一种利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法，是将甘草粉末与纯离子液体混合后进行超声提取，提取结束后离心、取上清即得。最优的离子液体[C8MIM]BF4、最佳提取条件是：固液比28.31 mL/g；提取时间32.77 min；提取温度92.60℃；浸泡时间9.83 h。经HPLC分析所得产物中四种化合物isoangustone A、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定的含量分别为45.6、346.9、214.9、224.5μg/g。与传统的提取方法相比，离子液体对甘草中异戊烯基黄酮的提取具有更高的特异性。

A Method for Extracting Isopentenyl Flavonoids from Glycyrrhiza uralensis by Ionic Liquids

【技术实现步骤摘要】
一种利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法
本专利技术属于植物提取与分离
，具体涉及一种利用离子液体从甘草中提取四种主要异戊烯基黄酮(isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定)的方法。
技术介绍
甘草是最常用的中药之一，除了中国药典，也被日本药典、欧洲药典以及美国药典所收录。甘草在古代医书中被称为“国老”，具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药等多种功效，主要用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，四肢挛急疼痛等病症。甘草的化学成分众多，主要为三萜皂苷类、黄酮糖苷类以及异戊烯基黄酮类化合物。其中，异戊烯基黄酮类化合物是指连接有异戊烯基侧链的黄酮苷元，该类化合物的母核种类较多，包括黄酮、异黄酮、二氢异黄酮、异黄烷、3-苯基香豆素等。甘草中的异戊烯基黄酮主要有isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定、光甘草定等化合物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抑菌杀菌、保肝等多种活性。异戊烯基黄酮类化合物在甘草中的含量小于100μg/g，远远低于三萜皂苷和黄酮糖苷的含量。目前，甘草中异戊烯基黄酮类成分的提取一般采用水、乙醇等传统溶剂，它们不具有选择性，而且，异戊烯基黄酮在提取液中的含量很低，往往需要重复柱色谱的分离纯化以富集得到该类成分，因而操作繁琐、费时费力。离子液体一般由体积较大的有机阳离子和体积较小的有机或无机阴离子组成，在室温下呈液体。作为取代传统有机溶剂的“绿色溶剂”，与传统溶剂相比，离子液体具有较多优点：无污染、液态温度范围宽、低挥发、不可燃以及高稳定性。最重要的是，离子液体的结构具有可设计性，可以通过不同阴阳离子的组合调控其极性、疏水性、溶解性等性质，进而调节对目标化合物的溶解和提取能力。由于离子液体的这些特殊性质，近年来已被广泛应用于天然产物的提取和萃取。然而截至目前，尚未见有关离子液体应用于甘草中异戊烯基黄酮类成分提取和萃取的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用离子液体从甘草中提取四种主要异戊烯基黄酮类化合物(isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定)的方法，该方法绿色环保、特异性和提取效率高、操作简单。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：一种利用离子液体从甘草中提取主要异戊烯基黄酮类化合物(isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定)的方法，是将干燥的甘草粉末与纯离子液体按照固液比5～40mL/g混合，浸泡时间为0～12h，于20～100℃温度下进行超声提取，提取时间为5～40min，提取结束后离心，取上清，即得。较佳地，固液比20～40mL/g；提取时间20～40min；提取温度80～100℃；浸泡时间8～12h。更佳地，固液比28.31mL/g；提取时间32.77min；提取温度92.60℃；浸泡时间9.83h。所述离子液体为[C8MIM]BF4,[C8MIM]PF6,[C8MIM]SbF6,[C8MIM]N(CN)2,[C8MIM](CF3SO2)2N,[C8MIM]CF3SO3,[C2MIM]BF4,[C4MIM]BF4,[C6MIM]BF4,[C10MIM]BF4或[C12MIM]BF4。最佳离子液体为[C8MIM]BF4，因为对目标化合物的提取效率高。化合物isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定的结构式如下所示：有益效果：本专利技术采用离子液体超声辅助提取-HPLC检测方法，应用Design-Expert统计分析软件，设计Box-Behnken四因素三水平的中心组合实验，利用HPLC方法同时对提取液(经等体积的甲醇稀释)中的isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定进行含量测定，得出最优的提取工艺，提取率高，可以高特异性地从甘草中提取出异戊烯基黄酮类化合物。所采用的离子液体可回收循环利用，环保无污染，且适合工业化生产。1、首先确定最佳的离子液体作为提取剂，分别比较了不同阴离子[C8MIM]BF4,[C8MIM]PF6,[C8MIM]SbF6,[C8MIM]N(CN)2,[C8MIM](CF3SO2)2N,[C8MIM]CF3SO3以及不同阳离子[C2MIM]BF4,[C4MIM]BF4,[C6MIM]BF4,[C8MIM]BF4,[C10MIM]BF4,[C12MIM]BF4对目标化合物的提取效率，最终确定[C8MIM]BF4为最佳提取剂。2、以[C8MIM]BF4为提取剂，采用单因素分析实验分别考察不同固液比、提取时间、提取温度、浸泡时间对目标化合物提取效率的影响，在此基础上，以该四个提取条件作为因素，确定它们在响应曲面实验中的水平范围，最终确定为固液比20～40mL/g；提取时间20～40min；提取温度80～100℃；浸泡时间8～12h。3、采用Design-Expert软件设计响应曲面实验，确定isoangustoneA、甘草香豆素、甘草双氢异黄酮、甘草西定的最大提取率及其对应的因素水平，最终确定为固液比28.31mL/g；提取时间32.77min；提取温度92.60℃；浸泡时间9.83h。4、采用步骤3中的最优因素水平提取甘草中的四种主要异戊烯基黄酮，并将该方法与传统溶剂提取进行比较，确定离子液体提取的特异性。附图说明图1为不同阴离子的离子液体对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物的提取效率。图2为不同阳离子的离子液体对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物的提取效率。图3为固液比对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物提取效率的影响。图4为提取温度对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物提取效率的影响。图5为提取时间对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物提取效率的影响。图6为浸泡时间对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物提取效率的影响。图7为交互作用对甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物总提取效率的影响。图8为离子液体与传统溶剂(水和甲醇)提取甘草中四种异戊烯基黄酮类化合物后的液相色谱图。图中，0～18min为黄酮糖苷和三萜皂苷类化合物；18～36min为异戊烯基黄酮类化合物。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。一种利用离子液体提取甘草中四种主要异戊烯基黄酮类化合物的方法，具体包括如下步骤：精密称取甘草粉末1g，加入30mL的纯离子液体，浸泡12h，于50℃下超声提取30min，离心，取上层清液，即得。一、反应条件的选择依次改变离子液体种类、固液比、提取温度、提取时间、浸泡时间等提取条件，考察它们对提取效率的影响。各实验均平行做三次。1、离子液体种类的选择选取不同阴离子的离子液体[C8MIM]BF4,[C8MIM]PF6,[C8MIM]SbF6,[C8MIM]N(CN)2,[C8MIM](CF3SO2)2N,[C8MIM]CF3SO3，进行甘草中异戊烯基黄酮类化合物的提取，提取液经等体积的甲醇稀释后，通过HPLC分析，比较四种目标化合物的提取效率(在每组数据中，将最大的提取效率定义为100％，其他组的数值与其比较得到相对提取效率，下同)，发现阴离子BF4-对四种目标化合物的提取效率最高，见图1。固定阴离子为BF4-，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，异戊烯基黄酮类化合物如下：

【技术特征摘要】
1.利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，异戊烯基黄酮类化合物如下：是将甘草粉末与纯离子液体混合后进行超声提取，提取结束后离心，取上清即得。2.如权利要求1所述利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，所述离子液体为[C8MIM]BF4,[C8MIM]PF6,[C8MIM]SbF6,[C8MIM]N(CN)2,[C8MIM](CF3SO2)2N,[C8MIM]CF3SO3,[C2MIM]BF4,[C4MIM]BF4,[C6MIM]BF4,[C10MIM]BF4和[C12MIM]BF4之任意一种。3.如权利要求1所述利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：季帅，汪玉洁，邵娴，高诗凯，汤道权，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32