用于卵巢癌和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白、核酸和细胞。特别是，本发明专利技术涉及癌症的免疫疗法。本发明专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(能够例如作为刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗组合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。

New Peptides and Peptides Compositions for Immunotherapy of Ovarian and Other Cancers

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于卵巢癌和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物
本专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白质、核酸和细胞。特别是，本专利技术涉及癌症的免疫疗法。本专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗复合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。本专利技术涉及数种新型肽序列及其变体，它们源自人肿瘤细胞的HLA-I类和II类分子，可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物中或作为开发药物/免疫活性化合物和细胞的目标。
技术介绍
卵巢癌卵巢癌2012年的新发病例估计为239000例，是女性第七大最常见的癌症，占女性所有癌症的4％。相对于其他的女性生殖器官癌症，卵巢癌的死亡率往往较高，病死率在资源少的环境下更高。因此，卵巢癌是女性癌症死亡的第八大最常见的原因，有152000人死亡。2012年，所有新发病例中近55％发生在人类发展水准高或非常高的国家；37％的新发病例和39％的死亡病例发生在欧洲和北美。北欧、东欧、北美和澳洲发病率最高，非洲和亚洲大部分地区相对较低。发病率在人类发展水准很高的某些国家一直呈下降趋势，特别是欧洲和北美。最常见的卵巢癌症是卵巢癌，这也是致命性最强的妇科恶性肿瘤。基于组织病理学和分子遗传学，卵巢癌被分成五个主要类型：高级别浆液性癌(70％)、子宫内膜癌(10％)、透明细胞癌(10％)、黏液癌(3％)和低级别浆液性癌(<5％)，共占卵巢癌病例的95％以上。很少见的是恶性生殖细胞瘤(无性细胞瘤、卵黄囊瘤和未成熟畸胎瘤)(占卵巢癌的3％)和潜在恶性性索间质肿瘤(1-2％)(最常见的是颗粒细胞瘤)。卵巢癌最通常影响未生育过的女性，在排卵受怀孕或口服避孕药抑制的女性中发生频率最低。这些肿瘤一般被认为起源于覆盖卵巢表面或盆腔腹膜的细胞。这种间皮细胞的恶性转化已被“不间断排卵”理论解释(La,2001)。10％的病例有卵巢癌家族史；当两个或更多个一级亲属患有卵巢癌时，风险增加3倍。BRCA1或BRCA2种系突变的女性在70岁前罹患卵巢癌(主要是高级别浆液性癌)的风险为30-70％(Rischetal.,2006)。手术切除是早期和晚期卵巢癌的主要治疗方法。最终目标是完全切除周围健康组织中的肿瘤块。手术切除之后使用铂类似物进行全身化疗，但无手术后化疗适应症的非常低等级的卵巢癌(IA期、1级)除外。对于晚期卵巢癌，一线化学疗法包括卡铂与紫杉醇联合使用，可使用贝伐单抗作为补充。对于铂类耐药的卵巢癌的标准治疗方法包括使用以下其中一种化疗药物的单一治疗：聚乙二醇化脂质体阿霉素、托泊替康、吉西他滨或紫杉醇(S3-LeitliniemaligneOvarialtumore,2013)。免疫疗法似乎是改善卵巢癌患者治疗的一种有前景的策略，因为存在促炎性肿瘤浸润淋巴细胞，尤其是CD8阳性T细胞与良好的预后相关，肿瘤相关肽特异性T细胞可从癌组织中分离。因此，大量的科学工作投入到卵巢癌不同免疫疗法的研究中。已经进行了相当多的临床前研究和临床研究，进一步的研究目前正在进行中。对于细胞因子疗法、接种疫苗、单克隆抗体治疗、细胞过继转移和免疫调节，目前已有临床资料。使用白介素-2、干扰素-α、干扰素-γ或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子治疗目的在于增强患者自身的抗肿瘤免疫反应，这些治疗已经在小型研究组中显示出有前景的结果。使用来自几种肿瘤相关蛋白(HER2/neu、NY-ESO-1、p53、Wilms肿瘤-1)的单个或多个肽或来自自体肿瘤细胞的全肿瘤抗原的I期和II期疫苗接种研究显示了良好的安全性和耐受性特性，但临床效果仅为低至中等。特异性识别肿瘤相关蛋白的单克隆抗体被视为可增强对肿瘤细胞的免疫细胞介导的杀伤力。抗CA-125抗体oregovomab和abagovomab以及抗EpCAM抗体ca-tumaxomab在II期和III期研究中取得了有前景的结果。与此相反，抗MUC1抗体HMFG1在III期研究中未能明确地提高生存期。另一种方法使用单克隆抗体来靶向和阻止肿瘤细胞上的生长因子和存活受体。虽然施用曲妥单抗(抗HER2/neu抗体)和MOv18与MORAb-003(抗叶酸受体α抗体)仅对卵巢癌具有有限的临床益处，但是在标准化疗中加入贝伐单抗(抗VEGF抗体)对晚期卵巢癌似乎是有利的。免疫细胞的过继转移实现了临床试验中的异质结果。自体、体外扩增的肿瘤浸润性T细胞的过继转移在中试试验中被证明是一种有希望的方法。相反，转移含有叶酸受体α特异性嵌合抗原受体的T细胞在I期试验中没有诱导显著的临床反应。用肿瘤细胞裂解物或肿瘤相关蛋白体外刺激的树突细胞显示可在转移后增强抗肿瘤T细胞反应，但T细胞活化的程度与临床效果无关。在II期研究中，自然杀伤细胞的转移造成明显的毒性。内在抗肿瘤免疫性以及免疫治疗受免疫抑制肿瘤微环境影响。为了克服这个障碍，免疫调节药物(如环磷酰胺、抗CD25抗体和聚乙二醇化脂质体阿霉素)与免疫疗法组合进行了测试。增强T细胞活性的易普利姆玛(Ipilimumab)、抗CTLA4抗体目前有最可靠的资料。易普利姆玛被证明可在卵巢癌患者中产生显著的抗肿瘤效果(Mantia-Smaldoneetal.,2012)。考虑到治疗癌症相关的严重副作用和费用，通常有必要确定可用于治疗癌症的因子，尤其是卵巢癌。通常也有必要确定代表癌症生物标志物的因子，尤其是卵巢癌，从而更好地诊断癌症、评估预后和预测治疗成功性。癌症免疫治疗代表了癌症细胞特异性靶向作用的一个选项，同时最大限度地减少副作用。癌症免疫疗法利用存在的肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原(TAA)的目前分类主要包括以下几组：a)癌-睾丸抗原：T细胞能够识别的最先确认的TAA属于这一类抗原，由于其成员表达于组织学相异的人肿瘤中、正常组织中、仅在睾丸的精母细胞/精原细胞中、偶尔在胎盘中，因此，它最初被称为癌-睾丸(CT)抗原。由于睾丸细胞不表达HLAI类和II类分子，所以，在正常组织中，这些抗原不能被T细胞识别，因此在免疫学上可考虑为具有肿瘤特异性。CT抗原大家熟知的例子是MAGE家族成员和NY-ESO-1。b)分化抗原：肿瘤和正常组织(肿瘤源自该组织)都含有TAA。大多数已知的分化抗原发现于黑色素瘤和正常黑色素细胞中。许多此类黑色素细胞谱系相关蛋白参与黑色素的生物合成，因此这些蛋白不具有肿瘤特异性，但是仍然被广泛用于癌症的免疫治疗。例子包括，但不仅限于，黑色素瘤的酪氨酸酶和Melan-A/MART-1或前例腺癌的PSA。c)过量表达的TAA：在组织学相异的肿瘤中以及许多正常组织中都检测到了基因编码被广泛表达的TAA，一般表达水平较低。有可能许多由正常组织加工和潜在提呈的表位低于T细胞识别的阈值水平，而它们在肿瘤细胞中的过量表达能够通过打破先前确立的耐受性而引发抗癌反应。这类TAA的典型例子为Her-2/neu、生存素、端粒酶或WT1。d)肿瘤特异性抗原：这些独特的TAA产生于正常基因(如β-catenin、CDK4等)的突变。这些分子变化中有一些与致瘤性转化和/或进展相关。肿瘤特异性抗原一般可在不对正常组织带来自体免疫反应风本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQ ID No.1至SEQ ID No.772的氨基酸序列、以及与SEQ ID No.1至SEQ ID No.772具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导与该变体肽发生交叉反应的T细胞，其中所述肽不是全长多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.27 DE 102017101671.6;2017.01.27 US 62/451,1.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.772的氨基酸序列、以及与SEQIDNo.1至SEQIDNo.772具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导与该变体肽发生交叉反应的T细胞，其中所述肽不是全长多肽。2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽有能力与MHC-I或-II类分子结合，其中所述肽与MHC结合时能够被CD4和/或CD8T细胞识别。3.根据权利要求1或2所述的肽或其变体，其中氨基酸序列包括SEQIDNo.1至SEQIDNo.772中任一个的连续氨基酸延伸区段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽或其变体的总长度为8至100个氨基酸、优选为8至30个氨基酸、更优选为8至16个氨基酸、最优选为该肽由或基本由SEQIDNo.1至SEQIDNo.772中任一项的氨基酸序列组成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽被修饰，和/或包含非肽键。6.根据权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽为融合蛋白的一部分，尤其包含HLA-DR抗原相关不变链(Ii)的N-端氨基酸。7.一种抗体或其片段，特别是可溶性或膜结合性抗体，优选为单克隆抗体，其特异性地识别权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为与MHC分子结合时的权利要求1至5中任一项所述的肽或变体。8.一种T细胞受体或其片段，优选为可溶性或膜结合的T细胞受体，其与HLA配体反应，其中所述配体是权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为与MHC分子结合时的权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体。9.根据权利要求8所述的T细胞受体，其中所述配体氨基酸序列与SEQIDNo.1至SEQIDNo.772中的任一项具有至少88％一致性，或其中所述配体氨基酸序列由SEQIDNo.1至SEQIDNo.772中的任一项组成。10.根据权利要求8或9所述的T细胞受体，其中所述T细胞受体作为可溶性分子提供，且任选地携带其他效应子功能，例如免疫刺激结构域或毒素。11.一种适体，其特异性地识别权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，优选为权利要求1至5中任一项所述的与MHC分子结合的肽或其变体。12.一种核酸，或一种表达该核酸的表达受体，其中所述核酸编码权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段，其任选地与异源启动子序列连接。13.一种重组宿主细胞，其包含权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、或权利要求12所述的核酸或表达载体，其中所述宿主细胞优选地选自抗原提呈细胞，例如树突状细胞、T细胞或NK细胞。14.一种体外制备激活的T淋巴细胞的方法，该方法包括将T细胞与载有抗原的人I或II类MHC分子体外接触一段时间，该时间足以以抗原特异性的方式激活T细胞，人I或II类MHC分子在合适的抗原提呈细胞表面或模拟抗原提呈细胞的人工构建体的表面上表达，其中所述抗原为权利要求1至4中任一项所述的肽。15.一种激活的T淋巴细胞，由权利要求14所述的方法制成，其有选择性地识别一种细胞，该细胞提呈含权利要求1至4任一项中给定氨基酸序列的多肽。16.一种药物组合物，其包含至少一种活性成分、或经结合的活性成分或经标记的活性成分，和药学上可接受的的载体，以及任选地，药学上可接受的的赋形剂和/或稳定剂，其中活性成分选自权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、权利要求11所述的适体、权利要求12所述的核酸或表达载体、权利要求13所述的宿主细胞、或权利要求15所述的激活的T淋巴细胞。17.一种制备权利要求1至6中任一项所述的肽或其变体、权利要求7所述的抗体或其片段、或权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段的方法，所述方法包括培养权利要求13所述的宿主细胞，以及从所述宿主细胞和/或其培养基中分离出所述肽或其变体、所述抗体或其片段、或所述T细胞受体或其片段。18.权利要求1至6中任一项所述的肽、权利要求7所述的抗体或其片段、权利要求8或9所述的T细胞受体或其片段、权利要求11所述的适体、权利要求12所述的核酸或表达载体、权利要求13所述的宿主细胞、或权利要求15所述的激活的T淋巴细胞在医学中的用途。19.一种杀灭患者中靶细胞的方法，其中该靶细胞提呈含有权利要求1至4...

【专利技术属性】
技术研发人员：海科·舒斯特，珍妮特·佩珀，凯文·罗赫，菲利普·瓦格纳，汉斯宙戈·冉曼思，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE