漏治；(2)细胞学涂片的取材、制片、阅片水平参差不齐，缺乏规范化的质量控制，主观依赖性强。高危型HPV检测的局限性表现在：(1)高危型HPV的终生感染风险为80％，HPV检测虽能提高灵敏度，但无法区分一过性HPV感染和致病性持续感染；(2)育龄期妇女，尤其是年龄小于30岁的女性HPV的感染率高，临床提示意义较弱。(3)具有较低的特异性和敏感性，易造成社会医疗资源的浪费及对患者的过度诊治。因此，随着对宫颈癌病因学研究的深入，迫切需要开发行之有效的基于分子生物学筛查宫颈癌前病变的方法。现有研究表明，HPV感染人宫颈上皮之后，可以以游离状态存在，或整合入人的染色体当中。其中，高危型HPV整合入宿主的基因组，是宫颈癌发生和发展过程当中的决定性因素之一，大约80-90％左右的宫颈癌中可检测到高危型HPV的整合。而整合入人基因组的HPV又可能进一步通过表达病毒癌基因E6/E7，促进宫颈上皮细胞异常增殖、抑制其凋亡、增加染色体的不稳定性而导致细胞永生化；或通过干扰人体自身一些重要的癌基因和抑癌基因(如p53、pRb、c-MYC、h-TERT等)功能，诱导宫颈上皮恶性表型的表达及进展，并最终导致癌变。本申请人的前期研究，通过采用全基因组测序和高通量病毒整合检测，计算并绘制了HPV频繁整合位点图谱，确定了CIN、宫颈癌和HPV阳性细胞系中的HPV高频整合断点。同时发现，HPV与宫颈上皮发生整合后会导致目标基因激活或失活，继而引起癌基因(如MYC等)的过度表达，抑癌基因(如FHIT等)的表达下调，进而导致宫颈细胞发生系列病理形态改变，最终宫颈上皮发生癌变，揭示HPV定点整合与宫颈癌发病的必然关系。根据这些发现，FHIT基因可能成为宫颈癌的潜在风险分层预测因子。本专利技术旨在验证FHIT在预测HPV阳性患者的宫颈病变发生情况的生物应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一方面本专利技术提供了一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，包括所述生物标志物为FHIT基因或其所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQNO.1，核苷酸序列如SEQNO.2所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。进一步地，所述预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，还包括MZF1基因，其核苷酸序列如SEQNO.2所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。FHIT基因为脆性组氨酸三联体蛋白，是组氨酸三联体基因家族的成员，是一种肿瘤抑制因子。研究表明，FHIT在细胞凋亡，细胞周期控制和预防上皮-间质转化中起重要作用；FHIT也是一种基因组“看守”，它可以作为肿瘤发生的屏障并阻止癌前病变。已有多项研究报道，FHIT表达的丧失发生在多种癌前病变中，例如肺癌，食道癌，和口咽鳞状细胞癌等。MZF1基因属于哺乳动物Krüppel样转录因子家族，参与细胞增殖和分化。MZF1通过作为转录激活因子和阻遏物起作用，对调节恶性肿瘤细胞的增殖，迁移和侵袭至关重要。现有研究中较多报道MZF1基因参与胃癌的致癌作用和化学敏感性。然而，在本专利技术中申请人发现MT2A的表达降低与乳腺癌患者预后不良具有密切联系。进一步地，所述HPV包括为HPV16和/或HPV18。另一方面，本专利技术还提供了所述分子标记物FHIT基因和MZF1基因在制备辅助治疗宫颈癌靶向分子药物的应用。本专利技术还提供了所述分子标记物FHIT基因和MZF1基因在制备辅助治疗宫颈癌靶向分子药物的应用。本专利技术还提供了一种用于预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的试剂盒，所述试剂盒包含核苷酸序列如SEQNO.2所示的FHIT基因和如SEQNO.3所示的MZF1基因。本专利技术的有益效果：1、使用本专利技术的生物标志物FHIT基因和MZF1基因，能够辅助诊断人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的情况，或者筛出有进展为宫颈癌风险的癌前病变人群从而进行重点监测。2、在人群中进行宫颈癌普筛时，使用本专利技术的生物标志物能更有针对性的筛出人乳头瘤病毒阳性患者及高危人群，可以更灵敏地诊断或减少工作量。综上，利用本专利技术所述的生物标志物检测人乳头瘤病毒阳性患者高危人群的标志物具有快速、精准、方便、假阳性率低等优点，具有重要的临床诊断意义。附图说明图1本专利技术实施例中病例选择的流程图。图2本专利技术FHIT的免疫组织化学检测不同组织样本的实验结果示意图(其中A表示FHIT在低级别上皮内瘤变中的表达；B表示FHIT在高级别上皮内瘤变中的表达)。图3本专利技术FHIT的免疫细胞化学检测不同细胞样本的实验结果示意图(其中A表示FHIT在低级别上皮内瘤变中的表达；B表示FHIT在高级别上皮内瘤变中的表达)。图4本专利技术MZF1的免疫组织化学检测不同组织样本的实验结果示意图(其中A表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，其特征在于，包括所述生物标志物为FHIT基因或其所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ NO.1，核苷酸序列如SEQ NO.2所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。

【技术特征摘要】
1.一种预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，其特征在于，包括所述生物标志物为FHIT基因或其所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQNO.1，核苷酸序列如SEQNO.2所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。2.如权利要求1所述的所述预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，其特征在于，还包括MZF1基因，其核苷酸序列如SEQNO.3所示，其中所述生物标志有HPV整合位点。3.如权利要求1或2所述的所述预测人乳头瘤病毒阳性患者的宫颈高级别上皮内瘤变的分子标记物，其特征在于，所述HP...

【专利技术属性】
技术研发人员：包煜贤，
申请(专利权)人：广州鼓润医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44