哺乳动物表达的新型人类免疫缺陷病毒包膜蛋白抗原制造技术

本发明专利技术的多种实施方案涉及包含HIV包膜蛋白的1个‑10个或更多个表位和融合蛋白的多肽，其中该多肽缺少HIV gp41蛋白的跨膜结构域。这样的多肽可以在哺乳动物细胞例如人类细胞中表达，以产生例如可用于开发新型抗HIV抗体的多肽。本文描述的多肽和由此开发的新型抗体通常可用于医学诊断，并且它们还可以用于HIV的预防性和治疗性治疗。

New human immunodeficiency virus envelope protein antigen expressed in mammals

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】哺乳动物表达的新型人类免疫缺陷病毒包膜蛋白抗原描述本申请与经由EFS-Web作为ASCII文本文件的电子序列表一起提交。电子序列表以标题为SEQLIST1800393.txt的文件提供，所述文件被创建并最后保存于2018年11月15日，大小为501,813个字节。电子序列表的信息通过引用以其整体被并入本文。领域本公开内容涉及重组蛋白的领域。本公开内容的一些实施方案涉及包含HIVgp120或gp41蛋白的至少一个表位和融合蛋白的HIV包膜重组多肽。本公开内容还涉及用于测定包含HIV抗体的样品的方法和装置。背景HIV引起了全球性流行病，导致估计3500万人由于AIDS相关疾病而死亡。在2016年出现了估计180万新的HIV病例，并且全世界约3670万人受到感染。HIV是慢病毒属(lentivirus)亚组中逆转录病毒家族的成员，并且具有两种描述的类型：HIV-1和HIV-2。HIV-1比HIV-2更具传染性和毒性，并且HIV-1在全世界引起大多数HIV感染。每个HIV病毒体包含编码9种基因和19种蛋白质的两个RNA拷贝。完整病毒体表面上仅有的蛋白质是由env基因编码的包膜糖蛋白。env基因的产物是约850个氨基酸的前体蛋白，被称为gp160。该蛋白质在内质网中被细胞蛋白酶弗林蛋白酶裂解成两种裂解产物gp120和gp41。gp120和gp41都以三聚体存在于细胞表面，以形成异二聚体“尖峰”。gp41是一种跨膜糖蛋白，其充当细胞外gp120的锚，它与细胞外gp120非共价结合。gp120含有用于淋巴细胞上细胞受体的结合位点，并且对于病毒进入细胞至关重要。作为病毒体表面上仅有的蛋白质，gp120和gp41暴露被宿主免疫系统靶向的许多免疫显性表位。历史上这些蛋白质的形式已经被用于免疫测定，以捕获和检测针对它们发动的抗体，作为HIV感染的确认。gp120和gp41可用于疫苗接种、诊断测定并可用于诊断测定的开发。重组gp120和gp41通常在酵母中产生，但是在酵母中gp120和gp41的产生是具有挑战性的，因为蛋白质可能错误折叠、聚集和/或累积异常翻译后修饰。此外，从酵母中纯化gp120和gp41呈现了一个艰难的多步骤过程。因此，用于产生gp120和gp41抗原的改进的组合物和方法是期望的。概述本专利技术的多种实施方案涉及重组多肽，所述重组多肽包含HIV包膜蛋白的至少一个表位和融合蛋白，其中重组多肽缺少跨膜结构域，并且融合蛋白包含不由HIV编码的氨基酸序列。本专利技术的多种实施方案涉及重组多肽，所述重组多肽包含前导肽、融合蛋白、HIVgp120蛋白的至少一个表位和/或HIVgp41蛋白的至少一个表位；其中融合蛋白包含不由HIV编码的区域，所述区域选自由抗体的Fc结构域、p53结构域、GCN4结构域或网格蛋白结构域组成的组，并且其中重组多肽缺少跨膜结构域。根据本专利技术的重组多肽缺少跨膜结构域，所述跨膜结构域具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:63、SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:67、SEQIDNO:68、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:71或SEQIDNO:72。根据本专利技术的重组多肽可以包含HIV包膜蛋白的多于一个表位。在一些实施方案中，重组多肽包含至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个表位。在一些实施方案中，每个表位通过接头被连接至另一个表位，所述接头的氨基酸序列不由HIV编码。在一些实施方案中，将每个表位连接至另一个表位的接头包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76、SEQIDNO:109、SEQIDNO:110或SEQIDNO:111。多肽可以包含HIV包膜蛋白的多于一个表位，其中该多于一个表位中的每个表位通过不由HIV编码的氨基酸序列被连接至该多于一个表位中的另一个表位。例如，该多于一个表位中的每个表位可以通过接头被连接至该多于一个表位中的另一个表位。在一些实施方案中，该多于一个表位中的每个表位可以通过接头被连接至该多于一个表位中的另一个表位，例如，其中每个接头包括α螺旋或β链。该多于一个表位可以包括至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个表位。包含该多于一个表位的多肽可以包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21或SEQIDNO:22，或可以包含与以下中列出的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21或SEQIDNO:22。多肽可以包含HIVgp120蛋白的一个或更多个表位、HIVgp41蛋白的一个或更多个表位、或HIVgp120蛋白和HIVgp41蛋白两者的一个或更多个表位。在一些实施方案中，重组多肽包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96、SEQIDNO:97、SEQIDNO:98、SEQIDNO:99、SEQIDNO:100、SEQIDNO:101、SEQIDNO:102、SEQIDNO:103、SEQIDNO:104、SEQIDNO:105或SEQIDNO:106，或包含与以下中列出的氨基酸序列具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQID本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组多肽，所述重组多肽包含前导肽，融合蛋白，HIV gp120蛋白的至少一个表位，和/或HIV gp41蛋白的至少一个表位；其中所述融合蛋白包含不由HIV编码的区域，所述区域选自由以下组成的组：抗体的Fc结构域、p53结构域、GCN4结构域或网格蛋白结构域，并且其中所述重组多肽缺少跨膜结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.11.17 US 62/588,0851.一种重组多肽，所述重组多肽包含前导肽，融合蛋白，HIVgp120蛋白的至少一个表位，和/或HIVgp41蛋白的至少一个表位；其中所述融合蛋白包含不由HIV编码的区域，所述区域选自由以下组成的组：抗体的Fc结构域、p53结构域、GCN4结构域或网格蛋白结构域，并且其中所述重组多肽缺少跨膜结构域。2.如权利要求1所述的重组多肽，其中所述跨膜结构域的氨基酸序列选自由以下组成的组：SEQIDNO:63、SEQIDNO:64、SEQIDNO:65、SEQIDNO:66、SEQIDNO:67、SEQIDNO:68、SEQIDNO:69、SEQIDNO:70、SEQIDNO:71或SEQIDNO:72。3.如权利要求1或2中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个表位。4.如权利要求3所述的重组多肽，其中每个表位通过接头被连接至另一个表位，所述接头的氨基酸序列不由HIV编码。5.如权利要求4所述的重组多肽，其中将每个表位连接至另一个表位的所述接头包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76、SEQIDNO:109、SEQIDNO:110或SEQIDNO:111。6.如前述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96、SEQIDNO:97、SEQIDNO:98、SEQIDNO:99、SEQIDNO:100、SEQIDNO:101、SEQIDNO:102、SEQIDNO:103、SEQIDNO:104、SEQIDNO:105或SEQIDNO:106。7.如权利要求1至5中任一项所述的重组多肽，其中所述融合蛋白包含抗体Fc结构域，所述抗体Fc结构域的氨基酸序列选自由以下组成的组：SEQID.NO:77、SEQID.NO:78、SEQID.NO:80或SEQID.NO:107。8.如权利要求7所述的重组多肽，其中所述抗体Fc结构域缺少寡聚化结构域；并且所述重组多肽是单体。9.如权利要求8所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含以下中列出的氨基酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:91、SEQIDNO:92、SEQIDNO:93、SEQIDNO:94、SEQIDNO:95、SEQIDNO:96、SEQIDNO:97、SEQIDNO:98、SEQIDNO:99、SEQIDNO:100、SEQIDNO:101、SEQIDNO:102、SEQIDNO:103、SEQIDNO:104、SEQIDNO:105或SEQIDNO:106。10.如权利要求7所述的重组多肽，其中所述抗体Fc结构域包括二聚化结构域。11.如权利要求10所述的重组多肽，其中所述重组多肽包含以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔迪·梅尔顿威特，索丹尼·申，马克·鲍迈斯特，乔迪·贝里，
申请(专利权)人：盖立复诊断解决方案公司，
类型：发明
国别省市：美国,US