一种检测探针、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种检测探针、其制备方法及应用，属于生物领域；本发明专利技术方法通过使用minicircle质粒结合滚环扩增的方法扩增得到全长的探针片段，进一步通过超声打断制备得到不同长度需求的探针；本发明专利技术方法可用于生产DNA探针或者RNA探针，制备方法简单、产量大、成本低，可将制备周期缩短至1天。另外，本发明专利技术方法制备的探针长度不受限，可根据需要提供不同目标及不同长度的探针，均一性好、纯度高，大大地提高了探针的捕获性能，使得目标区域的测序均一性、深度更佳，更进一步降低实验成本。

【技术实现步骤摘要】
一种检测探针、其制备方法及应用
本专利技术属于生物领域，涉及一种检测探针、其制备方法及应用。
技术介绍
近十几年来，NGS(二代测序技术)的快速发展使得DNA测序成本大幅降低，然而就现阶段而言，全基因组重测序的成本依然很高，且得到的海量数据分析速度缓慢，无法大规模地应用。靶向测序技术可以将感兴趣的基因组区域富集出来测序，单个样本测序数据产出少且分析速度较快，因此更能经济高效地发挥NGS技术的优势，广泛应用到临床检测、健康筛查等众多领域。另外，靶向测序可以对目标区域进行深度测序，增加了目标区域内遗传变异的检测灵敏度和准确性。在技术原理上，靶向测序的方法主要分为两种：杂交捕获测序和多重扩增子测序。液相捕获是重要的辅助检测手段。液相杂交捕获测序可适用于几kb到上百Mb的基因组目标区域的检测，可检测SNV，InDel，CNV，SV，基因融合等变异。目前常用的应用包括针对不同的肿瘤基因设计相应的panel、明确疾病的易感基因及致病基因、病毒检测、线粒体检测等，应用非常广泛。用于捕获的探针即可为DNA探针，也可为RNA探针。DNA探针主要依本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)、克隆目标基因片段，片段化minicircle质粒，得到minicircle质粒片段，所述minicircle质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；/n(2)、将步骤(1)中的目标基因片段与minicircle质粒片段连接，并将连接产物转化至菌中，挑取相应的含有所述质粒片段的转化菌，扩大培养并提取质粒；/n(3)、使用带有纯化标签的原料，以步骤(2)得到质粒为模板进行滚环扩增；/n(4)、纯化回收步骤(3)的扩增产物，进行超声。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、克隆目标基因片段，片段化minicircle质粒，得到minicircle质粒片段，所述minicircle质粒的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；
(2)、将步骤(1)中的目标基因片段与minicircle质粒片段连接，并将连接产物转化至菌中，挑取相应的含有所述质粒片段的转化菌，扩大培养并提取质粒；
(3)、使用带有纯化标签的原料，以步骤(2)得到质粒为模板进行滚环扩增；
(4)、纯化回收步骤(3)的扩增产物，进行超声。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述带有纯化标签的原料为带有生物素标签的dNTP或生物素标签的NTP。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，若制备DNA探针，步骤(3)中所述滚环扩增使用Phi29DNA聚合酶；若制备RNA探针，步骤(3)中所述滚环扩增使用T7RNA聚合酶。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述滚环扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：程欢欢，陈莹，谢红娴，兰凯，黄龙，
申请(专利权)人：广州鼓润医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44