Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、组合物及试剂盒制造技术

Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、组合物及试剂盒；Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。

Application, Composition and Kit of Hel112 Helinase in Polymerase Chain Reaction

【技术实现步骤摘要】
Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、组合物及试剂盒
本申请涉及生物
，特别是涉及一种Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物及包括该组合物的试剂盒。
技术介绍
聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)是分子生物学中一种核酸扩增的重要技术手段，已广泛用于临床的疾病诊断和预防中。PCR检测结果的准确性和准确度主要由扩增特异性、灵敏度和扩增效率等三项技术指标决定，为了改善PCR的扩增效果，研究人员通常设法提高该三方面的技术指标，以提高PCR临床检测的可靠性。在上述三项的技术指标中，显著的扩增特异性是高灵敏度和高扩增效率的前提，也是改善PCR检测准备性的主要研究方向。在PCR技术专利技术初期，为了提高PCR的扩增特异性，在PCR循环开始，反应液加热到变性温度时加入DNA聚合酶，以此方法改善PCR特异性，随着技术的进步，逐渐发展到石蜡物理分隔反应组分、抗体修饰DNA聚合酶、化学修饰DNA聚合酶、修饰引物等等方法加以实现，在一定程度上提高了PCR扩增特异性，改善了扩增效果，但在一些情况下仍然存在非特异性扩增。针对DNA聚合酶进行着手以提高PCR扩增特异性，为目前最常用的提高PCR特异性方法，包括化学修饰DNA聚合酶和在反应体中加入DNA聚合酶抗体。PCR中出现非特异性扩增的原因主要由于DNA聚合酶在较低的温度下，如室温，仍然具有较强的活性，导致在反应体系配制过程和进入PCR循环的退火阶段中，引物之间或者引物与模板非目的序列进行配对，经过PCR循环后，非目的序列获得大量扩增，出现了明显的副产物。利用化学方法，对DNA聚合酶进行修饰，可封闭DNA聚合酶活性，避免了反应体系配制过程中出现扩增反应，从而减少非特异产物产生；同理，DNA聚合酶抗体同样也可封闭DNA聚合酶活性，以防止非特异产物产生，同样可改善PCR的扩增特异性。但是，上述两种方法对DNA聚合酶活性封闭不彻底，仍然存在一定程度的非特异性扩增，而且上述两种方法DNA聚合酶的制备工艺复杂，生产条件苛刻，成本较高，进一步限制其应用。因此，仍需要一种方法进一步提高PCR的扩增特异性，以进一步提高PCR的检测准确性。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够增强聚合酶链式反应扩增特异性的Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用、增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物及试剂盒。Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。在其中一个实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为0.001ng/μl至10ng/μl。在其中一个实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为1ng/μl至4ng/μl。在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1。在其中一个实施例中，Hel112解旋酶为SsoHel112解旋酶。一种用于增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物，所述组合物包括Hel112解旋酶，Hel112解旋酶用于添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的表达基因的碱基序列为SEQIDNO.2。在其中一个实施例中，所述Hel112解旋酶的制备方法包括如下步骤：将Hel112解旋酶的表达基因插入到大肠杆菌表达载体pET28a的NheI/BamHI位点，构建质粒pET28a-hel112；将质粒pET28a-hel112转化到Rosetta大肠杆菌宿主菌中；将Rosetta大肠杆菌宿主菌置于含有氯霉素和卡那霉素的培养基中进行培养，向培养基中加入IPTG以诱导培养制备得到所述Hel112解旋酶。在其中一个实施例中，所述向培养基中加入IPTG以诱导培养制备得到所述Hel112解旋酶，具体为：向培养基中加入IPTG以诱导培养；收集诱导培养后的Rosetta大肠杆菌宿主菌，BufferA冲悬，破碎细胞；离心取上清，80℃保温20分钟，离心取上清，上清加载至BufferA平衡的Ni层析柱，BufferA洗涤层析柱后，25mM-500mM咪唑进行梯度洗脱，收集洗脱峰；收集的样品于BufferA透析；透析后的样品加载于含HeparinSepharose介质的层析柱，用BufferA洗涤层析柱，100mM-1MKCl进行梯度洗脱，收集洗脱峰，制得所述Hel112解旋酶的溶液。在其中一个实施例中，在制得所述Hel112解旋酶的溶液之后，所述Hel112解旋酶的制备方法包括如下步骤：将所述Hel112解旋酶的溶液冷冻干燥制备得到Hel112解旋酶的干燥粉。一种PCR试剂盒，其特征在于，包括如上任一实施例中所述的用于增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物。上述Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，通过将Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，能够增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。附图说明图1为一实施例的Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用后的电泳图。具体实施方式为了便于理解本申请，为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请，附图中给出了本申请的较佳实施方式。但是，本申请可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本申请的公开内容理解的更加透彻全面。本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本申请。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。一实施例中，Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。上述Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，通过将Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，能够增强聚合酶链式反应扩增特异性。此外，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，还能够提高PCR的反应速率，提高PCR目标产物的产量。一实施例中，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1。一实施例中，所述Hel112解旋酶的表达基因的碱基序列为SEQIDNO.2。一实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为0.001ng/μl至10ng/μl。一实施例中，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为0.001ng/μl至4ng/μl。再如，Hel112解旋酶在PCR的反应体系本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。

【技术特征摘要】
1.Hel112解旋酶在聚合酶链式反应中的应用，Hel112解旋酶添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为0.001ng/μl至10ng/μl。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，Hel112解旋酶在PCR的反应体系中的浓度为1ng/μl至4ng/μl。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1；或，所述Hel112解旋酶的表达基因的碱基序列为SEQIDNO.2。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，Hel112解旋酶为SsoHel112解旋酶。6.一种用于增强聚合酶链式反应扩增特异性的组合物，其特征在于，所述组合物包括Hel112解旋酶，Hel112解旋酶用于添加至PCR的反应体系中，以增强聚合酶链式反应扩增特异性。7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述Hel112解旋酶的表达基因的碱基序列为SEQIDNO.2；或，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1。8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述Hel112解旋酶的制备方法包括如下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚敬文，
申请(专利权)人：深圳市刚竹医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44