GOLD优化的CAR T-细胞制造技术

本发明专利技术公开了控制装置，包括RNA去稳定元件(RDE)、RNA控制装置和去稳定元件(DE)，与真核细胞中的嵌合抗原受体(CAR)或其它转基因结合。本发明专利技术还公开了多顺反子载体，用于在控制装置的控制下工程化具有CAR和转基因的宿主真核细胞。这些控制装置可用于优化真核细胞中CAR的表达，以便例如优化效应物功能。还可以将CAR和转基因有效负载工程化到真核细胞中，以便在真核细胞上刺激CAR后表达并递送转基因有效负载。

GOLD-optimized CAR T-cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GOLD优化的CART-细胞参考序列表、表格或计算机程序序列表的正式文本以ASCII格式的文本文件通过EFS-Web与本说明书同时提交，其文件名为“CBIO024_ST25.txt”，创建日期为2017年8月28日，大小为9千字节。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，并在此以其全文形式被援引加入本文。
技术介绍
嵌合抗原受体是人工程受体，其可引导T细胞攻击CAR识别的靶标。例如，已表明CART细胞疗法可有效诱导针对急性淋巴细胞白血病和其它B细胞相关恶性肿瘤的完全应答，并且已经表明可有效实现和维持难治性/复发性急性淋巴细胞白血病的缓解(Maude等人,NEJM,371:1507,2014)。不过，已经在一些患者中观察到与细胞因子释放综合征(CRS)、肿瘤溶解综合征(TLS)、B细胞发育不全和靶向-脱靶毒性(on-tumor,off-targettoxicity)相关的危险副作用。目前有两种现有的策略来控制CAR技术。第一种是可诱导的“杀伤开关”。在这种方式中，将一个或多个启动凋亡途径的“自杀”基因整合到CAR构建体中(Budde等人,PLoS1,2013,doi:10.1371本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种控制转基因的方法，包括步骤：获得包括受体和异源核酸的真核细胞，所述异源核酸包括编码转基因的多核苷酸，可操作地连接至编码RDE的多核苷酸，其中异源核酸被转录以产生编码可操作地连接至RDE的转基因的转录物；将真核细胞暴露于受体的配体，其中受体与配体的结合激活细胞；和，表达转基因，其中在激活细胞后，由转基因制备的多肽的量增加。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.01 US 62/382,565;2017.03.02 US 62/466,060;1.一种控制转基因的方法，包括步骤：获得包括受体和异源核酸的真核细胞，所述异源核酸包括编码转基因的多核苷酸，可操作地连接至编码RDE的多核苷酸，其中异源核酸被转录以产生编码可操作地连接至RDE的转基因的转录物；将真核细胞暴露于受体的配体，其中受体与配体的结合激活细胞；和，表达转基因，其中在激活细胞后，由转基因制备的多肽的量增加。2.根据权利要求1所述的方法，其中受体是嵌合抗原受体或T细胞受体。3.根据权利要求1所述的方法，其中转基因编码细胞因子、FasL、抗体、生长因子、趋化因子、切割多肽或多糖的酶、颗粒酶、穿孔素或检查点抑制剂。4.根据权利要求1所述的方法，其中转基因编码报道子，其中报道子可以成像，并且进一步包括使表达配体的靶位点成像的步骤。5.根据权利要求1所述的方法，其中真核细胞是免疫细胞。6.根据权利要求5所述的方法，其中免疫细胞是T淋巴细胞。7.根据权利要求1所述的方法，其中配体是在靶细胞上发现的抗原。8.根据权利要求7所述的方法，其中靶细胞是癌细胞或细菌，并且进一步包括杀伤靶细胞的步骤。9.根据权利要求1所述的方法，其中RDE由糖酵解酶结合，所述糖酵解酶选自由磷酸甘油醛脱氢酶、烯醇酶、磷酸甘油酸酯激酶、磷酸丙糖异构酶、醛缩酶A或磷酸甘油酸变位酶组成的组。10.根据权利要求9所述的方法，其中真核细胞的激活诱导糖酵解，其中糖酵解的激活导致转录物中由糖酵解酶结合RDE的降低。11.一种双顺反子构建体，包括：编码可操作地连接至第一控制区的CAR的第一多核苷酸，编码可操作地连接至RDE并且可操作地连接至第二控制区的转基因的第二多核苷酸，其中第二核酸被转录以产生编码可操作地连接至RDE的转基因的转录物，和来源于慢病毒的构建体骨架，并且其中第一多核苷酸和第二多核苷酸在构建体中以相反的方向被转录。12.根据权利要求11所述的双顺反子构建体，其中转录物中的RDE可以被糖酵解酶结合。13.根据权利要求12所述的双顺反子构...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·王，G·兹纳，
申请(专利权)人：嵌合体生物工程公司，
类型：发明
国别省市：美国,US