一种那屈肝素钙制备方法技术

本发明专利技术公开了一种那屈肝素钙制备方法，它是以肝素钠为原料，经降解、还原、去除金属离子、转钙、纳滤、氧化、超滤、纳滤、膜过滤、冷冻干燥等工序制得那屈肝素钙。本发明专利技术制备的那屈肝素钙原料灌装成的注射液，溶液颜色发黄的情况得到明显改善，降低了那屈肝素钙注射液发浑及pH降低的风险，保证了那屈肝素钙原料制备的注射液pH的可控性。本发明专利技术制备的原料灌装成注射液后，经6个月加速稳定性试验和24个月长期稳定性试验考察，稳定性较好，检测结果均符合法规标准，保证了临床使用时产品安全性、较高的生物活性和较好的产品质量，降低了不良反应发生的风险。本发明专利技术制备的那屈肝素钙灌装的注射液具有颜色、澄清度及pH值等稳定性良好的特点，工艺简单，适用于商业化生产，社会经济效益显著。

A preparation method of nadroparin calcium

The invention discloses a preparation method of nadroparin calcium, which is prepared from heparin sodium by degrading, reducing, removing metal ions, transcalcium, nanofiltration, oxidation, ultrafiltration, nanofiltration, membrane filtration, freeze-drying and other processes. The injections filled with the raw material of nadroparin calcium prepared by the invention can obviously improve the yellowing condition of the solution, reduce the risk of turbidity and decrease the pH of nadroparin calcium injection, and ensure the controllability of the pH of the injections prepared with the raw material of nadroparin calcium. After filling the raw material into the injection, the injection has good stability after 6 months accelerated stability test and 24 months long-term stability test. The test results conform to the regulations and standards, which ensures the product safety, high biological activity and good product quality in clinical use, and reduces the risk of adverse reactions. The injection liquid filled with Nadroparin calcium prepared by the invention has the advantages of good stability in color, clarity and pH value, simple process, suitable for commercial production, and remarkable social and economic benefits.

【技术实现步骤摘要】
一种那屈肝素钙制备方法
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及那屈肝素钙的制备方法。
技术介绍
那屈肝素钙是由肝素钠精品经过降解、还原、除色、转钙、除菌、过滤和干燥等过程制得，其相比于肝素具有半衰期较长、抗血栓效果好、出血倾向较弱、给药方便等优点。与普通的钠盐型肝素产品相比，钙盐型的那屈肝素钙具有皮下注射时局部血肿现象减少和疼痛状况明显改善等优点，因此，目前肝素产品更倾向于制成钙盐产品。那屈肝素钙在临床应用时，最为广泛的剂型为那屈肝素钙注射液，即那屈肝素钙的水溶液。那屈肝素钙注射液临床用于预防手术后血栓栓塞、肺栓塞、深静脉血栓形成、末梢血管病变等，也可用于血液透析时体外循环的抗凝剂，少数文献报道可用于因肝素引起的过敏或血小板减少症的替代治疗以及一些栓塞性疾病的特殊治疗。市场上流通的那屈肝素钙注射液普遍存在药液颜色、澄清度及pH值稳定性较差的问题，即药液颜色发黄、药液浑浊及药液pH值降低明显的情况。存在这些问题的根本原因还是那屈肝素钙原料质量存在一定的问题。研究中发现那屈肝素钙所用的肝素钠原料药中含有一定含量的Cu2+、Fe3+等金属离子，这些金属离子可能是肝素粗品简单的加工过程中引入，或在肝素钠精品生产过程中加入的辅料中引入。由于肝素钠质量标准中未明确必须对Cu2+、Fe3+等金属离子进行检测，因此传统的那屈肝素钙制备过程中也未对Cu2+、Fe3+等金属离子加以控制，质量标准中也未有该项检测标准。研究发现在那屈肝素钙注射液稳定性考察阶段，Cu2+、Fe3+等金属离子的存在可能会起到催化的作用，加速肝素链中发色基团的断裂，因而溶液颜色很快会出现发黄的情况。研究表明，那屈肝素钙中的游离Ca2+会结合药物中的OH-生成氢氧化钙，从而导致药物中的OH-减少，pH值降低，同时氢氧化钙在水中的溶解度较低，从而导致那屈肝素钙原料药在制成注射液后的澄清度较差，药液发浑。公开号为CN103275246B中采用以肝素钠粗品为原料，经酶解、氧化脱色、超滤除杂、醇沉除杂、降解、还原、紫外照射、氧化、钙置换、纳滤、超滤精制、冻干等步骤制得那屈肝素钙精品；公开号为CN104072639B公开了“一种那屈肝素钙的生产方法”，该方法以肝素钠精品为原料，经过降解、还原、乙醇沉淀、阴离子交换树脂转钙、氧化、过滤沉淀、脱水制得那屈肝素钙精品。以上方法中考虑到了部分增加产品稳定性的措施，但均未对金属离子加以控制，并且对于残存的游离钙含量也未进行控制，因此虽然生产出的那屈肝素钙原料符合法规标准，但用此原料制备后的注射液还是会存在产品质量不稳定的风险。
技术实现思路
本专利技术针对上述产品质量的不稳定性问题，在现有技术基础上，以肝素钠精品为原料，通过降解、还原、EDTA二钠去金属离子、转钙、纳滤、氧化、超滤、纳滤（包括纳滤效果确认）、调pH值、膜过滤、冷冻干燥等工序制得那屈肝素钙。为实现本专利技术目的，这种那屈肝素钙制备方法其特征在于包括以下步骤：a、降解调节10～20%（W/V）肝素钠水溶液温度至18～20℃，用20%（V/V）盐酸溶液调pH值为2.0～3.5后，称取肝素钠重量2.5～3.5%（W/W）的亚硝酸钠后，配制成15～25%（W/V）的亚硝酸钠水溶液，然后在50～60min内匀速加入到上述肝素钠水溶液中，再保温18～20℃，搅拌2h后得到肝素钠降解液；b、还原用3M氢氧化钠溶液调上述肝素钠降解液pH值至8.5～9.5后，在室温下加入上述亚硝酸钠重量1/3的硼氢化钠后在搅拌状态下进行还原反应，还原反应15～24h后用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至4.0～4.5，再搅拌30min后用3M氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；c、EDTA二钠去金属离子将上述所得沉淀物加纯化水溶解成10～20%（W/V）的药液，在药液中加入0.5～2.0%（W/V）氯化钠搅拌溶解后，用3M氢氧化钠溶液调pH为7.0～8.0，然后加入0.5～1.5%（W/V）的EDTA二钠，搅拌2h后再用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至6.5～7.0，再加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；d、转钙、纳滤将步骤c所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用阴离子交换树脂进行转钙，氯化钙溶液进行洗脱，再将洗脱液进行纳滤浓缩至8～12%（W/V）的浓缩液，将所述浓缩液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至6.5～7.0后，加入3～4体积倍量的乙醇，静置沉淀12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；e、氧化、超滤将步骤d所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至9.5～10.5，然后在25～35℃下加入0.5～1.0%（V/V）的过氧化氢，搅拌反应6～12h后加入0.5～2.0%（W/V）氯化钙搅拌溶解，再用20%（V/V）盐酸溶液调药液pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，再向沉淀物中加纯化水制成浓度为8～12%（W/V）的溶液后，用1000-3000Da膜循环进行超滤，收集截留液；f、二次纳滤向步骤e所得超滤截留液中补加纯化水制成15～20%（W/V）药液后，进行二次纳滤，在二次纳滤过程中边纳滤边补加纯化水，保持药液体积不变，当滤出液体积为药液体积的5～8倍时得到那屈肝素钙纳滤液；g、调pH值，膜过滤，冷冻干燥将步骤f所得那屈肝素钙纳滤液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至8.5～9.0时，经膜过滤进入洁净区，再将过滤后的药液装盘冷冻干燥后，得到那屈肝素钙原料。与现有技术对比，本专利技术那屈肝素钙制备方法具有以下突出的有益效果：1、本专利技术在生产工艺中创造性加入EDTA二钠去除Cu2+、Fe3+等金属离子的方法，EDTA二钠与Cu2+、Fe3+等金属离子进行螯合反应，通过沉淀将EDTA二钠与金属离子结合的螯合物去除，从而使得制备的那屈肝素钙注射液溶液颜色发黄的情况得到明显改善，解决了现有技术中由于Cu2+、Fe3+等金属离子的存在导致那屈肝素钙溶液颜色发黄的弊端。2、由于采用纳滤技术用于游离钙的去除，并创造性地加入对去除游离钙效果的确认方法，即配制饱和无水碳酸钠溶液，取适量的纳滤液加入2倍纳滤液体积的饱和无水碳酸钠溶液中，在澄明度仪灯光下观察需＜Ⅰ号浊度液，若不符合要求继续纳滤直到检测合格为止。该确认方法的加入，使得在那屈肝素钙原料制备过程中对游离钙含量进行了有效控制，降低了那屈肝素钙注射液发浑及pH降低的风险。3、由于那屈肝素钙原料进行冷冻干燥前对药液的pH值进行控制，进而可更加准确地控制终产品的pH值，保证了那屈肝素钙原料制备的注射液pH的可控性，为产品良好的稳定性奠定了基础。4、用本专利技术方法制备的原料灌装成注射液后，经6个月加速稳定性试验和9个月长期稳定性试验考察，结果显示注射液稳定性较好，检测结果均符合法规标准，进而保证了临床使用时产品较高的安全性、较高的生物活性和较好的产品质量，降低了不良反应发生的风险。5、本专利技术那屈肝素钙注射液具有颜色、澄清度及pH值等稳定性良好的特点，且工艺简单，适用于商业化生产，社会经济效益显著。附图说明图1为本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种那屈肝素钙制备方法，其特征在于包括以下步骤：a、降解调节10～20%（W/V）肝素钠水溶液温度至18～20℃，用20%（V/V）盐酸溶液调pH值为2.0～3.5后，称取肝素钠重量2.5～3.5%（W/W）的亚硝酸钠后，配制成15～25%（W/V）的亚硝酸钠水溶液，然后在50～60min内匀速加入到上述肝素钠水溶液中，再保温18～20℃，搅拌2h后得到肝素钠降解液；b、还原用3M氢氧化钠溶液调上述肝素钠降解液pH值至8.5～9.5后，在室温下加入上述亚硝酸钠重量1/3的硼氢化钠后在搅拌状态下进行还原反应，还原反应15～24h后用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至4.0～4.5，再搅拌30min后用3M氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；c、EDTA二钠去金属离子将上述所得沉淀物加纯化水溶解成10～20%（W/V）的药液，在药液中加入0.5～2.0%（W/V）氯化钠搅拌溶解后，用3M氢氧化钠溶液调pH为7.0～8.0，然后加入0.5～1.5%（W/V）的EDTA二钠，搅拌2h后再用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至6.5～7.0，再加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；d、转钙、纳滤将步骤c所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用阴离子交换树脂进行转钙，氯化钙溶液进行洗脱，再将洗脱液进行纳滤浓缩至8～12%（W/V）的浓缩液，将所述浓缩液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至6.5～7.0后，加入3～4体积倍量的乙醇，静置沉淀12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；e、氧化、超滤将步骤d所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至9.5～10.5，然后在25～35℃下加入0.5～1.0%（V/V）的过氧化氢，搅拌反应6～12h后加入0.5～2.0%（W/V）氯化钙搅拌溶解，再用20%（V/V）盐酸溶液调药液pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，再向沉淀物中加纯化水制成浓度为8～12%（W/V）的溶液后，用1000‑3000Da膜循环进行超滤，收集截留液；f、二次纳滤向步骤e所得超滤截留液中补加纯化水制成15～20%（W/V）药液后，进行二次纳滤，在二次纳滤过程中边纳滤边补加纯化水，保持药液体积不变，当滤出液体积为药液体积的5～8倍时得到那屈肝素钙纳滤液；g、调pH值，膜过滤，冷冻干燥将步骤f所得那屈肝素钙纳滤液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至8.5～9.0时，经膜过滤进入洁净区，再将过滤后的药液装盘冷冻干燥后，得到那屈肝素钙原料。...

【技术特征摘要】
1.一种那屈肝素钙制备方法，其特征在于包括以下步骤：a、降解调节10～20%（W/V）肝素钠水溶液温度至18～20℃，用20%（V/V）盐酸溶液调pH值为2.0～3.5后，称取肝素钠重量2.5～3.5%（W/W）的亚硝酸钠后，配制成15～25%（W/V）的亚硝酸钠水溶液，然后在50～60min内匀速加入到上述肝素钠水溶液中，再保温18～20℃，搅拌2h后得到肝素钠降解液；b、还原用3M氢氧化钠溶液调上述肝素钠降解液pH值至8.5～9.5后，在室温下加入上述亚硝酸钠重量1/3的硼氢化钠后在搅拌状态下进行还原反应，还原反应15～24h后用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至4.0～4.5，再搅拌30min后用3M氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；c、EDTA二钠去金属离子将上述所得沉淀物加纯化水溶解成10～20%（W/V）的药液，在药液中加入0.5～2.0%（W/V）氯化钠搅拌溶解后，用3M氢氧化钠溶液调pH为7.0～8.0，然后加入0.5～1.5%（W/V）的EDTA二钠，搅拌2h后再用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至6.5～7.0，再加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；d、转钙、纳滤将步骤c所得沉淀物加纯化水溶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，赵焕荣，田志鹏，史云飞，康伟，白文举，高树华，
申请(专利权)人：河北常山生化药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13