Act A在制备治疗发育期脑白质损伤疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Act A在制备治疗发育期脑白质损伤疾病的药物中的应用。实验表明，在新生5日龄SD大鼠构建的WMI模型建立后24h，对患WMI的SD大鼠分别经侧脑室注入人源重组蛋白Act A三种剂量：低剂量12.5mg/kg、中剂量24.5mg/kg、高剂量49mg/kg，经苏木素‑伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色显示表明，均可明显改善脑室周围白质坏死、液化。中剂量Act A能够增加少突胶质细胞前体细胞(简称OPC)和少突胶质细胞(Oligodendrocyte)的形成，能够促进髓鞘形成，改善学习与记忆能力。

Application of Act A in the Preparation of Drugs for the Treatment of Developmental White Matter Injury

【技术实现步骤摘要】
ActA在制备治疗发育期脑白质损伤疾病的药物中的应用
本专利技术涉及ActivinA(激活素A，简称ActA)的用途，尤其是在制药中的用途。
技术介绍
脑白质损伤(WhiteMatterInjury，简称WMI)是早产儿常见的神经系统疾病，其主要发病机理为少突胶质细胞前体细胞(Oligodendrocyteprecursorcell，简称OPC)受损，可造成运动、认知、行为等多种神经功能缺陷，给社会和家庭带来沉重负担。临床上现有的治疗手段非常有限，主要通过OPC移植，亚低温以及保护内源性少突胶质细胞治疗。因此开发出干预和治疗WMI的药物是社会的需要，具有重要意义。ActivinA(激活素A，简称ActA，在该说明书的后续内容中，以“ActA”代表“ActivinA”)属于转化生长因子(TransformingGrowthFactor-β，简称TGF-β)超家族成员，是一个广泛表达的由两个βA链构成的同质二聚体(氨基酸序列：Gly311-Ser426；Accession#P08476)，在神经系统中，神经元和胶质细胞均能够分泌ActA，其13kDa成熟的人类βA链与牛、猫、老鼠、猪、等有100％一致的氨基酸序列特征。目前，ActA主要用于缺氧缺血性脑病、细菌性脑膜炎、高胆红素血症等足月儿脑病治疗的研究。WMI不同于上述疾病，WMI主要发生于早产儿群体，其主要受累细胞是OPC，而缺氧缺血性脑病发生的主要群体是足月儿，其受损细胞是大脑皮层神经元，细菌性脑膜炎、高胆红素血症与WMI具有截然不同的致病机理和临床病理特征。
技术实现思路
本专利技术的目的在于证明ActA的新用途，即在制药中的新用途，为治疗发育期脑白质损伤疾病开发新的药品。本专利技术通过实验证明：在新生5日龄(即出生第5天)SD大鼠构建的WMI模型建立后24h，对患WMI的SD大鼠分别经侧脑室注入人源重组蛋白ActA三种剂量：低剂量12.5mg/kg、中剂量24.5mg/kg、高剂量49mg/kg，经苏木素-伊红(hematoxylinandeosin，HE)染色显示表明，均可明显改善脑室周围白质坏死、液化。其中，中剂量ActA和高剂量ActA的处理效果较低剂量ActA的处理效果好，中剂量ActA、高剂量ActA之间的处理效果差异不明显，但高剂量ActA的大鼠在后期表现出状态不佳的现象。注射中剂量(24.5mg/kg)ActA的患WMI的SD大鼠的后续实验结果：经2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5triphenyltetrazouliumtydrochloride，TUNEL)染色显示，SD大鼠的阳性细胞明显减少，说明ActA可减轻细胞凋亡。免疫荧光检测胼胝体区OPC标志物NG2，少突胶质细胞(Oligodendrocyte，简称OL)标志物CC1以及髓鞘标志物MBP的表达，结果显示，ActA处理组的NG2，CC1和MBP的表达量明显增加，说明ActA可促进髓鞘形成。透射电镜观察胼胝体区髓鞘化，结果显示，与PBS溶剂处理组相比，ActA处理后胼胝体区髓鞘纤维排列紧密，髓鞘厚度和数量明显增加。Morris水迷宫实验显示，在第1-4天时，ActA处理组游泳的平均时间与PBS溶剂对照组比较，无明显差异；在第5-6天时，ActA处理组的大鼠游泳过程中的平均潜伏期明显缩短；在第7天的测试期，ActA处理组的大鼠游泳过程中穿越虚拟平台的次数增加，差异均具有统计学意义。上述实验结果表明，ActA能够改善WMI大鼠的病理改变，因此可将ActA作为治疗发育期脑白质损伤疾病的药品，并优选给药剂量为24.5mg/kg。本专利技术具有以下有益结果：1、本专利技术对已知的人源重组蛋白ActA发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。2、本专利技术为早产儿脑白质损伤的治疗提供一种有效的新药品，具有明显的社会效益和经济效益。附图说明图1是建模后第4天(即出生后第9天)未经治疗处理的实验大鼠的HE染色脑组织病理图片，图中，Sham为假手术组，WMI为病理组。图2是用PBS和不同剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗，通过HE染色所得处理后3天(即出生后第9天)的实验大鼠脑组织病理改变的图片，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-1为ActA低剂量处理组，ActA-2为ActA中剂量处理组，ActA-3为ActA高剂量处理组。图3是用PBS和不同剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后6天(即出生后12天)的实验大鼠体重图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-1为ActA低剂量处理组，ActA-2为ActA中剂量处理组，ActA-3为ActA高剂量处理组。图4是用PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后12小时、24小时、48小时，通过TUNEL染色检测所获实验大鼠的胼胝体区细胞凋亡的结果图，其中，A为TUNEL染色检测所获实验大鼠的胼胝体区细胞凋亡图片，B为不同时间点实验大鼠的胼胝体区细胞凋亡指数统计图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量处理组。图5是用PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后1天(即出生后7天)，通过免疫荧光检测所得实验大鼠胼胝体区OPC标志物NG2的表达情况图，图中，Olig2为少突胶质细胞系标志物，Merge为NG2与Olig2的共表达，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量处理组。图6是用PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后6天(即出生后12天)，通过免疫荧光检测所得实验大鼠胼胝体区OL的标志物CC1的表达情况图，图中，Olig2为少突胶质细胞系标志物，Merge为CC1与Olig2的共表达，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量处理组。图7是用PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后22天(即出生后28天)，通过免疫荧光检测所得实验大鼠胼胝体区髓鞘标志物MBP的表达情况图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量实验组。图8是用PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后22天(即出生后28天)和26天(即出生后32天)，通过透射电镜检测所得实验大鼠胼胝体区髓鞘化情况图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量实验组，P28表示出生后28天，P32表示出生后32天。图9是对经PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后的实验大鼠进行Morris水迷宫实验，训练天数与平均潜伏期的变化曲线图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量处理组。图10是对经PBS和中剂量ActA对患WMI的SD大鼠进行处理治疗后的实验大鼠进行Morris水迷宫实验，实验大鼠穿越平台次数图，图中，PBS为溶剂对照组，ActA-2为ActA中剂量实验组。具体实施方式1.实验动物、试剂及实验内容1.1实验动物健康清洁级5日龄新生SD大鼠，雌雄不限，体重10-14克，购自成都达硕实验动物有限公司。1.2主要试剂ActA(R&D，美国)，TUNEL凋亡检测试剂盒(罗氏)，小鼠抗大鼠MBP单抗(Millipore，美国)，小鼠抗大鼠CC1单抗(Abcam)，兔抗大鼠NG2单抗(Millipore，美国)，Cy本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Act A在制备治疗发育期脑白质损伤疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.ActA在制备治疗发育期脑白质损伤疾病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于ActA的剂量...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏小娟，屈艺，母得志，李世平，应俊杰，赵凤艳，唐军，石晶，王华，夏斌，张莉，熊涛，杨小燕，黄凌依，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：四川,51