用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的包含融合蛋白的药物组合物制造技术

本发明专利技术提供了用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的组合物。特别地，本发明专利技术提供了包含生物活性蛋白和FGF21突变蛋白的融合蛋白；以及包含所述融合蛋白的药物组合物，其有效地用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化。本发明专利技术的药物组合物具有抑制炎性细胞和成纤维细胞增殖的作用，并因此可有效地用作用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的组合物。

Drug compositions containing fusion proteins for the prevention or treatment of hepatitis, liver fibrosis and cirrhosis

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的包含融合蛋白的药物组合物
本专利技术涉及用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的组合物。特别地，本专利技术涉及包含生物活性蛋白和FGF21突变蛋白的融合蛋白；以及包含所述融合蛋白的药物组合物，其有效地预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化。
技术介绍
肝病有多种病因，例如病毒或细菌感染、酒精或有毒物质、脂肪或重金属的过量积累、异常免疫应答等。这些原因可诱发病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、中毒性肝炎、自身免疫性肝病等。此外，一些肝病可通过慢性进展而进展为肝硬化、肝纤维化和肝癌。急性肝病(例如急性病毒性肝炎或中毒性肝炎)引起严重的疲劳、食欲不振、黄疸等，并且可异常进展为急性肝功能衰竭，如果不进行肝移植，其可导致死亡。在另一些方面，进展缓慢的慢性肝病(例如慢性病毒性肝炎和脂肪性肝病)多为无症状的，并且患者在日常生活中可未感到明显的不便，然而，肝纤维化可正在进行，并且慢性肝病可在未意识到的情况下进展为肝硬化和肝癌。根据韩国肝硬化患病率统计，估计2012年肝硬化患病率在成人中为0.5％，并且在65岁或年龄更高的人中为约1.0％。这是基于在医疗机构中诊断的病史调查的调查表的结果，因此肝硬化的实际患病率可能更高。在韩国最常见的肝硬化原因是病毒性肝炎，且第二常见原因是酒精性肝病。如果任何原因使得肝损伤持续重复，则无论存在或不存在症状，都存在发生肝硬化、纤维化和肝癌的巨大风险。一旦肝硬化已发生，则即使进行治疗，也难以将硬化的肝恢复至其原来的状态。胰高血糖素样肽-1(Glucagon-likepeptide-1，GLP-1)是由31个氨基酸组成的肠降血糖素(incretin)激素，其由肠道中的L细胞在受到食物等刺激时分泌。其生物效应通过经由GLP-1受体的细胞内信号传导产生，所述GLP-1受体是在靶组织(例如胰腺的β细胞、脑等)中表达的G蛋白偶联受体。血液中分泌的GLP-1具有小于2分钟的非常短的半衰期，这是由酶二肽基肽酶-4(dipeptidylpeptidase-4，DPP-4)对N端氨基酸的切割导致的活性损失引起。由于GLP-1基于血糖水平刺激胰腺中β细胞中的胰岛素分泌，因此其对降低血糖具有强烈的作用而不诱导低血糖症。此外，在多种动物模型和人中，GLP-1的施用导致体重减轻，已知这是由于其对食欲抑制的作用使得食物摄入降低而引起的。通过胰腺中β细胞中表达的GLP-1受体，GLP-1诱导β细胞的增殖并且通过抑制由糖脂毒性引起的细胞死亡来增强β细胞的生存力。胰高血糖素的过量分泌会升高血糖，已知这是糖尿病患者高血糖的原因之一。此外，已知GLP-1作用于胰腺中的α-细胞以通过抑制蛋白激酶A(proteinkinaseA，PKA)蛋白特异性胰高血糖素的分泌来抑制空腹血糖升高。毒蜥外泌肽-4(Exendin-4)是临床上重要的GLP-1受体激动剂。毒蜥外泌肽-4是具有39个氨基酸残基的多肽，并且通常在希拉毒蜥(GilaMonsterlizard)的唾液腺中产生。已知毒蜥外泌肽-4与GLP-1具有52％的氨基酸序列同源性，并与哺乳动物中的GLP-1受体相互作用(Thorensetal.(1993)Diabetes42：1678-1682)。已经显示毒蜥外泌肽-4在体外刺激胰岛素产生细胞分泌胰岛素，并且在等摩条件下诱导的胰岛素产生细胞的胰岛素释放强于GLP-1。虽然毒蜥外泌肽-4强烈地刺激胰岛素分泌以降低啮齿动物和人二者的血糖水平，并且作用持续时间长于GLP-1，但毒蜥外泌肽-4在没有GLP-1的哺乳动物中显示出抗原性，因为其具有在这样的动物中不熟悉的表位。已经在临床上证实了GLP-1和毒蜥外泌肽-4类似物(例如，利拉鲁肽和艾塞那肽)在人中改善葡萄糖控制的能力。已经报道了GLP-1通过抑制凋亡和诱导增殖来提高β细胞量。此外，还已经报道了GLP-1作为抑制胃酸分泌和胃排空的肠激素发挥作用，同时增强饱腹感信号，从而降低食欲。GLP-1的这样的作用可解释当向患有2型糖尿病的患者施用GLP-1类似物时所观察到的体重减轻。此外，GLP-1在啮齿动物中缺血之后显示出心脏保护作用。已经进行了多种尝试以开发长效的GLP-1类似物。临床上证实的长效GLP-1类似物包括度拉鲁肽(dulaglutide)(WO2005/000892)和阿必鲁肽(albiglutide)(WO2003/059934)。度拉鲁肽是Fc融合的GLP-1类似物，且阿必鲁肽是白蛋白融合的GLP-1类似物，二者均具有允许每周施用一次的药代动力学特征。这两种药物在每周施用一次时具有降低血糖和减轻体重的优异作用，并且当与艾塞那肽和利拉鲁肽相比时，在治疗方面也提供了极大改善的便利性。同时，在肝中合成的成纤维细胞生长因子21(fibroblastgrowthfactor21，FGF21)是已知在葡萄糖和脂质稳态中发挥重要作用的激素。FGF21在表达FGF21特异性受体(即，FGF受体)和β-klotho复合物二者的肝、脂肪细胞、胰腺β细胞、脑中的下丘脑和肌肉组织中显示出药理学作用。已报道了在多种糖尿病和代谢性疾病的非人灵长类和鼠模型中，FGF21可以以胰岛素非依赖性方式降低血糖水平、减轻体重并降低血液中的甘油三酯和低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)浓度。此外，已知FGF21还具有改善胰岛素敏感性的作用，并且因此其具有作为新抗糖尿病或抗肥胖治疗剂之靶标的高潜力(WO2003/011213)。因此，为了开发基于FGF21的新抗糖尿病药，已经尝试了通过一些氨基酸的替换、插入和缺失来基于野生型FGF21序列构建FGF21突变体，以改善其生物学活性和体内稳定性(参见WO2010/065439)。然而，由于FGF21具有非常短的半衰期，如果直接用作生物治疗剂，其被证明是有问题的(Kharitonenkov，A.etal.，JournalofClinicalInvestigation115：1627-1635，2005)。FGF21的体内半衰期在小鼠中为1至2小时，并且在猴中为2.5至3小时。因此，对于以其当前形式用作糖尿病之治疗剂的FGF21，需要每日施用。已经报道了尝试提高FGF21重组蛋白之体内半衰期的多种方法。一个这样的实例是将聚乙二醇(PEG)(即，聚合物材料)连接至FGF21以提高其分子量，从而抑制肾排泄并提高体内滞留时间(参见WO2012/066075)。另一种方法尝试通过将其与结合人白蛋白的脂肪酸融合来改善半衰期(参见WO2012/010553)。另外的实例尝试通过产生激动剂抗体来在维持与野生型FGF21等同的药理学活性的同时延长半衰期，所述激动剂抗体单独地或作为与β-klotho的复合物与人FGF受体特异性结合(参见WO2012/170438)。在另一个实例中，通过制备长效融合蛋白来改善半衰期，其中IgG的Fc区与FGF21分子结合(参见WO2013/188181)。在可用于产生长效药物的多种技术中，广泛使用了Fc融合技术，因为其具有较少的使用其他方法时见到的缺点，例如在延长体内半衰期的同时诱导免疫应答或毒性。为了开发作为长效治疗药物的Fc融合的FGF21蛋白，应满足以下条件。第一，应使由融合引起的体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的药物组合物，其包含作为有效成分的融合蛋白，所述融合蛋白包含：成纤维细胞生长因子21(FGF21)突变蛋白；以及免疫球蛋白Fc区，其中所述FGF21突变蛋白包含选自以下突变(1)至(7)的至少一种突变：(1)从野生型FGF21蛋白的N端起第98至101位的氨基酸替换为氨基酸序列EIRP(SEQ ID NO：68)；(2)从野生型FGF21蛋白的N端起第170至174位的氨基酸替换为氨基酸序列TGLEAV(SEQ ID NO：69)；(3)从野生型FGF21蛋白的N端起第170至174位的氨基酸替换为氨基酸序列TGLEAN(SEQ ID NO：70)；(4)从野生型FGF21蛋白的N端起第170位的氨基酸替换为氨基酸N；(5)从野生型FGF21蛋白的N端起第174位的氨基酸替换为氨基酸N；(6)从野生型FGF21蛋白的N端起第180位的氨基酸替换为氨基酸E，连同一种或更多种上述突变(1)至(5)；以及(7)用于降低野生型FGF21蛋白之免疫原性的1至10个氨基酸的突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.10 KR 10-2016-01498661.用于预防或治疗肝炎、肝纤维化和肝硬化的药物组合物，其包含作为有效成分的融合蛋白，所述融合蛋白包含：成纤维细胞生长因子21(FGF21)突变蛋白；以及免疫球蛋白Fc区，其中所述FGF21突变蛋白包含选自以下突变(1)至(7)的至少一种突变：(1)从野生型FGF21蛋白的N端起第98至101位的氨基酸替换为氨基酸序列EIRP(SEQIDNO：68)；(2)从野生型FGF21蛋白的N端起第170至174位的氨基酸替换为氨基酸序列TGLEAV(SEQIDNO：69)；(3)从野生型FGF21蛋白的N端起第170至174位的氨基酸替换为氨基酸序列TGLEAN(SEQIDNO：70)；(4)从野生型FGF21蛋白的N端起第170位的氨基酸替换为氨基酸N；(5)从野生型FGF21蛋白的N端起第174位的氨基酸替换为氨基酸N；(6)从野生型FGF21蛋白的N端起第180位的氨基酸替换为氨基酸E，连同一种或更多种上述突变(1)至(5)；以及(7)用于降低野生型FGF21蛋白之免疫原性的1至10个氨基酸的突变。2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述融合蛋白还包含生物活性蛋白或其突变体或片段。3.权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述FGF21突变蛋白的通过突变引入的氨基酸残基N是糖基化的。4.权利要求2所述的药物组合物，其中所述生物活性蛋白是选自以下的生物活性蛋白：胰岛素、C-肽、瘦素、胰高血糖素、胃泌素、胃抑多肽(GIP)、胰淀素、降钙素、胆囊收缩素、肽YY、神经肽Y、骨形态发生蛋白-6(BMP-6)、骨形态发生蛋白-9(BMP-9)、胃泌酸调节素、催产素、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)、鸢尾素、含III型纤连蛋白结构域蛋白5(FNDC5)、爱帕琳肽、脂连蛋白、Clq和肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP家族)、抵抗素、内脂素、网膜素、视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)、肠高糖素、血管生成素、白介素-22(IL-22)、毒蜥外泌肽-4和生长激素。5.权利要求4所述的药物组合物，其中所述生物活性蛋白是选自GLP-1、其突变体和毒蜥外泌...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪憪娜，金埈焕，崔铉浩，金度勋，金台旺，吴世雄，宋武泳，金锺均，
申请(专利权)人：株式会社柳韩洋行，
类型：发明
国别省市：韩国,KR