一种肿瘤疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种肿瘤疫苗及其制备方法。所述肿瘤疫苗包含阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。本发明专利技术还提供一种制备所述肿瘤疫苗的方法，包括1)由哺乳动物外周血或脐带血获取单个核细胞，将其诱导为成熟树突状细胞或者由哺乳动物的骨髓获取骨髓造血前体细胞，将其诱导为成熟树突状细胞；2)阻断所述成熟树突状细胞的CD44与CD11b分子信号通路；3)收集阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。本发明专利技术提供的肿瘤疫苗具有良好的抗肿瘤作用，同时抗瘤谱广泛，并具有良好的使用安全性。

A Cancer Vaccine and Its Preparation Method

The invention provides a cancer vaccine and a preparation method thereof. The tumor vaccine comprises dendritic cells that block CD44 and CD11b molecular signaling pathways. The invention also provides a method for preparing the tumor vaccine, including 1) obtaining mononuclear cells from mammalian peripheral blood or umbilical cord blood, inducing them to mature dendritic cells or obtaining bone marrow hematopoietic precursor cells from mammalian bone marrow, inducing them to mature dendritic cells, 2) blocking CD44 and CD11b molecular signaling pathways of the mature dendritic cells, 3) collecting and blocking them; Dendritic cells were disrupted by CD44 and CD11b signaling pathways. The tumor vaccine provided by the invention has good anti-tumor effect, broad anti-tumor spectrum and good safety in use.

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤疫苗及其制备方法
本专利技术涉及一种疫苗及其制备方法，尤其涉及一种肿瘤疫苗及其制备方法。
技术介绍
树突状细胞是免疫系统中的专职抗原递呈细胞，在免疫细胞的启动、活化、效应和稳态维持等阶段均发挥重要作用。自树突状细胞被发现以来，其在抗肿瘤领域的应用就成为肿瘤免疫的热点。树突状细胞肿瘤疫苗借助树突状细胞强大的免疫激活能力，对受体的免疫系统发挥肿瘤抗原特异性/非特异性激活效应，逆转癌前或肿瘤中形成的抑制性免疫微环境，介导对癌前突变细胞或者肿瘤细胞的免疫杀伤和清除。2011年，Provenge作为第一个被FDA批准的树突状细胞肿瘤疫苗上市应用于前列腺癌治疗，揭开了近年来肿瘤免疫治疗飞速发展的新篇章。但后续治疗过程发现，Provenge抗肿瘤效果极其有限，其他的树突状细胞瘤苗，在临床实验中，多停留在临床I/II期，极少数临床III期的疫苗，最终也因疗效不佳而停滞。但后续治疗过程发现，Provenge抗肿瘤效果极其有限，其他的树突状细胞瘤苗，在临床实验中，多停留在临床I/II期，极少数能够进入临床III期，最终也因疗效不佳而停滞。CD44分子属于黏附分子，是一种广泛表达于细胞表面的I类跨膜单链糖蛋白；该分子呈现多态性，分子质量在80-200kb间变化；主要介导细胞间相互作用、细胞迁移和细胞黏附，并参与淋巴细胞的归巢和T淋巴细胞的活化与信号转导，促进T细胞、B细胞分化以及T细胞活化。CD11b分子隶属整合素家族成员，是由ItegrinαM和β2两个亚基构成的跨膜分子，广泛表达在髓系来源的多种免疫细胞表面。尚无同时将CD44分子和CD11b分子应用在肿瘤免疫治疗领域的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种肿瘤疫苗，包含同时阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞，所述肿瘤疫苗具有良好的免疫激活和抗肿瘤作用，同时抗瘤谱广泛，并具有良好的使用安全性。本专利技术还提供了所述的肿瘤疫苗在制备用于预防或治疗肿瘤的药物中的应用。本专利技术还提供了一种预防或治疗肿瘤用组合物，包含所述的肿瘤疫苗作为有效成分。该组合物同时具有预防和治疗肿瘤的作用。本专利技术还提供了一种制备肿瘤疫苗的方法，实现了将阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞作为疫苗实体制备肿瘤疫苗。本专利技术提供的一种肿瘤疫苗，包含阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。在本专利技术的方案中，阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞(表示为CD11b-/-CD44-/-DC细胞)可以为以下的树突状细胞：1)所述树突状细胞表面上表达MHC-I类分子、MHC-II类分子、CD40、CD80和CD86，但不表达CD44与CD11b；2)所述树突状细胞表面上的CD44与CD11b分子被抗体、配体封闭或被小分子抑制剂阻断。进一步的，所述CD44分子的配体包括透明质酸、胶原蛋白、层黏连蛋白、纤连蛋白等；所述CD11b分子的配体包括可溶性CD54,ICAM-2等；所述抗CD44分子的抗体与抗CD11b分子的抗体可以商购获得。在本专利技术的一个方案中，出于刺激T细胞的活化效率和强度以及增加树突状细胞总数量(因为本专利技术的树突状细胞疫苗在血液中的比例较小)从而延长回输后血中树突状细胞半衰期的考虑，本专利技术的所述肿瘤疫苗允许包含一定比例的CD11b+/+CD44+/+DC细胞，即没有阻断CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。具体的，在本专利技术的方案中，所述肿瘤疫苗中阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞占总树突状细胞的比例为30％以上，优选40％以上，更优选50％以上，最优选60％以上。更进一步的，所述肿瘤疫苗中阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞占总树突状细胞的比例为100％。在本专利技术的方案中，所述树突状细胞源自哺乳动物。所述哺乳动物可以是健康动物和患癌动物。进一步的，所述哺乳动物为健康动物。更进一步的，所述哺乳动物可以是牛科动物、马科动物、猫科动物、犬科动物、兔科动物、猪科动物、骆驼科动物、啮齿类动物和灵长类动物中的一种或多种。更进一步的，所述哺乳动物可以是牛、马、犬、山羊、绵羊、猫、兔、猪、骆驼、羊驼、大鼠、小鼠、豚鼠、非人灵长类动物(诸如猿、猴、狒狒、猩猩)和人中的一种或多种。本专利技术所述哺乳动物也可以是常见的宠物。进一步，所述宠物包括猫、龙猫、仓鼠、小白鼠、沙鼠、金花鼠、八齿鼠、松鼠、鼯鼠、大花鼠，兔、貂、刺猬、豚鼠、猪、狗和猴中的一种或多种。本专利技术提供的肿瘤疫苗可以是任何适于临床应用的剂型和用药规格，例如，可以是注射剂。所述肿瘤疫苗的制备方法还包括按照常规的疫苗制备方法制成所需要的剂型，例如制成注射剂，可以是通过加入生理盐水制成注射针剂等。本专利技术提供的肿瘤疫苗可以通过静脉注射、腹腔或皮下注射给药，对个体进行免疫以抑制肿瘤发生或进行治疗以杀伤肿瘤细胞。具体的，对于50kg体重人体的临床应用，所述肿瘤疫苗每次注射量可以为1×106～1×108个细胞，优选1～10×107个细胞，所述细胞为阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。本专利技术还提供了所述的肿瘤疫苗在制备用于预防或治疗肿瘤的药物中的应用。进一步的，所述肿瘤包括黑色素瘤、淋巴瘤、结直肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、食管癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌和肾癌中的一种或多种。本专利技术还提供了一种预防或治疗肿瘤用组合物，包含所述的肿瘤疫苗作为有效成分。进一步的，所述肿瘤包括黑色素瘤、淋巴瘤、结直肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、食管癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌和肾癌中的一种或多种。本专利技术的预防或治疗肿瘤用组合物包含本专利技术的肿瘤疫苗作为主要活性成分。进一步的，所述预防或治疗肿瘤用组合物中还可以含有其它具有治疗用途的生物分子(例如，蛋白质、核酸、抗体等)和/或化学药物(例如，化学合成药物)。更进一步的，所述生物分子和/或化学药物的治疗用途与所述肿瘤疫苗的治疗用途可以相同，例如，均用于抗肿瘤。更进一步的，所述生物分子和/或化学药物的治疗用途与所述肿瘤疫苗的治疗用途也可以不同，例如，所述生物分子和/或化学药物可以发挥拮抗施用所述肿瘤疫苗后的不良反应或副作用，以及用于治疗其它肿瘤并发症或合并症(例如，发热、寒战、焦虑；腹水、恶心、呕吐、腹胀、腹泻、梗阻、心力衰竭、心律失常、干咳、咳嗽、呼吸困难、少尿、多尿、蛋白尿、血尿、疼痛、皮肤过敏、皮肤红斑、皮肤瘙痒等等)的作用。当本专利技术的所述组合物为包含所述肿瘤疫苗与治疗用生物分子和/或化学药物的组合形式(所述组合形式可以是混合物的形式，也可以是分开独立包装的形式，在本专利技术中不受任何限制)时，则按重量计本专利技术的所述肿瘤疫苗占本专利技术的治疗用组合物的活性成分(即，肿瘤疫苗与治疗用生物分子和/或化学药物的总量)的30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％以上，甚至100％，优选50％以上，更优选60％以上，最优选70％以上。在一个优选实施方案中，本专利技术的所述组合物还可以包含药学上可接受或生理学可接受的药用辅料、载体、稳定剂、稀释剂、赋形剂、缓冲液、等渗剂和/或添加剂等。在进一步优选的实施方案中，本专利技术的所述组合物还可以包含常规用于淋巴细胞低温保存的抗冻液(例如，ZENOAQ公司C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤疫苗，其特征在于，包含阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤疫苗，其特征在于，包含阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞。2.根据权利要求1所述的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗中同时阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞占总树突状细胞的比例为30％以上，优选40％以上，更优选50％以上，最优选60％以上。3.根据权利要求2所述的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗中阻断了CD44与CD11b分子信号通路的树突状细胞占总树突状细胞的比例为100％。4.根据权利要求1-3中任一项所述的肿瘤疫苗，其特征在于，其中所述树突状细胞源自哺乳动物。5.权利要求1-4中任一项所述的肿瘤疫苗在制备用于预防或治疗肿瘤的药物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括黑色素瘤、淋巴瘤、结直肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、食管癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌和...

【专利技术属性】
技术研发人员：李政媛，王超，
申请(专利权)人：北京中台恒基生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11