一种羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术为一种羧酸酯酶‑pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针及其制备方法和应用。2,4‑二羟基苯甲醛、戊二酸二乙酯和哌啶在乙醇中反应得产物1，产物1与乙酸酐在吡啶中反应得产物2，产物2与OsO4、NaIO4反应得产物3，产物3与K2CO3在甲醇中反应酸化得产物4；4‑甲基吡啶和1,4‑双（氯甲基）苯在甲苯中反应得产物5，产物4和产物5、哌啶在乙醇中反应得HMT；产物5、HMT和NaOAc在Ac2O中反应得羧酸酯酶‑pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针CEMT。该探针采用连续双响应机制，在双光子荧光基团提供的强穿透性条件下对CE和pH进行连续双响应定量分析，并能够锁定线粒体，防止酸性条件下探针自线粒体的脱落，从而对其进行原位检测，应用在酶介导的酸化监测体系中。

A Carboxylesterase-pH Continuous Two-photon Mitochondrial Locked Fluorescence Probe and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针及其制备方法和应用
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
羧酸酯酶在生物体内，特别是细胞中起着重要的生理调节作用，其浓度的高低可反映出机体或某些细胞的疾病状态，同时也与一些病变或代谢紊乱有着密切的关系。在给药期间，线粒体的酸化往往是由药物经羧酸酯酶carboxylesterase(CE)代谢后的产物所导致，因此我们需要分别响应CE和pH的分子探针来实现，现阶段近年来，研究者已经开发了若干CE响应以及pH响应的分子探针，但并没有同时对二者分别或连续响应的分子探针，研究能够连续地响应CE和pH的变化的荧光探针，能更直接地说明pH的改变是由CE所介导的。此外，根据我们的要求，线粒体的原位酸化信息是我们更加关注的。而此探针具有能对线粒体进行锁定来实现原位检测的优点，操作过程简便，因此开发能够连续地响应CE和pH的变化、以及能对线粒体进行锁定来实现原位检测的荧光探针具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术提供一种羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羧酸酯酶‑pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针，其特征在于，荧光探针结构式如式CEMT所示：

【技术特征摘要】
1.一种羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针，其特征在于，荧光探针结构式如式CEMT所示：。2.一种权利要求1所述的羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将4-甲基吡啶和1,4-双（氯甲基）苯在甲苯中溶解，搅拌，加热回流，得产物5;(2)将产物5和产物4在乙醇中溶解，加入无水哌啶反应得产物HMT；(3)将产物5、HMT和NaOAc混合溶于Ac2O，反应得羧酸酯酶-pH连续双比率双光子线粒体锁定荧光探针CEMT；。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的产物5的制备方法为将50mmol4-甲基吡啶和55mmol1,4-双（氯甲基）苯在甲苯中溶解，室温下搅拌4小时，加热回流30分钟后冷却、过滤，用无水乙醚洗涤得产物5。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述的产物HMT的制备方法为将1mmol产物5和0.5mmol产物4加入到50mL乙醇中溶解，加入0.05mL无水哌啶，加热回流12小时，缓慢冷却至室温，再冷却到-20℃，过滤，用乙醇洗涤，使用体积比为1:2的CH3OH:CH2Cl2混合溶剂进行色谱纯化。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述的CEMT的制备方法为将1mmol产物5、0.6mmolHMT和2.04mmolNaOAC混合溶于6mLAc2O中，在Ar气氛中、80℃条件下搅拌7小时，减压浓缩得粗品，粗品溶于DCM中提纯得CEMT。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的产物4的制备方法为：a)将2,4-二羟基苯甲醛溶解于乙醇中，溶解浓度0.02～0.06g/mL，然后加入戊烯二酸二...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈光，许洁，姜翱，刘振军，赵光辉，唐波，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37