本发明专利技术涉及一种长链非编码RNA lncLCIR‑1作为肺癌分子标志物的应用。本发明专利技术首次发现lncLCIR‑1在肺癌组织中稳定高表达，且放疗后lncLCIR‑1水平下降，表明在肺癌中lncLCIR‑1是潜在的预测放疗疗效的指标，是一种新的肺癌分子标志物。本发明专利技术中lncLCIR‑1检测试剂在制备诊断肺癌患者预后的试剂中的应用，主要是将lncLCIR‑1作为检测标志物，制备相应的荧光定量PCR检测试剂盒，用于检测肺癌患者放疗的预后情况。另外，本发明专利技术提供的siRNA能够抑制lncLCIR‑1的表达，进而调节肺癌细胞周期，引起肺癌细胞G1期阻滞，抑制肺癌细胞的增殖，在制备治疗肺癌药物中具有重要意义。
Application of a Long-chain Non-coding RNA lncLCIR-1 as a Molecular Marker of Lung Cancer
【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用
本专利技术涉及一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，属于分子生物学
技术介绍
在科学技术异常发达的当下，恶性肿瘤依旧是威胁着人类生命和健康的一大杀手，而肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤，也是我国发病率、死亡率最高的肿瘤。放疗作为肿瘤常用且有效的治疗手段，在肺癌治疗中的地位举足轻重，然而患者的长期生存率仍有待提高。并且不同的患者对放疗的敏感性存在个体差异，甚至有部分患者在治疗的过程中出现放疗抵抗，而临床上缺乏统一的分子标志物预测患者对放疗的疗效及预后。因此，研究肺癌放疗过程中的分子变化，并探讨其在肺癌发生发展中的作用机制，有助于指导临床筛选患者，进行个体化治疗，改善肺癌患者的预后。放疗可以通过引起细胞周期阻滞、促进细胞凋亡及改变肿瘤微环境等方式消除肿瘤细胞，放疗后的DNA双链断裂，被认为是主要的致死性损伤。然而，细胞中存在修复损伤的机制，如同源重组修复、非同源末端连接等，正是肿瘤细胞的这种自我修复能力介导了放疗抵抗。既往研究多集中在与损伤修复相关的蛋白质，近年来非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)在DNA损伤中的作用逐渐成为新的研究热点之一。长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)作为非编码RNA的重要一员，是指长度大于200个核苷酸，并且不编码蛋白质的RNA。研究表明lncRNA参与多种生物学过程，在肿瘤的发生、发展中也扮演着重要的角色，可以影响肿瘤细胞的恶性表型。并且，越来越多的研究认为功能性lncRNA是潜在的诊断、判断预后的分子标志物，甚至有望成为新的治疗靶标。近年来随着测序技术的飞速发展，人们发现了大量的lncRNA，但大部分lncRNA的功能尚有待探索。已经有报道部分lncRNA可以影响肿瘤细胞的放疗敏感性，但多集中在生殖系统和消化系统肿瘤，lncRNA在肺癌放疗中的作用研究甚少。LncRNA作为调节分子，可以在转录水平、转录后水平及表观遗传学层面调节基因的表达。而lncRNA的作用机制通常与它在细胞内的定位相关，细胞核内的lncRNA可以与转录因子或RNA聚合酶等结合调控基因的表达，也可以通过调控DNA或组蛋白的表观遗传修饰影响基因的表达。细胞质内的lncRNA可以通过与miRNA相互作用、调控信使RNA(messagerRNA，mRNA)的稳定性及影响蛋白质翻译等方式参与基因表达调控。研究lncRNA在肺癌放疗中的变化，明确它在肺癌细胞中的功能，并探索它发挥作用的机制，可以为肿瘤治疗提供新的思路，具有临床应用价值。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用。本专利技术中的长链非编码RNAlncLCIR-1基因位于人类第12号染色体，全长3170nt，在肺癌组织中稳定高表达，放疗后水平下降，可应用于肺癌治疗预后诊断产品或者肺癌治疗药物的制备。本专利技术的技术方案如下：一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，所述应用包括长链非编码RNAlncLCIR-1的检测试剂在制备诊断肺癌患者预后的试剂中的应用或长链非编码RNAlncLCIR-1的抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，其中，长链非编码RNAlncLCIR-1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。根据本专利技术优选的，所述肺癌的亚型包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌。根据本专利技术优选的，所述诊断肺癌患者预后的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。进一步优选的，所述实时荧光定量PCR检测试剂包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNAlncLCIR-1设计的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。根据本专利技术优选的，所述治疗肺癌的药物包括但不限于核酸分子、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽或干扰慢病毒，均为长链非编码RNAlncLCIR-1的抑制剂。进一步优选的，所述核酸分子包括但不限于：小干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)短发夹RNA(shRNA)、或反义寡核苷酸。一种诊断肺癌患者预后的实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNAlncLCIR-1设计的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。进一步优选的，所述检测试剂盒还包括内参基因β-actin的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示。进一步优选的，所述检测试剂盒还包括荧光染料、实时荧光定量PCR反应液。所述实时荧光定量PCR反应液包括dNTPs、MgCl2、TaqDNA聚合酶和缓冲液，所述荧光染料优选SYBRGreenI。一种治疗肺癌的小干扰RNA核酸分子药物，含有抑制长链非编码RNAlncLCIR-1表达的小干扰RNA，所述小干扰RNA的正义链核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，反义链核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，或者，所述小干扰RNA的正义链核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，反义链核苷酸序列如SEQIDNO.9所示。有益效果本专利技术首次发现lncLCIR-1在肺癌组织中稳定高表达，肺癌组织与正常肺组织中lncLCIR-1表达差异有统计学显著差异，且放疗后肺癌组织中lncLCIR-1水平下降，表明在肺癌中lncLCIR-1是潜在的预测放疗疗效的指标，也可能成为肺癌精准治疗的新靶点，是一种新的肺癌分子标志物。本专利技术中lncLCIR-1检测试剂在制备诊断肺癌患者预后的试剂中的应用，主要是将lncLCIR-1作为检测标志物，制备相应的荧光定量PCR检测试剂盒，用于检测肺癌患者放疗的预后情况，操作简便，稳定性好，灵敏度高。另外，本专利技术提供的siRNA能够抑制lncLCIR-1的表达，进而调节肺癌细胞周期，引起肺癌细胞G1期阻滞，抑制肺癌细胞的增殖，同时抑制肺癌细胞的侵袭转移能力，在制备治疗肺癌药物中具有重要意义。附图说明图1是肺癌细胞A549、H460、H1975、H1299在不同放疗剂量下的存活率曲线；图中，纵坐标为细胞存活率，横坐标为放疗剂量，(a)为A549细胞在不同放疗剂量下的存活率曲线，(b)为H460细胞在不同放疗剂量下的存活率曲线，(c)为H1975细胞在不同放疗剂量下的存活率曲线，(d)为H1299细胞在不同放疗剂量下的存活率曲线；图2是肺癌细胞A549和H460放疗后共同上调、共同下调的非编码RNA热图；图中，从上至下前23个非编码RNA为共同上调的非编码RNA，后11个非编码RNA为共同下调的非编码RNA；图3是A549和H460细胞放疗后非编码RNA的变化图；图中，横坐标为非编码RNA，纵坐标为非编码RNA的相对表达量，(a)为A549细胞非编码RNA的变化图，(b)为H460细胞非编码RNA的变化图；图4是癌组织与癌旁组织中五种非编码RNA表达差异图；图中，纵坐标为相对表达量，横坐标中adjacent为癌旁组织，tumor为癌组织，A-E分别代表SNORD3A、RP11-1275H24.1、lnc-RHEBL1-1、lnc-KIAA0753-1、lncLCIR-1在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种长链非编码RNA lncLCIR‑1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述应用包括长链非编码RNA lncLCIR‑1的检测试剂在制备诊断肺癌患者预后的试剂中的应用或长链非编码RNA lncLCIR‑1的抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，其中，长链非编码RNA lncLCIR‑1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述应用包括长链非编码RNAlncLCIR-1的检测试剂在制备诊断肺癌患者预后的试剂中的应用或长链非编码RNAlncLCIR-1的抑制剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，其中，长链非编码RNAlncLCIR-1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述肺癌的亚型包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌。3.如权利要求1所述的一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述诊断肺癌患者预后的试剂为实时荧光定量PCR检测试剂。4.如权利要求3所述的一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述实时荧光定量PCR检测试剂包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNAlncLCIR-1设计的特异性引物，特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。5.如权利要求1所述的一种长链非编码RNAlncLCIR-1作为肺癌分子标志物的应用，其特征在于，所述治疗肺癌的药物包括核酸分子、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽或干扰慢病毒。6.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨明，寇培思，张娜莎，
申请(专利权)人：山东省肿瘤防治研究院山东省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：山东,37
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