一种用于癌症诊断的分子标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于癌症诊断的分子标志物，本发明专利技术通过高通量测序技术首先发现了RP11‑576I22.2在胃腺癌中表达上调，即通过检测RP11‑576I22.2的表达水平可以判断受试者是否患有胃腺癌。

A Molecular Marker for Cancer Diagnosis

【技术实现步骤摘要】
一种用于癌症诊断的分子标志物
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种用于癌症诊断的分子标志物，所述分子标志物为RP11-576I22.2。
技术介绍
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其全球发病率在所有恶性肿瘤中居第4位，病死率居第2位。每年全球范围新发胃癌近百万例，其中接近50.0％发生在中国。在我国，最近年新发胃癌病例67.9万，在所有肿瘤发病中位于第二，每年胃癌死亡病例49.8万，仅于肝癌，位于第三(WChen,RZheng,PDBaade,etal.CancerstatisticsinChina,2015.CACancerJClin2016.)。胃癌最有效的治疗手段为根治性手术，然而，我国早期胃癌诊治率较低，绝大多数病人往往在就诊时已经是进展期，这部分病人即使接受了根治性手术，术后仍有40.0％～70.0％会复发(JDeng,HLiang,DWang,etal.Investigationoftherecurrencepatternsofgastriccancerfollowingacurativeresection.SURGTODAY2011，41(2):210-215.)。近年来，由于放疗化疗等多种治疗方法的参与，我国胃癌患者生存略有改善，但远不理想，5年生存率仍徘徊在20％～30％左右(LYang:IncidenceandmortalityofgastriccancerinGhina.WorldJGastroentero12006,12(1):17-20.)。因此，胃癌仍旧是危及我国人民生命健康的主要问题之一，不断深入研究胃癌的发生发展机制，寻求有效分子靶标，为预防、治疗胃癌提供新思路、新方法刻不容缓。同其它肿瘤一样，胃癌的发生是一个多基因改变、多种信号参与的复杂演变过程。癌基因或抑癌基因可能通过突变或表观遗传学改变激活相关信号传递，进而一步步引发癌变。基因改变如突变、扩增、缺失、等位基因丧失以及染色体转位等都可能使癌基因激活或抑癌基因失去功能，最终引发肿瘤。同时，胃癌的发生也有基因表观遗传学方面的改变，如异常甲基化，组蛋白的重塑以及非编码RNA的参与(JShi,YPQu,PHou:Pathogeneticmechanismsingastriccancer.WorldJGastroenterol2014,20(38):13804-13819.)。过往对肿瘤发生发展的研究主要关注在蛋白编码基因，然而在基因转录产物中编码蛋白的只占基因组2％，剩下绝大部分为非编码RNA(ncRNAs)。按照长度的不同，ncRNAs分为小分子ncRNA(<200nt)，和长链ncRNA(>200nt)。近年来研究发现，原被认为是转录垃圾的非编码RNA有着各种生物学功能，并在肿瘤的发生发展中起着重要的促进或抑制作用。如miRNA通过与靶基因相互作用下调抑癌基因的表达或增强癌基因的表达，从而参与肿瘤的发生、发展(XYFang,HFPan,RXLeng,etal.LongnoncodingRNAs:novelinsightsintogastriccancer.CANCERLETT2015,356(2PtB):357-366.)。随着1ncRNA在代谢、发育、分化等生理过程中所展现的基因表达调节作用被发现，其引起了研究者们的高度关注。众多研究表明，1ncRNA可通过促进细胞增殖、消除生长抑制、诱导血管生成及抑制调亡等调节作用在肿瘤发生、发展过程中扮演着重要的角色。目前，lncRNA在胃癌发生、发展中的具体作用与主从关系还不清楚，更有众多胃癌相关1ncRNA作用不明。更好地利用1ncRNA这一新的调控体系解析胃癌病理机制并将其应用具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序的方法，检测胃腺癌标本中lncRNA在肿瘤组织和正常组织的表达，发现其中具有明显表达差异的lncRNA，探讨其与胃腺癌的发生之间的关系，从而为胃腺癌的诊断及靶向治疗寻找更好的途径和方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测RP11-576I22.2的试剂在制备诊断胃腺癌的产品中的应用。进一步，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术检测RP11-576I22.2表达水平的试剂。进一步，通过反转录PCR检测RP11-576I22.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增RP11-576I22.2的引物，通过实时定量PCR检测RP11-576I22.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增RP11-576I22.2的引物，通过原位杂交检测RP11-576I22.2表达水平的试剂包括特异性识别RP11-576I22.2的探针，通过芯片技术检测RP11-576I22.2表达水平的试剂包括特异性识别RP11-576I22.2的探针。进一步，通过实时定量PCR检测RP11-576I22.2表达水平的特异性扩增RP11-576I22.2的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。进一步，所述产品包括芯片、试剂盒。所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的特异性识别RP11-576I22.2的寡核苷酸探针，所述试剂盒包括特异性扩增RP11-576I22.2的引物、特异性识别RP11-576I22.2的寡核苷酸探针或芯片。特异性识别RP11-576I22.2的寡核苷酸探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。所述固相载体包括无机载体和有机载体，所述无机载体包括但不限于有硅载体、玻璃载体、陶瓷载体等；所述有机载体包括聚丙烯薄膜、尼龙膜等。许多表达检测方法使用分离的RNA。起始材料典型地是从生物样品，例如分别从肿瘤或肿瘤细胞系，以及相应的正常组织或细胞系分离的总RNA。如果RNA的来源是原发性肿瘤，则可以从冷冻的或保存的石蜡包埋并固定的(例如福尔马林固定的)组织样品(例如病理学家指导的组织核心样品)中提取RNA(例如mRNA)。RNA提取的一般方法是本领域熟知的。特别地，可以使用来自商业制造商，例如TIANGEN的纯化试剂盒、缓冲剂套组和蛋白酶进行RNA分离，按照制造商的说明进行。其它可商购的RNA分离试剂盒可包括MASTERPURETMCompleteDNA和RNA纯化试剂盒(Epicentre,Madison,Wis.)和ParaffinBlockRNA分离试剂盒(Ambion,Austin,TX)。例如，可以使用RNAStat-60(Tel-Test,Friendswood,TX)从组织样品中分离总RNA。例如，可以使用高纯FFPERNAMicrokit,货号04823125001(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测RP11‑576I22.2的试剂在制备诊断胃腺癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测RP11-576I22.2的试剂在制备诊断胃腺癌的产品中的应用。2.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术检测RP11-576I22.2表达水平的试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过反转录PCR检测RP11-576I22.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增RP11-576I22.2的引物，通过实时定量PCR检测RP11-576I22.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增RP11-576I22.2的引物，通过原位杂交检测RP11-576I22.2表达水平的试剂包括特异性识别RP11-576I22.2的探针，通过芯片技术检测RP11-576I22.2表达水平的试剂包括特异性识别RP11-576I22.2的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过实时定量PCR检测RP11-576I22.2表达水平的特异性扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：董东，郑骏年，李曼，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32