一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法技术

本发明专利技术涉及食品安全检测领域，具体为一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法；先取提取液，将提取液通过活化后的固相萃取柱，收集洗脱液，将洗脱液烘干加入甲酸水‑甲醇溶液充分旋转后进行滤膜过滤得到过滤液，将过滤液采用液相色谱‑串联质谱进行定性、定量测定；本发明专利技术提供的方法，方法灵敏度高，检出限相比国际同类兽药检测方法更低。

A High-throughput Detection Method for Multi-group Veterinary Drug Residues in Fresh Milk

【技术实现步骤摘要】
一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法
本专利技术涉及食品安全检测领域，具体为一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法。
技术介绍
生鲜乳中兽药残留直接影响人体健康，目前常用的ELISA法、Delvo法等试剂盒，虽然具有快速、方便、易于实现等优点，但其仅能作出生鲜乳中是否有兽药残留，残留是否超标或者有哪类兽药残留的判断，而对生鲜乳中实际存在的成份、含量难以定论。超高效液相色谱串联质谱技术(UPLC-MS/MS)是以质谱检测器为主要识别手段，集高效液相色谱分离过程与质谱高灵敏度、高选择过程于一体的定量分析方法。近年来，该项技术在动物性食品中多兽药残留分析过程中越来越受到重视和应用，不断出现一批新型多残留分析技术。但是现有检测方法中存在兽药种类单一、前处理复杂、定量难的技术难题，亟待开发一种多组类兽药残留同时定量分析方法。
技术实现思路
为了解决以上的技术问题，本专利技术提供一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法；本专利技术是这样实现的：一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，先取提取液，将提取液通过活化后的固相萃取柱，收集洗脱液，将洗脱液烘干加入甲酸水-甲醇溶液充分旋转后进行滤膜过滤得到过滤液，将过滤液采用液相色谱-串联质谱进行定性、定量测定。进一步的，提取液的提取方法包括：将待检测样品加入乙腈水溶液，所述待检测样品与所述乙腈水溶液的质量比为1：6，混合，涡旋，离心后取上清液。进一步的，洗脱液的收集方法为将所述提取液以每3～4秒1滴的流速通过PRIMEHLB固相萃取柱。进一步的，洗脱液的烘干方法为用40～50℃氮气进行吹干。进一步的，甲酸水-甲醇溶液体积比为1:1，含量为1.00ml0.2％。进一步的，乙腈水溶液为乙腈与实验室用一级水按照体积比4:1进行混合均匀的药品溶液。进一步的，色谱条件为：色谱柱：1.7μm，2.1*50mm；流速：0.3ml/min；进样体积：2μl；柱温：40℃。进一步的，流动相与度洗脱时间为：流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：甲醇；洗脱时间0～3.0min，流动相B从10％线性增长至80％；洗脱时间3.0～4.0min，流动相B保持80％；洗脱时间4.0～4.1min，流动相B从80％降至10％；洗脱时间4.1～5.0min，流动相B保持10％。进一步的，流动相与度洗脱时间为：流动相A：水，流动相B：甲醇；洗脱时间为流动相B从10％线性增长至80％；洗脱时间3.0～4.0min，流动相B保持80％；洗脱时间4.0～4.1min，流动相B从80％降至10％；洗脱时间4.1～5.0min，流动相B保持10％。进一步的，质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；毛细管电压：3.0KV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：800L/h。上述方案的有益效果：本专利技术提供的方法，方法灵敏度高，检出限相比国际同类兽药检测方法更低。具体实施方式下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。1.试剂与材料1.1标准品本专利技术中所有37种兽药都属于兽药标准品，标准品为以下：磺胺嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉、环丙沙星、达氟沙星恩诺沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、二氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、金刚烷胺、金刚乙胺、甲氧苄啶、阿奇霉素、多西环素、喹乙醇、乙酰甲喹、呋喃他酮、呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃西林、氯霉素、氟苯尼考、地塞米松、阿莫西林、氨苄西林、林可霉素、替米考星、红霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝达唑1.2试剂乙腈(Acetonitrile，99.9％)、甲醇(Methanol，99.9％)、乙腈-水溶液，其中乙腈、甲醇均为色谱级。1.3标准溶液配制分别准确称取适量标准品(精确至0.1mg)，用乙腈溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，-18℃冷冻避光保存。中间标准溶液配制：分别移取1mL标准储备溶液(4.5)与10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL的中间标准溶液，0℃～4℃冷藏避光保存。1.4固相萃取柱固相萃取柱PRIMEHLB，规格为6CC,200mg。实施例一生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法的建立2.实验方法2.1样品提取与净化称取5g试样于50mL离心管中，加乙腈水溶液15ml,充分混合，涡旋,10000r/min离心5min。取上述上清液5ml，以每3～4秒1滴的流速通过PRIMEHLB固相萃取柱。收集洗脱液4ml，40℃氮气吹干加入1.00ml0.2％甲酸水-甲醇(1:1)溶液，充分涡旋，用0.2μm滤膜过滤，滤液供高效液相色谱-串联质谱仪测定。2.2色谱条件A组色谱柱：BEHC18柱，2.1×50mm，1.7μm；柱温：40℃；进样量：2μL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液(含5mmol/L乙酸铵)；流动相B：甲醇；流速：0.30mL/min；洗脱梯度：0～1.0min，90％A，1.0～3.0min，90％A，3.0～4.0min，20％，4.0～4.1min，90％A，4.1～5.0min，90％A。B组色谱柱：BEHC18柱，2.1×50mm，1.7μm；柱温：40℃；进样量：2μL；流动相：A：水；B：甲醇；流速：0.30mL/min；洗脱梯度：0～1.0min，90％A，1.0～3.0min，90％A，3.0～4.0min，20％，4.0～4.1min，90％A，4.1～5.0min，90％A。2.3质谱条件A组质谱条件：离子化模式：ESI+；毛细管电压：3.0KV；锥孔电压：30～90V；去溶剂温度：350℃；去溶剂气流速：800L/h；载气，高纯氮(>99.999％)。B组质谱条件：电离模式：电喷雾负离子；毛细管电压：2.0kV；离子源温度：150℃；去溶剂温度：350℃；载气，高纯氮(>99.999％)。检测方式：多反应监测.3.定性、定量离子条件3.1.A组定性、定量离子对3.2.B组定性、定量离子对4.定性方法通过试样色谱图的保留时间与相应标准标准溶液的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准溶液保留时间的相对偏差不大于1.5％；试样特征例子的相对离子丰度与标准溶液的相对离子丰度一致，相对离子丰度偏差不超过下表的规定，则可判断试样中待测组分的存在。5.定量方法取试样溶液、标准溶液上机测定，外标法定量，标准溶液及试样中峰面积应在仪器检测的线性范围内。6.结果计算用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式(1)计算样品中残留量式中：x——试样中的待测组分的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；C——由标准曲线而得的样液中待测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V——样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m——样品称样量，单位为克(g)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，先取提取液，将提取液通过活化后的固相萃取柱，收集洗脱液，将洗脱液烘干加入甲酸水‑甲醇溶液充分旋转后进行滤膜过滤得到过滤液，将过滤液采用液相色谱‑串联质谱进行定性、定量测定。

【技术特征摘要】
1.一种生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，先取提取液，将提取液通过活化后的固相萃取柱，收集洗脱液，将洗脱液烘干加入甲酸水-甲醇溶液充分旋转后进行滤膜过滤得到过滤液，将过滤液采用液相色谱-串联质谱进行定性、定量测定。2.根据权利要求1所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，所述提取液的提取方法包括：将待检测样品加入乙腈水溶液，所述待检测样品与所述乙腈水溶液的质量比为1：6，混合，涡旋，离心后取上清液。3.根据权利要求1所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，所述洗脱液的收集方法为将所述提取液以每3～4秒1滴的流速通过PRIMEHLB固相萃取柱。4.根据权利要求1所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，所述洗脱液的烘干方法为用40～50℃氮气进行吹干。5.根据权利要求1所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，所述甲酸水-甲醇溶液体积比为1:1，含量为1.00ml0.2％。6.根据权利要求2所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方法，其特征在于，所述乙腈水溶液为乙腈与实验室用一级水按照体积比4:1进行混合均匀的药品溶液。7.根据权利要求1所述的生鲜乳中多组类兽药残留的高通量检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军伟，类兴梅，王冰，季加才，侯新贵，
申请(专利权)人：山东润达检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37