一种基因工程化细胞膜纳米囊泡及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供一种基因工程化细胞膜纳米囊泡PD‑1/TRAIL@CAT NVs及制备方法和应用。纳米囊泡由生物细胞膜构成，表面转配有肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、程序性死亡受体1(PD‑1)，内部包埋过氧化氢酶(CAT)。TRAIL可特异性诱导肿瘤细胞死亡，释放肿瘤抗原和“危险信号分子”，触发免疫应答；PD‑1可与癌细胞上的PD‑L1蛋白结合，阻断相关免疫抑制通路；CAT则可催化肿瘤部位H2O2产生氧气，改善肿瘤乏氧环境，增强免疫细胞浸润性。通过上述功能的有机整合，实现肿瘤细胞的有效清除和自身免疫体系的快速激活，发挥多点协同增效的抗肿瘤效果。

A Genetically Engineered Cell Membrane Nanovesicle and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种基因工程化细胞膜纳米囊泡及其制备与应用(一)
本专利技术涉及一种基因工程化细胞膜纳米囊泡及其制备方法，以及其在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。(二)
技术介绍
肿瘤免疫治疗是近年来的研究热点，其利用免疫学原理和方法，旨在激发机体内在免疫反应，增强对肿瘤细胞的免疫排斥、抑制和杀伤效果，从而实现肿瘤杀伤、降低肿瘤复发和转移的目的。2013年《Science》杂志将肿瘤免疫治疗评为年度十大科学突破之一，并且目前已有部分免疫治疗药物获FDA批准临床用于黑色素瘤、肺癌、食道癌、白血病等多种恶性肿瘤的治疗。肿瘤免疫治疗主要包括过继性免疫细胞治疗、细胞因子、肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂等治疗策略，具有副作用小、特异性强、有效时间持久、复发率低等优点。其中，基于PD-1/PD-L1生物轴的免疫检查点抑制剂疗法在临床上显示出巨大应用潜力。PD-1和PD-L1分别存在于T细胞和肿瘤细胞表面，当两者结合便提供了抑制性信号，诱导T细胞凋亡、抑制T细胞的活化和增殖，肿瘤细胞借此逃避T细胞识别。目前已有多种分别以PD-1(O药，K药)和PD-L1(T药，B药，I药)为靶点的单抗类抑制剂，通过抗体与PD-1或者P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因工程化细胞膜纳米囊泡PD‑1/TRAIL@CAT NVs，由生物细胞膜构成，粒径10～200nm，表面转配有肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、程序性死亡受体1(PD‑1)，内部包埋过氧化氢酶(CAT)。

【技术特征摘要】
1.一种基因工程化细胞膜纳米囊泡PD-1/TRAIL@CATNVs，由生物细胞膜构成，粒径10～200nm，表面转配有肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、程序性死亡受体1(PD-1)，内部包埋过氧化氢酶(CAT)。2.如权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于所述的生物细胞膜来源于工程化293FT细胞株。3.如权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于所述PD-1、TRAIL蛋白和过氧化氢酶质量比为1～3：1～3：0.2～1。4.如权利要求3所述的纳米囊泡，其特征在于所述纳米囊泡由如下方法构建获得：(1)将PD-1、TRAIL蛋白的基因序列分别与mCherry红色荧光蛋白基因序列、EGFP绿色荧光蛋白基因序列通过柔性肽序列ggaggttctggtggatctggtggaggttctggttctggatcaggtggt连接构建成新的融合蛋白基因序列，再分别插入到pCDH-CMV-Puro空载质粒中，获得pCDH-CMV-PD-1-mCherry-Puro、pCDH-CMV-TRAIL-EGFP-Puro两种质粒；(2)pCDH-CMV-PD-1-mCherry-Puro和pCDH-CMV-TRAIL-EGFP-Puro使用293FT细胞进行慢病毒包装，收集病毒液进行纯化和浓缩，用浓缩后的病毒液感染293FT细胞，感染过程中加入polybrene增强感染效率，感染两天后用抗性药物Puro进行细胞筛选，获得稳转细胞株；(3)将成功构建的稳转细胞株进行扩大培养，用细胞刮刀将细胞刮下，离心收集，按细胞膜抽提试剂盒提供的方法获取细胞膜，用PBS溶解细胞膜，与过氧化氢酶混溶后，先后用800nm、400...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小龙，吴名，郑东烨，蔡志雄，苏小平，
申请(专利权)人：上海瑞可新生物科技有限公司，格源致善上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31