【技术实现步骤摘要】
快速制备桑格测序模板的方法
本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种快速制备桑格测序模板的方法。技术背景桑格(即Sanger)测序法，即双脱氧链终止法，是核酸测序的经典方法。其基本原理是在DNA聚合酶以测序靶DNA为模板合成互补链的反应体系中引入双脱氧核苷酸(ddNTP)，导致合成中的互补链在ddNTP对应的靶DNA核苷酸处终止，形成一系列链终止片段，再利用聚丙烯酰胺凝胶电泳将长度只差一个核苷酸的各DNA链终止片段区分开，根据各片段终点处ddNTP的种类判断靶DNA相应位置上的靶DNA核苷酸的种类。目前，常规的桑格测序模板制备需要经过摇菌培养和质粒抽提(比如碱裂解法或商业小提试剂盒)两个步骤，共耗时约14小时。本领域对于改进桑格测序的模板样本制备过程，提供能缩短制备时间，同时保证测序效率的样本制备方法存在需求。滚环扩增(rollingcircleamplification，RCA)技术可用于扩增环状DNA模板，例如质粒和噬菌体DNA，以供桑格测序。该技术是借鉴自然界中环状病原微生物DNA分子的滚环式的复制方法而建立的一种核酸扩增技术，它是在恒温条件下发生的一种...
【技术保护点】
1.一种快速制备桑格测序模板的方法，其包括下述步骤：对包含环状DNA样本进行变性处理；对变性产物进行滚环扩增；用通过碱性磷酸酶处理滚环扩增产物去除其中残余的dNTP。
【技术特征摘要】
1.一种快速制备桑格测序模板的方法，其包括下述步骤：对包含环状DNA样本进行变性处理；对变性产物进行滚环扩增；用通过碱性磷酸酶处理滚环扩增产物去除其中残余的dNTP。2.权利要求1的方法，其中在开始变性处理之前将样本与用于滚环复制的随机引物混合。3.权利要求1或2的方法，其中变性处理包括将样本加热到95℃保持3分钟，然后降温到4℃并保持。4.权利要求1-3中任一项的方法，其中变性处理的体系中含有EDTA，优选约0.04mM的EDTA。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中滚环扩增的反应体系中含有牛血清白蛋白，优选约0.1mg/mL的牛血清白蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：樊隆，周敬波，蒋浩君，刘家栋，吴政宪，
申请(专利权)人：南京金斯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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