The invention discloses an IC RT LAMP kit for detecting Japanese goldfish algae mosaic virus JHMV specific to Angelica sinensis and a detection method thereof. The kit mainly includes JHMV antibody IgG, RT reverse primer JHMV R, LAMP primer group, first-chain DNA synthesis reagent, LAMP amplification reagent, fluorescent dye detection solution, negative control and positive control substance; the specificity of the kit is strong, the sensitivity reaches 0.28 pg/mL, 100 times higher than ordinary PCR, and no RNA extraction and professional equipment are needed, which simplifies the operation process. It reduces the detection difficulty and improves the detection efficiency. It provides a new technology platform for the detection of Japanese goldfish algae mosaic virus. It can be used to monitor the occurrence, spread and epidemic of Angelica sinensis JHMV virus and is suitable for popularization and application at the grass-roots level.
【技术实现步骤摘要】
一种检测侵染当归JHMV病毒的IC-RT-LAMP试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及一种特异性检测侵染当归的日本金鱼藻花叶病毒IC-RT-LAMP试剂盒及其检测方法。
技术介绍
当归(Angelicasinensis),别名岷当归、干归、马尾当归、马尾归、云归、西当归、金当归、土当归,属伞形科多年生草本植物。当归常以根入药,具补血、活血、止痛、润肠之功效;含基本内酯(ligusiilide)、正丁烯酞内酯(n-butylidenephthalide)、阿魏酸、维生素B12、维生素E、烟酸、蔗糖和多种氨基酸,以及倍半萜类化合物等。由于成份独特,其药用价值很高,有“十方九归”之说,除补血、活血、调经止痛、润燥通便外,还有镇静大脑、护肤、减少色素沉积、抗辐射和调节非特异性免疫功能的作用,对冠心病、脉管炎、脑血管病及白细胞减少有显著疗效,对肿瘤疾病有较好的防治作用。欧洲医学界称其为“中国的妇科人参”,已受到国际上医学界重视。对当归多糖的研究结果表明,当归多糖可以通过诱导造血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子,从而促进造血组细胞增殖分化。当归在国内多省均有分布,如云南、贵州、四川、甘肃和青海等地,特别是甘肃省岷县当归种植历史悠久,品质极佳,产量第一,素有“中国当归之乡”和“千里药乡”之称。目前国家已在甘肃岷县建立了优质当归生产基地,当归种植已成为当地的支柱产业,种植面积逐年扩大。随着人工种植规模和地域的不断扩大,病害对当归生产的影响日益突出。如麻口病、根腐病,其主要致病原因为真菌和线虫。病毒病也时有发生,主要危害叶片,发病初期,仅上部叶片现轻微花叶,后逐渐出现不 ...
【技术保护点】
1.一种用于特异性检测侵染当归的日本金鱼藻花叶病毒IC‑RT‑LAMP检测引物组合物,其特征在于:由RT反向引物JHMV‑R和LAMP引物组组成,所述LAMP引物组由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF和反向环引物LB组成;各引物序列具体如下:JHMV‑R:5’‑TTGTCGGAATGTGGGTGA‑3’;F3:5’‑ GATTATGAATATGAGCCACCTC ‑3’;B3:5’‑ CCGTTTATATTTGGGGAGGT ‑3’;FIP:5’‑ ACCATCGAGCAAACTGATTCTGATAACCCAGAGCAGACAGAT ‑3’;BIP:5’‑ TCGACGGCATCAAAGGAGATTATTTCAATGCACCACACGAC ‑3’;LF:5’‑ TGTTGCTCTTGTGTTGGCTAG ‑3’;LB:5’‑ GGTCTGAATGATGCGGAAATGG ‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种用于特异性检测侵染当归的日本金鱼藻花叶病毒IC-RT-LAMP检测引物组合物,其特征在于:由RT反向引物JHMV-R和LAMP引物组组成,所述LAMP引物组由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF和反向环引物LB组成;各引物序列具体如下:JHMV-R:5’-TTGTCGGAATGTGGGTGA-3’;F3:5’-GATTATGAATATGAGCCACCTC-3’;B3:5’-CCGTTTATATTTGGGGAGGT-3’;FIP:5’-ACCATCGAGCAAACTGATTCTGATAACCCAGAGCAGACAGAT-3’;BIP:5’-TCGACGGCATCAAAGGAGATTATTTCAATGCACCACACGAC-3’;LF:5’-TGTTGCTCTTGTGTTGGCTAG-3’;LB:5’-GGTCTGAATGATGCGGAAATGG-3’。2.权利要求1所述的IC-RT-LAMP检测引物组合物在检测日本金鱼藻花叶病毒中的应用。3.一种采用如权利要求1所述的IC-RT-LAMP检测引物组合物特异性检测侵染当归的日本金鱼藻花叶病毒的IC-RT-LAMP试剂盒,所述试剂盒由JHMV抗体IgG、权利要求1所述的IC-RT-LAMP检测引物组合物、第一链cDNA合成试剂和LAMP扩增反应试剂组成;其特征在于:所述试剂盒还包括JHMV抗体IgG包被缓冲液(CB)、磷酸缓冲液(PBS)、磷酸洗涤缓冲液(PBST)、SYBRGreenI荧光染料检测液、阴性对照品和阳性对照品;所述阴性对照品为ddH2O;所述阳性对照品为当归JHMVCP基因标准品;所述阳性对照品序列如下:当归JHMVCP基因标准品:CGCCAAAGAAGGATAAAGGGAAGGGACCTGAATCCTCGAACACACAAGATGACAATCAGTTGGCGCAAGCAAGCAAAGACAGAGATATTGATATGGGCACTAGTGGCACATTTGCTGTACCTAGATACAAGATTTTTAAATCCAAATTGAGGTTCCCAATGGTTAGGGGCAGGAAGATTATGAATATGAGCCACCTCGCACAATATAACCCAGAGCAGACAGATCTAGCCAACACAAGAGCAACACAGAATCAGTTTGCTCGATGGTTCGACGGCATCAAAGGAGATTATGGTCTGAATGATGCGGAAA...
【专利技术属性】
技术研发人员:张玉宝,王若愚,谢忠奎,管青霞,王筠,赵霞,周琴,
申请(专利权)人:中国科学院寒区旱区环境与工程研究所,
类型:发明
国别省市:甘肃,62
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