反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法，包括以下步骤：将供试品用甲醇溶液溶解；使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；高效液相色谱仪设置如下：以甲醇(A)‑0.1～0.5％醋酸水溶液(B)为流动相，洗脱梯度为：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；流速为0.5ml/min；柱温25℃；检测波长320nm；进样量5μl。本发明专利技术高效液相色谱响应值高，检测误差小，精密度和准确性都较好，适合于混合体系中紫萁酮含量的含量测定。

Detection of Standard Substances of Zizirone by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography

【技术实现步骤摘要】
反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法
本专利技术涉及一种紫萁酮标准物质的检测方法，更具体地说，本专利技术涉及一种反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法。
技术介绍
紫萁酮分子式为：C10H10O3，分子量178，CAS号为37079-84-8，存在于大型真菌桦褐孔菌以及中药紫萁贯众等中，属于酮类成分，其结构如下：具文献报道紫萁酮有抗氧化及杀伤癌细胞的药理活性，在紫萁贯众中紫萁酮检测时有报道采用乙腈和磷酸水溶液作为流动相进行洗脱，而目前尚未有桦褐孔菌中紫萁酮相关检测方法的文献报道。因此，有必要探索出更易操作、安全性更高、准确的紫萁酮含量测定方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种反相高效液相色谱法检测天然产物混合体系中紫萁酮标准物质的检测方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法，用于检测天然产物混合体系中的紫萁酮标准物质，包括以下步骤，(1)将供试品用甲醇溶液溶解；(2)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；(3)高效液相色谱仪设置如下：以甲醇(A)-0.1～0.5％醋酸水溶液(B)为流动相，洗脱梯度为：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；流速为0.5ml/min；柱温25℃；检测波长320nm；进样量5μl。作为优选的，所述步骤(1)中，所用的溶剂为HPLC级别甲醇、醋酸及超纯水，样品配制浓度为0.1mg/ml～1.0mg/ml。作为优选的，所述步骤(3)中，所用的流动相为甲醇-0.5％醋酸水溶液。作为优选的，所述步骤(3)中所用检测器是紫外检测器或DAD检测器。本专利技术相对现有技术相比具有以下优点：(1)高效液相色谱响应值高，检测误差小，精密度和准确性都较好；(2)方法操作简便、实用性强，适合于混合体系中紫萁酮含量的含量测定；(3)方法流动相中取消了现有技术中常用的磷酸，选择了低浓度醋酸。附图说明图1为本专利技术反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法实施例1的样品图谱，流动相中醋酸水溶液的浓度为0.1％；图2为本专利技术反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法实施例2的样品图谱，流动相中醋酸水溶液的浓度为0.5％；图3为本专利技术反相高效液相色谱法检测桦褐孔菌粗提物中紫萁酮标准物质的检测方法实施例3的样品图谱；具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细描述，但本专利技术不仅限于所述实施例。实施例1：色谱条件与系统适应性：色谱柱使用AgilentExtend-C18(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇(A)，0.1％醋酸水(B)；梯度洗脱条件：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；柱温：25℃；检测波长：320nm；流速：0.5mL/min；进样量：5μL。供试品溶液的制备：精密称定紫萁酮0.5mg，精密加入色谱甲醇1.0ml溶解，即得。测定法：精密吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果：测得紫萁酮的归一化法含量为99.5％，峰形对称。样品图谱见图1。实施例2：色谱条件与系统适应性：色谱柱使用AgilentExtend-C18(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇(A)，0.5％醋酸水(B)；梯度洗脱条件：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；柱温：25℃；检测波长：320nm；流速：0.5mL/min；进样量：5μL。供试品溶液的制备：精密称定紫萁酮0.5mg，精密加入色谱甲醇1.0ml溶解，即得。测定法：精密吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果：测得紫萁酮的归一化法含量为99.5％，峰形对称。样品图谱见图2。实施例3：色谱条件与系统适应性：色谱柱使用AgilentExtend-C18(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇(A)，0.5％醋酸水(B)；梯度洗脱条件：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；柱温：25℃；检测波长：320nm；流速：0.5mL/min；进样量：5μL。供试品溶液的制备：取桦褐孔菌粉末约5.0000g，加入100mL的甲醇，超声提取1h，抽滤，滤液减压回收至干，再用4mL色谱甲醇溶解，过0.45μM滤膜，即得。测定法：精密吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果：测得桦褐孔菌中紫萁酮的含量为0.107％，峰形对称，粗提取实现基线分离。样品图谱见图3。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，本专利技术的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本专利技术思路下的技术方案均属于本专利技术的保护范围，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法，用于检测天然产物混合体系中的紫萁酮标准物质，其特征在于，包括以下步骤，(1)将供试品用甲醇溶液溶解；(2)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；(3)高效液相色谱仪设置如下：以甲醇(A)‑0.1～0.5％醋酸水溶液(B)为流动相，洗脱梯度为：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；流速为0.5ml/min；柱温25℃；检测波长320nm；进样量5μl。

【技术特征摘要】
1.一种反相高效液相色谱法检测紫萁酮标准物质的检测方法，用于检测天然产物混合体系中的紫萁酮标准物质，其特征在于，包括以下步骤，(1)将供试品用甲醇溶液溶解；(2)使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；(3)高效液相色谱仪设置如下：以甲醇(A)-0.1～0.5％醋酸水溶液(B)为流动相，洗脱梯度为：0～2min(20％A→20％A)，2～20min(20％A→45％A)，20～40min(45％A→100％A)，40～50min(100％A→20％A)；流速为0.5ml/min；柱温25℃；检测波...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春明，王晶，张勇，时东方，
申请(专利权)人：长春师范大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22