一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海绵状bFGF‑PLGA微球药物缓释载体的制备方法，该方法具体步骤为：1)将蚕茧依次进行脱胶、溶解、过滤、透析、浓缩处理，获得丝素蛋白液；2)将I型胶原蛋白的乙酸溶液加入至丝素蛋白液中，获得丝素蛋白与I型胶原蛋白的混合蛋白溶液；3)将bFGF水溶液作为内水相，PLGA的有机溶液作为油相，两者经过复乳化，获得bFGF‑PLGA溶液；4)除去bFGF‑PLGA溶液中的有机溶剂，再进行离心沉淀、冷冻干燥，获得bFGF‑PLGA微球；5)将bFGF‑PLGA微球加入所述混合蛋白溶液中搅拌均匀，并进行预冻，再依次进行冷冻干燥、固化、再冷冻干燥处理，获得海绵状bFGF‑PLGA微球药物缓释载体。本发明专利技术获得的海绵状bFGF‑PLGA微球药物缓释载体达到既能很好的保持bFGF生物活性，并且在应用上有较长时间缓释的效果。

Preparation of a sustained-release drug carrier of spongy bFGF-PLGA microspheres

The invention discloses a preparation method of spongy bFGF PLGA microsphere drug sustained release carrier. The specific steps of the method are as follows: 1) degumming, dissolving, filtering, dialysis and concentrating silk cocoons in turn to obtain silk fibroin solution; 2) adding acetic acid solution of type I collagen into silk fibroin solution to obtain mixed protein solution of silk fibroin and type I collagen; 3) adding bFGF into silk fibroin solution; Aqueous solution acts as internal water phase, PLGA organic solution acts as oil phase, and both of them are re-emulsified to obtain bFGF PLGA solution; 4) remove the organic solvent in bFGF PLGA solution, then centrifugal precipitation and freeze-drying to obtain bFGF PLGA microspheres; 5) add bFGF PLGA microspheres into the mixed protein solution and stir evenly, and pre-freeze-drying, solidification, freeze-drying in turn. After freeze-drying treatment, sponge-like bFGF PLGA microspheres were obtained as drug delivery carriers. The spongy bFGF PLGA microsphere drug sustained-release carrier obtained by the invention can not only maintain the biological activity of bFGF, but also has a long-term sustained-release effect in application.

【技术实现步骤摘要】
一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法
本专利技术属于生物医药材料
，具体涉及一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法。
技术介绍
目前，常用的GFs(GrowthFactors)缓释载体材料有两种，人工合成材料和天然材料，而人工的又分为可降解的和不可降解的合成材料。目前研究最多的人工合成支架材料包括聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸(PLA)、聚乳酸和聚羟基乙酸的共聚物(PLGA)，聚乙内酯(PCL)和聚丙交酯等。其中聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸(PLA)、聚乳酸和聚羟基乙酸的共聚物(PLGA)是最早FDA认证的同意应用于人体的合成可降解的生物高分子材料。PLGA共聚物是由聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸(PLA)各50％的比例混合，结合了这两者的优点，能够完全降解，但强度较高，降解时间延长，可精确调节降解时间，但是存在生物相容性差的缺点。天然材料包括胶原、明胶、壳聚糖、透明质酸等，其生物相容性好，无抗原性，能促进细胞黏附和增殖，且可根据需要制成不同的形状。而天然材料中，胶原蛋白是脊柱动物含量最多，分布最广的蛋白质，体内具有广泛的生物学活性；体外应用具有低免疫原性，良好的生物相容性、可降解性、可参与组织修复重建等优越性，并且其来源丰富，是最重要的天然可降解的生物医用材料。胶原蛋白在生长因子截获，储存、运输等方面有很重要的作用，可以作为生长因子的载体。很多研究报导利用胶原蛋白作为支架，接种碱性成纤维细胞，构建人工皮肤。在众多的胶原蛋白中，I型胶原蛋白属于序列保守性的蛋白质，是被人们了解得最为清楚的，也是组织分布最为广泛的胶原蛋白，在哺乳动物不同种属之间氨基酸种类、数目和排列顺序上基本相同，抗原性很低，因此应用比较广泛。近年来，国内外很多学者也致力于GFs(GrowthFactors)缓释载体的研究，但有效的bFGF缓释系统中，理想的缓释载体是应用的关键，目前的缓释载体只要包括bFGF-PLGA和bFGF-胶原海绵载体，前者只能应用在关节间隙，骨折或静脉给药，在大创伤口愈合应用方面存在不足，应用范围比较窄，并且由于是人工合成的高分子材料，具有疏水性，因此在使用过程，存在组织生物相容性差的缺点；后者的吸水性好，具有高的生物相容性，但是单独做为bFGF的载体，胶原海绵的微纤维与bFGF只有较低的亲和力，以物理吸附方式负载bFGF，因其具有多孔性，一旦接触体液或者是水，导致海绵溶胀及降解过快，不利于bFGF的活性保持，且不能有效地缓慢释放bFGF。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，解决了现有技术得到的缓释载体不能很好的保持bFGF生物活性、缓释效果差、生物相容性不佳的问题。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，该方法通过以下步骤实现：步骤1，将蚕茧依次进行脱胶、溶解、过滤、透析、浓缩处理，获得丝素蛋白液；步骤2，向I型胶原蛋白中加入乙酸溶液得到I型胶原蛋白的乙酸溶液，再将所述I型胶原蛋白的乙酸溶液加入至所述步骤1获得的丝素蛋白液中，获得丝素蛋白与I型胶原蛋白的混合蛋白溶液；步骤3，将bFGF水溶液作为内水相，PLGA的有机溶液作为油相，两者经过复乳化，获得bFGF-PLGA溶液；步骤4，除去所述步骤3获得的bFGF-PLGA溶液中的有机溶剂，再进行离心沉淀、冷冻干燥，获得bFGF-PLGA微球；步骤5，将所述步骤4获得的bFGF-PLGA微球加入至步骤2获得的混合蛋白溶液中，搅拌均匀，并于-90～-50℃下进行预冻，再依次进行冷冻干燥、固化、再冷冻干燥处理，获得海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体。优选地，所述蚕茧为桑蚕茧或柞蚕茧。优选地，所述步骤2中，所述乙酸溶液中乙酸的质量百分比为0.1～0.3％，所述混合蛋白溶液中胶原蛋白和丝素蛋白的质量百分比分别为5～10％和3～6％。优选地，所述步骤3的具体方法为：将PLGA溶于有机溶剂中得到PLGA的有机溶液，将bFGF溶于双蒸水中得到bFGF的水溶液，再将bFGF的水溶液加入PLGA的有机溶液中，均化后形成初乳；再向所述初乳中加入聚乙烯醇溶液，通过高速乳均机作用，获得W/O/W型的bFGF-PLGA溶液；优选地，所述PLGA是由50％PLA和50％PLG组成的。优选地，所述高速乳均机乳均时的转速为1500～2500rpm，乳均时间为1～3min。优选地，所述bFGF水溶液中bFGF的质量百分比为0.00001～0.001％，所述PLGA的有机溶液中PLGA的质量百分比为20～70％。优选地，所述PLGA的有机溶液中的有机溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、1，2-二氯乙烷中的至少一种。优选地，所述步骤5中，所述预冻的时间为8h～30h。优选地，所述步骤5中，所述固化时采用70～90％的乙醇进行固化处理20～30min。与现有技术相比，本专利技术获得的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体达到既能很好的保持bFGF生物活性，并且在应用上有较长时间缓释的效果，该缓释载体又能与人体有很好的生物相容性；本专利技术的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体应用范围广泛，由于胶原具有迅速止血的功效，丝素蛋白具有较好的生物相容性，并且可以作为细胞生长的支架材料，因此可应用于大创伤的治疗和皮肤损伤修复等方面。附图说明图1为本专利技术实施例1获得的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体低倍下的电镜扫描图；图2为本专利技术实施例1获得的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体高倍下的电镜扫描图；图3为本专利技术实施例1获得的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体体外释放曲线图；图4为本专利技术实施例1获得的海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体对Balb/c3T3细胞增殖作用曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供的一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，该方法通过以下步骤实现：步骤1，将蚕茧依次进行脱胶、溶解、过滤、透析、浓缩处理，获得丝素蛋白液；其中蚕茧为桑蚕茧或柞蚕茧；步骤2，将I型胶原蛋白中加入乙酸溶液得到I型胶原蛋白的乙酸溶液，再将所述I型胶原蛋白的乙酸溶液加入至步骤1获得的丝素蛋白液中，获得丝素蛋白与I型胶原蛋白的混合蛋白溶液；其中，所述乙酸溶液中乙酸的质量百分比为0.1～0.3％，所述混合蛋白溶液中胶原蛋白和丝素蛋白的质量百分比分别为5～10％和3～6％；步骤3，将PLGA(PLGA是由50％PLA和50％PLG组成的)溶于有机溶剂中得到PLGA有机溶液(作为油相)，将bFGF溶于双蒸水中得到bFGF的水溶液(作为水相)，再将bFGF水溶液加入PLGA有机溶液中，均化后形成初乳；再向所述初乳中加入聚乙烯醇溶液，通过高速乳均机作用(高速乳均机的转速为1500～2500rpm，乳均时间为1～3min)，形成W/O/W型的bFGF-PLGA溶液；其中，bFGF水溶液中bFGF的质量百分比为0.00001～0.001％，PLGA的有机溶液中PLGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海绵状bFGF‑PLGA微球药物缓释载体的制备方法，其特征在于，该方法通过以下步骤实现：步骤1，将蚕茧依次进行脱胶、溶解、过滤、透析、浓缩处理，获得丝素蛋白液；步骤2，向I型胶原蛋白中加入乙酸溶液得到I型胶原蛋白的乙酸溶液，再将所述I型胶原蛋白的乙酸溶液加入至所述步骤1获得的丝素蛋白液中，获得丝素蛋白与I型胶原蛋白的混合蛋白溶液；步骤3，将bFGF水溶液作为内水相，PLGA的有机溶液作为油相，两者经过复乳化，获得bFGF‑PLGA溶液；步骤4，除去所述步骤3获得的bFGF‑PLGA溶液中的有机溶剂，再进行离心沉淀、冷冻干燥，获得bFGF‑PLGA微球；步骤5，将所述步骤4获得的bFGF‑PLGA微球加入至步骤2获得的混合蛋白溶液中，搅拌均匀，并于‑90～‑50℃下进行预冻，再依次进行冷冻干燥、固化、再冷冻干燥处理，获得海绵状bFGF‑PLGA微球药物缓释载体。

【技术特征摘要】
1.一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，其特征在于，该方法通过以下步骤实现：步骤1，将蚕茧依次进行脱胶、溶解、过滤、透析、浓缩处理，获得丝素蛋白液；步骤2，向I型胶原蛋白中加入乙酸溶液得到I型胶原蛋白的乙酸溶液，再将所述I型胶原蛋白的乙酸溶液加入至所述步骤1获得的丝素蛋白液中，获得丝素蛋白与I型胶原蛋白的混合蛋白溶液；步骤3，将bFGF水溶液作为内水相，PLGA的有机溶液作为油相，两者经过复乳化，获得bFGF-PLGA溶液；步骤4，除去所述步骤3获得的bFGF-PLGA溶液中的有机溶剂，再进行离心沉淀、冷冻干燥，获得bFGF-PLGA微球；步骤5，将所述步骤4获得的bFGF-PLGA微球加入至步骤2获得的混合蛋白溶液中，搅拌均匀，并于-90～-50℃下进行预冻，再依次进行冷冻干燥、固化、再冷冻干燥处理，获得海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体。2.根据权利要求1所述的一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，其特征在于，所述蚕茧为桑蚕茧或柞蚕茧。3.根据权利要求2所述的一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，所述乙酸溶液中乙酸的质量百分比为0.1～0.3％，所述混合蛋白溶液中胶原蛋白和丝素蛋白的质量百分比分别为5～10％和3～6％。4.根据权利要求3所述的一种海绵状bFGF-PLGA微球药物缓释载体的制备方法，其特征在于，所述步骤3的具体方法为：将PLGA溶于有机溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄江鸿，黄志望，蔡高瑞，王大平，熊建义，刘永龙，郑鸿坚，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44