一种从红茶中提取茶黄素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从红茶中提取茶黄素的方法，步骤如下：依次进行乙醇提取和乙酸乙酯萃取后，利用MCl反相色谱柱去除叶绿素；再利用硅胶柱，采用乙酸乙酯‑乙酸溶液进行洗脱；继续利用MCl反相色谱柱，采用甲醇‑乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液；最后利用C18柱，采用甲醇‑乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到高纯度茶黄素。本发明专利技术以红茶为原料，经过醇提、萃取、脱色、除杂、提纯等步骤，提取红茶中的茶黄素，该方法克服了现有天然茶黄素提取方法得率低和纯度低的缺陷和不足，所得红茶总茶黄素的得率和纯度高；且步骤简单，不涉及剧毒试剂，所需试剂为常见化学试剂，且可重复回收利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物提取
更具体地，涉及一种从红茶中提取茶黄素的方法。
技术介绍
茶黄素(theaflavins，TFs)是在红茶发酵过程中茶多酚物质氧化形成的主要色素物质，其中茶黄素、其中茶黄素(TF1)、茶黄素-3-没食子酸酯(TF2A)、茶黄素-3＇-没食子酸酯(TF2B)和茶黄素-3，3＇-双没食子酸酯(TF3)是4种最主要的茶黄素。茶黄素不仅是红茶滋味和汤色最重要的影响因子，而且具有治疗心血管系统疾病、抗炎、抗氧化、抗病毒、增强免疫力、降血糖、抗肿瘤等多种药理功效，是一类极具开发潜力的产物。目前，从红茶中提取茶黄素粗提物的方法主要有：(1)Collier法，该方法主要步骤是：样品用热水浸提→过滤→浓缩→干燥→甲醇、水溶解→三氯甲烷萃取(除去杂质)→水相减压浓缩→乙酸乙酯反复萃取→硫酸镁脱水→蒸馏至干→茶黄素粗提物。该方法工艺技术比较简单，但有机溶剂用量多。(2)Ullah法，该方法的主要步骤是：样品用水浸提→过滤→滤液减压浓缩→三氯甲烷萃取(除去咖啡碱等杂质)→磷酸二氢钠和乙酸乙酯混合萃取→乙酸乙酯经减压浓缩干燥，得茶黄素粗提物。该方法工艺简单，只需一次萃取，分离效果较好，但使用了有毒有机溶剂。4种主要的茶黄素单体TF1、TF2A、TF2B、TF3的分离纯化的方法主要包括纤维素柱层析、葡聚糖凝胶(SephadexLH-20)柱层析、硅胶柱层析、聚酰胺柱层析和高速逆流色谱等。早在20世纪50年代，Takino等应用硅胶层析初步分离，纤维素柱层析精制的方法成功地分离得到TF3、TF1a、TFlb。Crispin等(1971年)，竹尾忠一等(1973年)，Collier等(1973年)用SephadexLH-20柱层析或者SephadexLH-20联合硅胶柱层析，分离得到TF3、TF2、TF1。硅胶柱层析法、纤维素柱层析法、SephadexLH-20柱层析法均只能分离得到TF1单体和TF3单体，无法分离同分异构体的TF2A和TF2B。SephadexLH-20柱层析法成本高，分离量少，分离时间长，并且多次使用时会造成不可逆吸附污染，分离效果变差。江和源等(2000)首次利用高速逆流色谱分离茶黄素；杨子银等(2008)通过增加NaHCO3的前处理步骤以及优化洗脱溶剂系统等对高速逆流色谱方法进行了改进，较好地分离了茶黄素单体；王坤波等(2008)优化高速逆流色谱分离获得4种茶黄素单体。高速逆流色谱法虽然可以分离制备得到四种主要茶黄素单体，分离时间较柱层析法短，但是仍然存在制备量较小、仪器昂贵等缺点。另外，目前，聚酰胺柱层析法在茶黄素分离纯化中也有应用，具有分离效果好、填料价格低廉、制备量大和产品纯度高的特点，但是耗时量相对较长。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有天然茶黄素提取的得率低和纯度低，大量使用有毒试剂等缺陷和不足，提供一种从红茶中提取天然茶黄素的方法。该方法以红茶为原料，经过醇提、萃取、脱色、除杂、提纯等步骤，对红茶中的总茶黄素进行提取，此提取方法步骤简单，所使用的试剂不涉及剧毒有机溶剂，红茶茶黄素的得率和纯度均较高。本专利技术的目的是提供一种从红茶中提取茶黄素的方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种从红茶中提取茶黄素的方法，包括如下步骤：S1.醇提：采用乙醇溶液对红茶进行提取，得到红茶提取液；S2.乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯对红茶提取液进行萃取，得到乙酸乙酯层提取物；S3.脱色：利用MCl反相色谱柱将S2所得乙酸乙酯层提取物去除叶绿素，得到脱色茶黄素粗品；S4.乙酸乙酯洗脱：S3所得脱色茶黄素粗品上硅胶柱，采用乙酸乙酯-乙酸溶液进行洗脱，收集茶黄素段的洗脱液，得到茶黄素粗品；S5.除杂：S4所得的茶黄素粗品上MCl反相色谱柱，采用甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到纯化茶黄素；S6.提纯：S5所得的茶黄素粗品上C18柱，采用不同浓度的甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到高纯度茶黄素。更具体地，上述从红茶中提取茶黄素的方法包括如下步骤：S1.醇提：采用乙醇溶液对红茶进行回流提取，所得提取液进行旋转浓缩除去乙醇，得到红茶浓缩提取液；S2.乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯对红茶浓缩提取液进行萃取，旋转浓缩除去乙酸乙酯，冷冻干燥得到乙酸乙酯层提取物；S3.脱色：取乙酸乙酯层提取物用甲醇溶液溶解，通过MCl反相色谱填料短柱吸附脱除叶绿素，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥得到脱色茶黄素粗品；S4.乙酸乙酯洗脱：取S3所得脱色茶黄素粗品用甲醇溶解后，采用干法拌硅胶，装硅胶柱后，采用乙酸乙酯-乙酸溶液进行洗脱，通过液相色谱检测收集茶黄素段的洗脱液，收集合并洗脱液并浓缩干燥，得到茶黄素粗品；S5.除杂：取S4所得的茶黄素粗品用甲醇-乙酸溶液溶解样品后，采用MCl反相色谱柱，通过不同浓度的甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，通过液相色谱检测除去杂质，再用甲醇-乙酸溶液洗脱收集茶黄素段的洗脱液，合并茶黄素段洗脱液并浓缩干燥，得到纯化茶黄素；S6.提纯：取S5所得的茶黄素粗品用甲醇-乙酸溶液溶解样品后，采用C18反相色谱柱，通过不同浓度的甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，通过液相色谱检测除去杂质，再用甲醇-乙酸溶液进行洗脱收集茶黄素段的洗脱液，合并茶黄素段洗脱液并浓缩干燥，得到高纯度茶黄素。优选地，步骤S1所述乙醇为食品级乙醇，乙醇溶液浓度为45～55％，料液比(w/v)为1:8～1:10，回流提取次数为3～4次。更优选地，步骤S1所述醇提的乙醇溶液浓度为50％。更优选地，所述料液比(w/v)为1:10。更优选地，所述回流提取次数为3次。优选地，步骤S2所述乙酸乙酯萃取所使用的乙酸乙酯为分析纯，所述红茶浓缩提取液和乙酸乙酯的体积比为1:1～1:2，萃取次数为3～4次。更优选地，红茶浓缩提取液和乙酸乙酯的体积比为1:1。更优选地，所述萃取次数为3次。优选地，步骤S3所述甲醇溶液的浓度为75％～85％，甲醇溶液pH值为3.0～4.0。更优选地，所述甲醇溶液浓度为80％。更优选地，所述甲醇溶液pH值为3.5。优选地，步骤S4中，乙酸和乙酸乙酯的体积比为1:40～1:60。更优选地，所述乙酸和乙酸乙酯的体积比为1:50。优选地，步骤S5中用以溶解茶黄素粗品的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是35％～45％，乙酸的浓度是0.05％～0.1％；用以洗脱样品杂质的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是35％～45％，乙酸的浓度是0.05％～0.1％；用以洗脱茶黄素段样品的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是55％～65％，乙酸的浓度是0.05％～0.1％。更优选地，溶解茶黄素粗品所用甲醇-乙酸溶液的浓度为除杂洗脱的初始浓度。更优选地，所述用以洗脱样品杂质的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度为40％，乙酸的浓度范围是0.1％。更优选地，所述用以洗脱茶黄素段样品的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度为60％，乙酸的浓度范围是0.1％。优选地，步骤S6中，用以溶解茶黄素粗品的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是30％～35％，乙酸浓度是0.05％～0.1％；用以洗脱样品杂质的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是30％～35％，乙酸浓度是0.05％～0.1％；用以洗脱茶黄素段样品的甲醇-乙酸溶液中，甲醇浓度是50％～5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从红茶中提取茶黄素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.醇提：采用乙醇溶液对红茶进行提取，得到红茶提取液；S2.乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯对红茶提取液进行萃取，得到乙酸乙酯层提取物；S3.脱色：利用MCl反相色谱柱将S2所得乙酸乙酯层提取物去除叶绿素，得到脱色茶黄素粗品；S4.乙酸乙酯洗脱：S3所得脱色茶黄素粗品上硅胶柱，采用乙酸乙酯‑乙酸溶液进行洗脱，收集茶黄素段的洗脱液，得到茶黄素粗品；S5.除杂：S4所得的茶黄素粗品上MCl反相色谱柱，采用甲醇‑乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到纯化茶黄素；S6.提纯：S5所得的茶黄素粗品上C18柱，采用不同浓度的甲醇‑乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到高纯度茶黄素。

【技术特征摘要】
1.一种从红茶中提取茶黄素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.醇提：采用乙醇溶液对红茶进行提取，得到红茶提取液；S2.乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯对红茶提取液进行萃取，得到乙酸乙酯层提取物；S3.脱色：利用MCl反相色谱柱将S2所得乙酸乙酯层提取物去除叶绿素，得到脱色茶黄素粗品；S4.乙酸乙酯洗脱：S3所得脱色茶黄素粗品上硅胶柱，采用乙酸乙酯-乙酸溶液进行洗脱，收集茶黄素段的洗脱液，得到茶黄素粗品；S5.除杂：S4所得的茶黄素粗品上MCl反相色谱柱，采用甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到纯化茶黄素；S6.提纯：S5所得的茶黄素粗品上C18柱，采用不同浓度的甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，除去杂质并收集茶黄素段的洗脱液，得到高纯度茶黄素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.醇提：采用乙醇溶液对红茶进行回流提取，所得提取液进行旋转浓缩除去乙醇，得到红茶浓缩提取液；S2.乙酸乙酯萃取：采用乙酸乙酯对红茶浓缩提取液进行萃取，旋转浓缩除去乙酸乙酯，冷冻干燥得到乙酸乙酯层提取物；S3.脱色：取乙酸乙酯层提取物用甲醇溶液溶解，通过MCl反相色谱填料短柱吸附脱除叶绿素，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥得到脱色茶黄素粗品；S4.乙酸乙酯洗脱：取S3所得脱色茶黄素粗品用甲醇溶解后，采用干法拌硅胶，装硅胶柱后，采用乙酸乙酯-乙酸溶液进行洗脱，通过液相色谱检测收集茶黄素段的洗脱液，收集合并洗脱液并浓缩干燥，得到茶黄素粗品；S5.除杂：取S4所得的茶黄素粗品用甲醇-乙酸溶液溶解样品后，采用MCl反相色谱柱，通过不同浓度的甲醇-乙酸溶液进行梯度洗脱，通过液相色谱检测除去杂质，再用甲醇-乙酸溶液洗脱收集茶黄素段的洗脱液，合并茶黄素段洗脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙世利，潘顺顺，赖幸菲，向丽敏，黎秋华，孙伶俐，
申请(专利权)人：广东省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44