培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提出了培养基，该培养基包括：抑菌剂，所述抑菌剂包括盐和花青素。该培养基不含抗生素，通过添加花青素替代抗生素起到抑制杂菌的作用，同时巧妙地利用花青素随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用，避免使用刃天青、溴甲酚紫、溴甲酚绿、石蕊、MTT、TTC等指示剂，且紫薯淀粉对双歧杆菌的增殖有促进作用，进而能方便、安全地从粪便中分离出双歧杆菌。

【技术实现步骤摘要】
培养基及其制备方法
本专利技术涉及生物领域，具体地，本专利技术涉及培养基及其制备方法。
技术介绍
益生菌是能够通过消化道定植于肠道的具有益生作用的活性微生物，双歧杆菌是现今普遍认可的益生菌。在食品领域，卫生部将双歧杆菌列入《可用于食品的菌种名单》、《可用于保健食品的菌种名单》及《可用于婴幼儿食品的菌种名单》中，市场上多种益生菌发酵饮料、益生菌酸奶、益生菌奶粉奶片等大多含双歧杆菌。科学研究发现，健康人体消化道中的细菌有100余种，其数量达100兆以上，人体肠道微生物菌群种类和比例的失衡会带来许多健康问题。双歧杆菌存在于人体肠道中，在长期进化过程中与宿主形成了互惠共存的关系。婴幼儿肠道中双歧杆菌的数量较高，可以有效地减少婴幼儿肠道感染的发病率，但随着人年龄的增加变化显著，大量研究证明肠道菌群的紊乱会导致各种疾病的发生，而肠道菌群中益生菌数量充足可以预防和缓解一些疾病。如肠道中的双歧杆菌具有预防腹泻和减少便秘的双向调节功能，具有调整肠道功能紊乱作用。此外，肠道双歧杆菌可以抑制其它有害菌的生长，代谢乳糖缓解乳糖不耐症状，生成维生素、氨基酸等人体必需的营养物质，提高钙、磷、铁的利用率，促进维生素D的吸收。临床试验证明，补充双歧杆菌具有增强机体免疫力，降血压、降血脂，抗炎症、抗过敏、抗肿瘤等多种保健功能。在临床上，双歧杆菌活菌制剂已经广泛应用于腹泻和便秘等肠胃疾病的治疗。目前已经发现的双歧杆菌有30多个亚型，大多数分离自婴儿粪便样品。但由于双歧杆菌是严格厌氧菌，对生长环境和营养条件的要求苛刻，从菌群复杂的粪便样品中分离获得双歧杆菌困难极大，分离效率低且容易丢失目标菌。因此分离双歧杆菌时，通常会在培养基中添加特定抗生素来抑制一些其它肠道细菌(大肠埃希氏菌、肠球菌等)的生长，以保证双歧杆菌的营养。目前用于双歧杆菌分离的培养基中，大多含莫匹罗星、丙酸钠、硫酸新霉素、巴龙霉素、硫霉素、硫入龙霉素等抗生素的一种或多种，在分离过程中容易增强菌株的耐药性，而双歧杆菌携带的抗生素耐药基因可能会转移给宿主肠道中的致病菌，给宿主健康带来隐患。双歧杆菌作为一种大众认可的益生菌，已经广泛的应用在食品工业和医疗卫生领域。外源性双歧杆菌进入人体肠道发挥益生功效的同时，其安全性问题尤其重要。紫甘薯，又称紫薯，是旋花科番薯属一年生草本植物，富含维生素、矿物质、碳水化合物和花青素等，具有栽培简单、适应性广、产量高等优点。目前主要集中应用在食用、药用和食品研发中。紫薯淀粉是选用新鲜优质的紫薯，经去皮、分离、提取、干燥等工艺加工而成，保留了紫薯中的碳水化合物、维生素、矿物质、花青素等，对双歧杆菌的增殖有促进作用。紫薯花青素，是一种天然色素，在酸性条件下颜色偏红，在碱性条件下显蓝色，也是理想的指示剂。冻干紫薯花青素是采用冻干工艺制备的，没有经过长时间高温处理，活性成分高，功效性理想。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：专利技术人发现，紫薯淀粉对双歧杆菌的增殖有促进作用，冻干紫薯花青素可以替代抗生素起到抑制杂菌的作用，同时随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用。基于上述问题的发现，专利技术人提出了一种培养基，该培养基不含抗生素，通过添加冻干紫薯花青素可替代抗生素起到抑制杂菌的作用，同时巧妙地利用花青素随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用，避免添加碳酸钙或指示剂(刃天青、溴甲酚紫、溴甲酚绿、石蕊、MTT、TTC等)；且紫薯淀粉对双歧杆菌增殖有促进作用，从而利用该培养基能够从粪便样品中更方便、更安全地分离获得双歧杆菌。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种培养基。根据本专利技术的实施例，所述培养基包括：抑菌剂，所述抑菌剂包括盐和花青素。专利技术人发现，花青素可替代抗生素起到抑制杂菌的作用，同时巧妙地利用花青素随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用，避免了使用刃天青、溴甲酚紫、溴甲酚绿、石蕊、MTT、TTC等指示剂。根据本专利技术实施例的培养基能够从粪便样品中更方便、更安全地分离获得双歧杆菌。根据本专利技术的实施例，上述培养基还可以包括下列技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述花青素为冻干紫薯花青素。专利技术人发现，不同来源的花青素对肠道菌的抑制程度不同，其中冻干紫薯花青素的对于对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肠球菌、链球菌等一些好氧菌的抑制效果更好。盐无特别要求，只要具有抑菌效果即可。根据本专利技术的具体实施例，所述盐包括氯化锂。氯化锂与花青素一起起到抑菌的作用。根据本专利技术的实施例，进一步包括淀粉，所述淀粉为紫薯淀粉。专利技术人发现，紫薯淀粉对双歧杆菌的增殖有促进作用。根据本专利技术的实施例，所述培养基包括：紫薯淀粉10重量份～20重量份；冻干紫薯花青素1重量份～4重量份；胰蛋白胨5重量份～15重量份；酪蛋白磷酸肽5重量份～10重量份；大豆低聚糖5重量份～15重量份；氯化钠5重量份；氯化锂3重量份；琼脂15重量份。专利技术人发现，上述成分在上述重量份的条件下，冻干紫薯花青素能抑制其他细菌的生长，并不会对双歧杆菌的生长造成抑制，且紫薯淀粉对双歧杆菌的增殖有促进作用，且上述重量份的花青素能够随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用，避免了使用碳酸钙或指示剂(刃天青、溴甲酚紫、溴甲酚绿、石蕊、MTT、TTC等)。根据本专利技术的实施例，所述培养基进一步包括吐温80，所述吐温80的含量为1重量份。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种制备培养基的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：1)将紫薯淀粉、水、胰蛋白胨、酪蛋白磷酸肽、吐温80、大豆低聚糖、氯化钠、氯化锂以及琼脂进行第一混合、pH调节、杀菌处理，得到混合料液A；2)将花青素与水进行第二混合，得到溶液B；3)将混合料液A与溶液B进行第三混合处理，以便得到所述培养基，其中，所述花青素为冻干紫薯花青素，所述冻干紫薯花青素的用量为1重量份～4重量份，所述紫薯淀粉的用量为10重量份～20重量份；所述胰蛋白胨的用量为5重量份～15重量份；所述酪蛋白磷酸肽的用量为5重量份～10重量份；所述大豆低聚糖的用量为5重量份～15重量份；所述氯化钠的用量为5重量份；所述氯化锂的用量为3重量份；所述琼脂的用量为15重量份，基于1000ml的培养基，所述吐温80的用量为1mL。专利技术人发现，上述成分在上述重量份的条件下，冻干紫薯花青素能抑制其他细菌的生长，并不会对双歧杆菌的生长造成抑制，且紫薯淀粉对双歧杆菌的增殖有促进作用，且上述重量份的冻干紫薯花青素能够随乳酸菌产酸发生颜色变化起到指示剂的作用，避免了使用碳酸钙或指示剂(刃天青、溴甲酚紫、溴甲酚绿、石蕊、MTT、TTC等)。根据本专利技术实施例的方法制备得到的培养基能够从粪便样品中更方便、更安全(即不需要添加抗生素避免了在分离过程中容易增强菌株的耐药性，进而避免了双歧杆菌携带的抗生素耐药基因可能会转移给宿主肠道中的致病菌)地分离获得双歧杆菌。根据本专利技术的实施例，上述方法还可以包括下列技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述第一混合处理是通过如下方式进行的：将紫薯淀粉进行糊化处理；糊化后的紫薯淀粉与所述胰蛋白胨、酪蛋白磷酸肽、吐温80、大豆低聚糖、氯化钠、氯化锂以及琼脂进行第四混合处理；用所述水将第四混合处理后的料液进行定容处理，定容至1000ml。在常温下淀粉不溶于水，直接与其他原料混合容易本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养基，其特征在于，包括：抑菌剂，所述抑菌剂包括盐和花青素。

【技术特征摘要】
1.一种培养基，其特征在于，包括：抑菌剂，所述抑菌剂包括盐和花青素。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述花青素为冻干紫薯花青素；任选地，所述盐包括氯化锂。3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，进一步包括淀粉，所述淀粉为紫薯淀粉。4.根据权利要求2或3所述的培养基，其特征在于，包括：紫薯淀粉10重量份～20重量份；冻干紫薯花青素1～4重量份；胰蛋白胨5重量份～15重量份；酪蛋白磷酸肽5重量份～10重量份；大豆低聚糖5重量份～15重量份；氯化钠5重量份；氯化锂3重量份；琼脂15重量份。5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，进一步包括吐温80，所述吐温80的含量为1重量份。6.一种制备培养基的方法，其特征在于，1)将紫薯淀粉、水、胰蛋白胨、酪蛋白磷酸肽、吐温80、大豆低聚糖、氯化钠、氯化锂以及琼脂进行第一混合、pH调节、杀菌处理，得到混合料液A，2)将花青素与水进行第二混合，得到溶液B，3)将混合料液A与溶液B进行第三混合处理，以便得到所述培养基，其中，所述花青素为冻干紫薯花青素，所述冻干紫薯花青素的用量为1～4重量份，所述紫薯淀粉的用量为10重量份～20重量份；所述胰蛋白胨的用量为5重量份～15重量份；所述酪蛋白磷酸肽的用量为5重量份～10重量份；所述大豆低聚糖的用量为5重量份～15重量份；所述氯化钠的用量为5重量份；所述氯化锂的用量为3重量份；所述琼脂的用量为15重量份，基于1000ml的培养基，所述吐温80的用量为1mL。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一混合处理是通过如下方式进行的：将紫薯淀粉进行糊化处理，糊化后的紫薯淀粉与所述胰蛋白胨、酪蛋白磷酸肽、吐温80、大豆低聚糖、氯化钠、氯化锂以及琼脂进行第四混合处理，用所述水将第四混合处理后的料液进行定容处理，定容至1000ml；优选地，所述糊化处理是将紫薯淀粉溶解在75-80℃的水中，搅拌溶解糊化；任选地，所述pH调节处理后的pH为6.5-7.0；任选地，所述杀菌处理是在温度为115℃的条件下进行15min。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在将...

【专利技术属性】
技术研发人员：乌云，刘红霞，母智深，李洪亮，高增丽，杨永龙，孙涛，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15