一种榆耳液体发酵培养基及发酵培养方法技术

本发明专利技术公开了一种榆耳液体发酵培养基及发酵培养方法，该方法选用合适的培养基和培养条件，通过中药桑叶、艾叶、马齿苋酶提取物促进榆耳菌丝体的生长，从而缩短榆耳液体发酵的时间，同时还增加了榆耳菌丝体的生物量及多糖物质的含量。

A Liquid Fermentation Medium and Fermentation Culture Method of Ulmus pumila

The present invention discloses a liquid fermentation medium and a fermentation culture method of Ulmus ulmoides. The method chooses suitable medium and culture conditions to promote the growth of Ulmus ulmoides mycelium through extracts of mulberry leaves, mugwort leaves and purslane enzyme, thereby shortening the time of liquid fermentation of Ulmus ulmoides, and increasing the biomass of Ulmus ulmoides mycelium and the content of polysaccharides.

【技术实现步骤摘要】
一种榆耳液体发酵培养基及发酵培养方法
本专利技术涉及发酵培养
，具体涉及一种榆耳液体发酵培养基以及榆耳液体发酵培养方法。
技术介绍
榆耳(GloeostereumincamatumS.ItoetImai)学名为肉红胶韧革菌，别名榆蘑、肉蘑、胶韧革菌、肉质粘韧菌、肉红胶韧革菌、榆射脉菌、粘韧革菌、射脉菌。属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、付革菌科(Corticiaceae)、胶韧革菌属(Gloeostereum)药食兼用的真菌。多生长在榆（Ulmuspumila）、春榆（U.propinqua）的树干、树桩、枯枝或树洞处，也可生长在糖槭树上。主要分布于辽宁、黑龙江、吉林等地以及日本的北海道区域。榆耳子实体含有丰富的蛋白质，其蛋白质含量介于动物和植物之间，是一种高蛋白、低脂肪食品。人工栽培榆耳的粗蛋白含量几乎达到了野生榆耳的2倍，表明人工栽培榆耳是野生榆耳很好的替代品，具有较高的开发价值（张金霞，1988，食用菌，榆蘑的驯化）。榆耳发酵产物中除含有丰富的多糖外，还含有很多种成分，如：蛋白质、维生素、黄酮、三萜皂苷、生物碱、18种氨基酸、无机盐以及微量元素等（李典忠，2002，吉林农业大学，子实体及发酵液化学成分和药理活性研究）；子实体中含有9种化合物，发酵液中含有6种化合物（李典忠，2002，吉林农业大学博士论文，子实体及发酵液化学成分和药理活性研究）。目前研究认为榆耳发酵产物具有抑菌活性强，抑菌谱很广的特点（李典忠，2002，吉林农业大学博士论文，子实体及发酵液化学成分和药理活性研究；马珊珊，2008，吉林农业大学研究生论文，榆耳（Gloeostereumincarnatum）的生药学研究；柳洪芳，2010，中国生化药物杂志，榆耳多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究）。榆耳发酵上清液对大肠杆菌、福杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌、炭疽杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肠炎沙门氏菌等多种细菌均有明显的抑制作用，榆耳发酵上清液对肠炎沙门氏杆菌的体外抑制作用最为明显，与红霉素、氯霉素和苯甲酸钠溶液的体外抑菌活性相当（陈颖，1990，中国食用菌，榆耳发酵液抑菌作用的探讨）。传统榆耳栽培费时费力，应用液体深层发酵技术相比于传统的栽培技术可以快速、稳定、规模化地获取药用真菌菌丝体及具有活性的次级代谢产物，如今液体深层发酵生产已成为药用真菌资源开发的重要手段。在榆耳发酵培养方面，发酵培养基对其质量具有十分重要的影响，因此，要想增加榆耳的产量及改善其质量，对其培养基进行改进十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种榆耳液体发酵培养基，该培养基中添加了中药酶提取液，通过桑叶、艾叶、马齿苋酶提取液对榆耳培养的促进作用，可以缩短榆耳的液体发酵时间，同时增加榆耳菌丝体的产量及多糖物质的含量。本专利技术的另一个目的在于提供一种榆耳液体发酵培养方法，培养时通过在培养基中添加中药酶提取液，从而缩短榆耳的液体发酵时间，同时增加榆耳菌丝体的产量及多糖物质的含量。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种榆耳液体发酵培养基，所述培养基包括以下重量份的组分：土豆200份、葡萄糖20份、亚硝酸钠0.2份、磷酸二氢钾1份和中药酶提取液0.2-0.4份，其中所述中药酶提取液包括以下重量份的成分：桑叶30份、艾叶40份和马齿苋30份。上述榆耳液体发酵培养基的制备方法为：将按照重量份计的200份土豆切成0.8-1.2cm的小块，在沸水中煮20分钟，然后进行过滤，取汁，后加入葡萄糖20份，亚硝酸钠0.2份，磷酸二氢钾1份，中药酶提取液0.2-0.4份，定容成1000mL，即得，自然pH值。进一步地，所述中药酶提取液的制备方法为：将中药桑叶、艾叶和马齿苋按照以下重量份：桑叶30份、艾叶40份和马齿苋30份放入酶解罐中，加入蒸馏水得到药水混合物，中药和蒸馏水的重量比为1:10，然后加入纤维素降解酶和蛋白降解酶，纤维素降解酶加入量为药水混合物总重量的1-1.5%，蛋白质降解酶加入量为药水混合物总重量的0.5-1%，再在恒温50℃下降解24小时，最后取出过滤得滤液即为中药酶提取液。本专利技术还公开了利用上述榆耳发酵培养基对榆耳进行液体发酵培养的方法，所述方法包括如下步骤：（1）榆耳菌种复壮培养：首先配制榆耳斜面固体培养基：将按照重量份计的200份土豆切成0.8-1.2cm的小块，在沸水中煮20分钟，然后进行过滤，取汁，后加入葡萄糖20份，亚硝酸钠0.2份，磷酸二氢钾1份，中药酶提取液0.2-0.4份，琼脂20份，融化后，定容成1000mL，即得，自然pH值；然后将榆耳斜面固体培养基分装、灭菌、冷却、接种和培养后，将长势好没有出现退化现象的榆耳固体菌种挑选出；（2）榆耳液体发酵培养基的分装和灭菌：将榆耳液体发酵培养基分装至500mL的三角瓶中，每个三角瓶中装250mL；封口，在121℃条件下，灭菌20min；（3）液体原种制备：将选出的长势好没有出现退化现象的榆耳固体菌种在无菌操作下接种到榆耳液体发酵培养基上，在温度为20℃、转速为120-150r/min的摇床中培养140-145h后取出，进行液体菌种发酵质量的检查，选择长势好的榆耳液体菌种；具体地，液体菌种发酵质量的检查包括：A.生物质量检查：根据菌丝球的大小和菌量来判断，当菌丝球浓度达到80%以上，菌丝球大小达到1毫米以上结束培养；B.感官分析：成熟的菌丝球具有榆耳的味道，其发酵液澄清透明，如有细菌则具有酸、臭味道，说明发酵失败；C.显微镜观察：发酵过程定时取样在显微镜下观察，如有异常说明菌种生长不良。（4）榆耳液体发酵培养将榆耳液体菌种在无菌操作下接种到液体发酵培养基上，在温度为22-25℃、转速为120-150r/min的摇床中培养140-145h，当菌丝球浓度达到80%以上，菌丝球大小达到1毫米以上结束培养，取出过滤烘干即得。发酵培养的榆耳可以作为提取榆耳多糖或者作为保健食品的原材料。其中，进一步地，步骤（1）中榆耳斜面固体培养基分装和灭菌的方法为：将配制好的榆耳斜面固体培养基分装于18mm×180mm试管中，封口，在121℃条件下，灭菌20min。进一步地，步骤（1）中榆耳斜面固体培养基接种和培养的方法具体为：灭完菌后取出榆耳斜面固体培养基，自然冷却至20℃-30℃，在无菌条件下，接入在0-4℃保存的榆耳菌种；将接好种的榆耳斜面固体培养基置于恒温培养箱里，25℃培养8天。进一步地，步骤（4）所述榆耳液体发酵培养基装入容量为500mL的三角瓶中，每瓶250mL，然后121℃灭菌30min、冷却接种，每瓶接液体菌种20mL。优选地，榆耳液体发酵培养的条件为：置于恒温振荡培养箱里，25℃条件下，转速为130r/min的摇床中培养140h。本专利技术具有如下优点：本专利技术在榆耳的发酵培养基上添加了中药酶提取液，其中中药桑叶、艾叶、马齿苋酶提取物能够促进榆耳菌丝体的生长，从而缩短榆耳液体发酵的时间，同时提高榆耳多糖含量，得到的榆耳可以作为中药原料药及食品原料。传统的榆耳培养方法其子实体生长时间从接种到采收需60天以上，生长周期长投资大，难以满足中药生产需求。本专利技术在榆耳液体培养基中添加中药酶提取液，可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种榆耳液体发酵培养基，其特征在于，所述培养基包括以下重量份的组分：土豆200份、葡萄糖20份、亚硝酸钠0.2份、磷酸二氢钾1份和中药酶提取液0.2‑0.4份，其中所述中药酶提取液包括以下重量份的成分：桑叶30份、艾叶40份和马齿苋30份。

【技术特征摘要】
1.一种榆耳液体发酵培养基，其特征在于，所述培养基包括以下重量份的组分：土豆200份、葡萄糖20份、亚硝酸钠0.2份、磷酸二氢钾1份和中药酶提取液0.2-0.4份，其中所述中药酶提取液包括以下重量份的成分：桑叶30份、艾叶40份和马齿苋30份。2.根据权利要求1所述的榆耳液体发酵培养基，其特征在于，所述培养基的制备方法为：将按照重量份计的200份土豆切成0.8-1.2cm的小块，在沸水中煮20分钟，然后进行过滤，取汁，后加入葡萄糖20份，亚硝酸钠0.2份，磷酸二氢钾1份，中药酶提取液0.2-0.4份，定容成1000mL，即得，自然pH值。3.根据权利要求1所述的榆耳液体发酵培养基，其特征在于，所述中药酶提取液的制备方法为：将中药桑叶、艾叶和马齿苋按照以下重量份：桑叶30份、艾叶40份和马齿苋30份放入酶解罐中，加入蒸馏水得到药水混合物，中药和蒸馏水的重量比为1:10，然后加入纤维素降解酶和蛋白降解酶，纤维素降解酶和蛋白质降解酶的加入量分别为药水混合物总重量的1-1.5%和0.5-1%，再在恒温50℃下降解24小时，最后取出过滤得滤液即为中药酶提取液。4.一种利用权利要求1-3任一项所述的榆耳液体发酵培养基对榆耳液体发酵培养的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）榆耳菌种复壮培养：首先配制榆耳斜面固体培养基：将按照重量份计的200份土豆切成0.8-1.2cm的小块，在沸水中煮20分钟，然后进行过滤，取汁，后加入葡萄糖20份，亚硝酸钠0.2份，磷酸二氢钾1份，中药酶提取液0.2-0.4份，琼脂20份，融化后，定容成1000mL，即得，自然pH值；然后将榆耳斜面固体培养基分装、灭菌、冷却、接种和菌种培养后，将长势好没有出现退化现象的榆耳固体菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宇，王建瑞，谷丽凡，彭炜航，程显好，崔永进，田伟，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37