一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种快速高通量选育高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌（CorynebacteriumglutamicumB1）及应用方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30‑37℃，100‑200 r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体（ARTP）诱变处理50‑180 s后，接种到0.05‑0.4 mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30‑37℃培养1‑2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株CorynebacteriumglutamicumB1。该菌株在100mL摇瓶发酵30‑48 h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。

Breeding Method and Application of Corynebacterium glutamicum with High Isoleucine Production

【技术实现步骤摘要】
一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法及应用
本专利技术涉及一种高产氨基酸的高通量筛选方法，尤其是一种异亮氨酸的谷氨酸棒杆菌高通量筛选方法，属于生物医药和大健康产业。
技术介绍
L-异亮氨酸是人体八种必需氨基酸之一，同时又是三种支链氨基酸之一，因其特殊的结构和功能，在人类生命代谢中具有特别重要的地位。因此，已被广泛应用于食品、动物饲料和医药等行业。L-异亮氨酸的生产方法主要有蛋白质水解法、化学合成法和生物发酵法。生物发酵法因其原料成本低、易于控制、节能环保成为工业化生产的首选方法。目前，国内异亮氨酸的产量还不高，生产技术相对国外还具有较大差距，高产菌株的选育成为异亮氨酸产量提高的重要环节。常温常压等离子体(ARTP)诱变育种技术是由清华大学自主研发的一种微生物基因组快速突变技术。该技术具有成本低、操作简便、安全性高以及等离子体产生条件温和富含大量活性粒子、突变谱广、突变率高等优点，被广泛用于细菌、真菌、微藻等微生物的生物育种。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术使用ARTP诱变仪对谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)进行处理，然后通过添加适宜浓度的磺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌，谷氨酸棒杆菌 B1，保藏编号：CCTCC NO：M 2019118 ，分类命名

【技术特征摘要】
1.一种高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌，谷氨酸棒杆菌B1，保藏编号：CCTCCNO：M2019118，分类命名CorynebacteriumglutamicumB1，保藏日期：2019年3月16号，湖北，武汉。2.一种权利要求1所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以谷氨酸棒杆菌为对象，在30-37℃，100-200r/min的摇床中培养一段时间，再经过常温常压等离子体诱变处理30-180s；（2）待诱变处理后接种到磺胺胍培养基中，在30-37℃培养1-2天；（3）将步骤（2）得到的菌株利用茚三酮进行特异性显色反应后识别出优势菌株，将该优势菌株在种子培养基中培养后，再在发酵培养基中培养，进行氨基酸分析检测复筛后，筛选得到产量最高的菌株，即高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌CorynebacteriumglutamicumB1。3.根据权利要求2所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，其特征在于，常温常压等离子体诱变的辐射功率为100-120W，氦气流量为3-10L/min，诱变时间为120-150s。4.根据权利要求2所述的高产异亮氨酸的谷氨酸棒状...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚大春，孔帅，吕育财，郑美娟，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42