本发明专利技术提供一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T8，于2018年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018860。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌T8具有良好的纤维素降解能力，能够产生纤维素酶，且具有较强的内切葡萄糖苷酶活性、滤纸酶活性、外切酶活性和β‑葡萄糖苷酶活性。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌T8能够抑制拟茎点霉、且其乙醇上清和蛋白质对拟茎点霉均具有抑制效果。另外，枯草芽孢杆菌T8能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、痢疾杆菌和粪肠杆菌的生长，在抑制人类致病菌中具有开发利用价值。本发明专利技术还提供一种枯草芽孢杆菌T8在产纤维酶和防治猕猴桃软腐病中的应用。
【技术实现步骤摘要】
一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
拟茎点霉属(Phomopsis)是半知菌门、腔孢纲、球壳孢目、球壳孢科真菌中的一个大属，含有100多个不同的种，可寄生于70多种不同科的植物。该属病原菌地域分布广泛,引起植物的叶枯、枝枯、烂茎、溃疡及果腐等严重病害，造成重大的经济损失。如它是猕猴桃采摘后的软腐病。猕猴桃枝枯病病原菌，桃僵芽，车前草穗枯病的致病菌株。目前防治拟茎点霉主要是采用化学农药，如：阳廷密等采用8种农药对柑桔拟茎点霉的室内毒力及田间防治(阳廷密等.8种农药对柑桔拟茎点霉毒力测定及田间防治试验.中国南方果树.2014,43(2):52-53)。孙燕芳等采用15种化学农药对芦笋茎枯病进行的室内筛选实验(孙燕芳等.15种药剂对芦笋茎枯病病原菌的毒力测定.2013,33(4):71-75)，吴文能测试了20余种杀菌剂对猕猴桃主要致病菌的室内毒力(吴文能等.猕猴桃软腐病病原菌分离鉴定及抑菌药剂筛选.植物保护学报.2017.44(5):826-832)，但微生物防治剂报道较少。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌及其应用。为实现上述目的，本专利技术提供一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8，于2018年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2018860。较佳地，所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8的16srDNA具有如SEQID:1所示的核苷酸序列。较佳地，所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、痢疾杆菌和粪肠杆菌。较佳地，将所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8接种于以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物的发酵产酶培养基上，进行发酵培养制得纤维素酶。较佳地，所述发酵产酶培养基包括CMC-Na8～15g/L、(NH4)2SO42～5g/L、MgSO4·7H2O0.3～0.7g/L、K2HPO41～3g/L、牛肉膏2～6g/L、蛋白胨6～12g/L。较佳地，所述发酵培养条件为，培养温度为23～35℃，摇床转速为120～180rpm/min。本专利技术还提供一种上述抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌在防治猕猴桃软腐病中的应用。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌T8具有以下优点：(1)本专利技术提供的枯草芽孢杆菌T8具有良好的纤维素降解能力，能够产生纤维素酶，且具有较强的内切葡萄糖苷酶活性、滤纸酶活性、外切酶活性和β-葡萄糖苷酶活性，在生产纤维素酶上具有应用价值。(2)本专利技术提供的枯草芽孢杆菌T8能够抑制拟茎点霉、且其乙醇上清和蛋白质对拟茎点霉均具有抑制效果，在防治猕猴桃软腐病中具有应用价值。另外，枯草芽孢杆菌T8能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、痢疾杆菌和粪肠杆菌的生长，在抑制人类致病菌中具有开发利用价值。本专利技术的枯草芽孢杆菌T8，保藏日期为2018年12月05日，保藏编号为CCTCCNO：M2018860，分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，保藏中心地址为：中国武汉武汉大学。附图说明图1为实施例1中枯草芽孢杆菌透明水解圈图；图2为实施例2中葡萄糖标准曲线；图3为实施例3中拟茎点霉抑菌实验结果图；图4为实施例3中枯草芽孢杆菌T8蛋白质和乙醇上清拟茎点霉抑菌实验结果图；图5为实施例3中大肠杆菌抑菌实验结果图；图6为实施例3中金黄色葡萄球菌抑菌实验结果图；图7为实施例3中白色念珠菌抑菌实验结果图；图8为实施例3中痢疾杆菌抑菌实验结果图；图9为实施例3中粪肠杆菌抑菌实验结果图。具体实施方式为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和有益效果，下面将结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。需说明的是，下述实施所述方法是对本专利技术做的进一步解释说明，不应当作为对本专利技术的限制。本专利技术的实施例中所用的材料、试剂若无特殊说明皆可从商业途径获得。实施例1产纤维素酶菌株的筛选筛选培养基：CMC-Na10g/L、(NH4)2SO41.4g/L、MgSO40.3g/L、KH2PO42g/L、MnSO41.6mg/L、FeSO45mg/L、ZnSO42.5mg/L、CoCl22.0mg/L、琼脂20g/L、pH7.0种子培养基：CMC-Na10g/L，蛋白胨3g/L，KH2PO44g/L、MgSO4·7H2O0.03g/L、pH6.0。发酵产酶培养基：CMC-Na10g/L、(NH4)2SO44.0g/L、MgSO4·7H2O0.5g/L、K2HPO42g/L、牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L(pH自然)初筛：称取江西南昌青山湖底淤泥土样10g，放入装有90mL无菌水的三角瓶中，置于摇床150rpm振荡30min后取出，逐级稀释成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6的6种浓度，将6种浓度的稀释液分别涂布于筛选培养基上，重复3次，于25℃培养3d.待菌丝长出后，再接种于新的筛选培养基上纯化，直至获得纯菌株为止。复筛：透明圈法初筛对纤维素有降解活性的菌株，将分离的单个菌株及其混合菌分别点种于筛选培养基上，25℃培养3d，用1.0g/L刚果红染色30min，倾去染液，再用1mol/L的NaCl水溶液脱色1h，测菌落直径(d，cm)，和水解圈直径(D，cm)，采用Dp表示水解能力：Dp＝(D/d)2。结果显示，菌株T8具有良好的纤维素降解能力，如图1所示，Dp＝(D/d)2＝23。菌株T8鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其16srDNA具有如SEQID:1所示的核苷酸序列。实施例2枯草芽孢杆菌T8降解酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定滤纸酶活性、内切型葡萄糖苷酶活性、外切酶活性和β-葡萄糖苷酶活性。2.1葡萄糖标准曲线制作葡萄糖标准溶液：称取于103℃下烘干至恒重的无水葡萄糖1g，用水定容至100mL；磷酸缓冲液：0.1mol/LpH6.0(适用于中性纤维素酶)分别称取一水磷酸二氢钠121.0g和二水磷酸氢二钠21.89g，将其溶解在1L去离子水中。调节溶液的pH到6.0；DNS试剂：称取3,5-二硝基水杨酸10g，置于约600mL水中，逐渐加入氢氧化钠l0g，在50℃水浴中(磁力)搅拌溶解后，再依次加入酒石酸钾钠200g、苯酚(重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000mL，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。分别吸取葡萄糖标准贮备溶液0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于l0mL，容量瓶中，用水定容至10mL，盖塞，摇匀备用。按表1规定的量，分别吸取葡萄糖标准使用溶液、缓冲溶液和DNS试剂于各管中(每管号平行作3个样)，混匀。将标准管同时置于沸水浴中，反应10min。取出，迅速冷却至室温，用水定容至25mL，盖塞，混匀。用10mm比色杯，在分光光度计波长540nm处测量吸光度。以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)T8，于2018年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2018860。
【技术特征摘要】
1.一种抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8，于2018年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2018860。2.如权利要求1所述的抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8的16srDNA具有如SEQID:1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T8能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、痢疾杆菌和粪肠杆菌。4.如权利要求1-3任一项所述的抑制拟茎点霉的枯草芽孢杆菌在产纤维酶中的应用，其特征在于：将...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金昌，靳亮，关丽梅，郭燕，
申请(专利权)人：江西省科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：江西,36
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