一种人工改造自然杀伤性细胞及其制备与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种利用糖化学修饰方法获得的人工改造自然杀伤性(NK)细胞，及其制备工艺与应用。本发明专利技术通过糖代谢途径，将人工合成的具备肿瘤靶向功能，且能有效阻断肿瘤细胞表面PD‑L1受体的核酸适配体，通过点击化学方式，共价偶联于NK细胞表面，形成具备肿瘤靶向杀伤功能，且有效阻断免疫检查点PD‑L1的人工改造的NK细胞，用于肿瘤的过继性免疫治疗，有效提高肿瘤免疫治疗效果，具备良好的临床转化价值。

An Artificially Modified Natural Killer Cell and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种人工改造自然杀伤性细胞及其制备与应用(一)
本专利技术涉及一种人工改造自然杀伤性细胞及其制备方法，及其在过继性免疫治疗中应用。(二)
技术介绍
我国是肝癌大国，全球每年新增发病的肝癌患者中有一半来自中国，其发病率呈逐年上升趋势，其中，肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是常见的肝癌类型之一，具有快增殖，高复发，易转移等特征，严重我国乃至人类的健康。而基于手术治疗的开放性治疗方式，会因患者的肿瘤占位及身体耐受性等影响而失去最佳治疗时机，而放、化疗作为一种辅助治疗方式，无法有效抑制肿瘤细胞生长，且对机体产生较大的毒副作用。而近年来，基于免疫细胞而发展起来的过继性免疫治疗策略，其具有毒副作用低，作用效果明显，可有效抑制肿瘤生长等优势，为肝癌治疗提供了新的思路与策略。基于免疫细胞的过继性免疫治疗(adoptiveimmunotherapy)，已经成为现今临床免疫治疗热点。其中，CAR-T和CAR-NK细胞免疫疗法受到业界普遍关注，并投入巨大的科研与开发资金。自2016年，包括中国在内的多个国家的不同临床研究机构同时开展了多个有关CAR-T和CAR-NK细胞免本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人工改造自然杀伤性(NK)细胞，由白细胞介素‑2激活的NK细胞与叠氮修饰的甘露糖共培养，通过糖代谢途径在NK细胞表面表达叠氮键获得糖处理后的激活的NK细胞，再将人工合成的DBCO化学分子末端修饰的TLS11a/PD‑L1核酸适配体，通过点击化学手段，共价偶联于糖处理后的激活的NK细胞表面获得。

【技术特征摘要】
1.一种人工改造自然杀伤性(NK)细胞，由白细胞介素-2激活的NK细胞与叠氮修饰的甘露糖共培养，通过糖代谢途径在NK细胞表面表达叠氮键获得糖处理后的激活的NK细胞，再将人工合成的DBCO化学分子末端修饰的TLS11a/PD-L1核酸适配体，通过点击化学手段，共价偶联于糖处理后的激活的NK细胞表面获得。2.如权利要求1所述的人工改造自然杀伤性细胞，其特征在于所述人工改造自然杀伤性细胞由如下方法制备获得：(1)通过健康人外周血液中提取NK细胞并用白细胞介素-2激活；(2)白细胞介素-2激活后的NK细胞与叠氮修饰的甘露糖共培养，在NK细胞表面表达叠氮键获得糖处理后的激活的NK细胞；(3)将人工合成的DBCO修饰的TLS11a及PD-L1核酸适配体与糖处理后的激活的NK细胞共培养，获得所述人工改造自然杀伤性细胞。3.如权利要求2所述的人工改造自然杀伤性细胞，其特征在于：DBCO末端修饰的TLS11a序列如下：DBCO-ACAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTTTCCGCCTCATGGACGTGCTG；DBCO末端修饰的PD-L1序列如下：DBCO-ACGGGCCACATCAACTCATTGATAGACAATGCGTCCACTGCCCGT。4.一种制备权利要求1所述的人工改造自然杀伤性细胞的方法，其特征在于所述方法如下：(1)采集健康人外周血液，用无菌生理盐水稀释，采用等密度梯度离心获得PBMC细胞，用KBM581培养基调节细胞密度为1～3×106个/mL，然后用辐射的工程化IL-21NK细胞作为饲养细胞，与PBMC在含有重组人IL-2的培养基中共培...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小龙，张达，郑友世，蔡志雄，苏小平，
申请(专利权)人：上海瑞可新生物科技有限公司，格源致善上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31