针对H3K64Ac/H3K64片段的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术或生物医学领域，涉及针对H3K64Ac/ H3K64片段的纳米抗体及其应用，具体地，抗组蛋白3第64位赖氨酸乙酰化修饰（H3K64Ac）片段的纳米抗体的VHH链具有SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列。抗组蛋白3第64位赖氨酸未修饰（H3K64）片段的纳米抗体的VHH链具有SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列。本纳米抗体通过微生物高效表达；本纳米抗体的分子量不到常规抗体的十分之一，从而利于实现对核小体核心区域H3K64乙酰化修饰位点生物学功能的探究。

Nano-antibody against H3K64Ac/H3K64 fragment and its application

The present invention relates to the field of biotechnology or biomedicine, and to nano-antibodies against H3K64Ac/H3K64 fragment and their applications. Specifically, the VHH chain of nano-antibodies against H3K64Ac fragment has SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 36 amino acid sequences. The VHH chain of the nano-antibody against the 64-position lysine unmodified (H3K64) fragment of histone 3 has the amino acid sequence shown by SEQ ID NO:37 or SEQ ID NO:38. The nano-antibody is highly expressed by microorganisms, and its molecular weight is less than one tenth of that of the conventional antibody, which is conducive to exploring the biological function of the acetylation modification site H3K64 in the nucleosome core region.

【技术实现步骤摘要】
针对H3K64Ac/H3K64片段的纳米抗体及其应用
本专利技术涉及生物技术或生物医学领域，涉及针对组蛋白3第64位赖氨酸乙酰化修饰及未修饰(H3K64Ac/H3K64)片段的纳米抗体及其应用。
技术介绍
抗体(Ab)，也称为免疫球蛋白(Ig)，是主要由免疫系统用于中和致病菌和病毒等病原体的浆细胞产生的大型Y型蛋白质。抗体由适应性免疫系统的B细胞分泌，大部分由称为浆细胞的分化B细胞分泌，属于免疫球蛋白超家族的糖蛋白，它们构成血液蛋白质的大部分γ球蛋白部分。我们目前最常用的是IgG型抗体，这类抗体在人体内也是含量最高的抗体，约9.5-12.5g/L。常规抗体通常由两条大的重链和两条小的轻链构成，重链与轻链之间通过二硫键结合形成对称的Y型抗体。由于抗体可以高效地与体内和体外各种抗原特异性结合，使得抗体不仅应用于调节免疫系统方面，还能够用作医学治疗的生物工具和医学诊断方面的高灵敏的检测工具。目前，抗体药物的开发是生物技术药物研发的重要组成部分，抗体试剂的应用也是生物学实验中最常用的研究方法。因此，抗体相关产品的开发具有很大的应用前景和商业价值。关于H3组蛋白第64位点赖氨酸的乙酰化修饰(H3K64Ac)具有调控核小体的稳态和促进转录的功能的研究是近期的研究热点。这些研究选用了常规的抗H3K64Ac抗体作为实验工具，但是常规抗体具有分子量较大、稳定性较弱、不易获得、制备成本高等缺点，且抗体分子过大不利于此类核小体核心区域位点体内实验的研究。这就引发了我们寻求分子量小，稳定性强，能对核小体核心区进行检测的新型抗体工具的兴趣，从而克服生物研究中遇到的困难。研究表明，骆驼的血液中存在一种天然缺失轻链只含重链的抗体，称为重链抗体。克隆重链抗体的可变区可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体。VHH抗体的晶体直径仅有2.5nm，长4nm，因此又被称为纳米抗体(Nanobody)。纳米抗体的大小约为12-15KDa，只有传统IgG型抗体的十分之一，是天然存在的可与抗原结合的最小片段，且纳米抗体具有组织穿透力强、理化性质稳定、来源容易、产量高、可通过微生物进行扩大培养等优点。
技术实现思路
为了克服现有技术中针对H3K64Ac/H3K64的常规抗体的分子量较大、稳定性较弱、不易获得、制备成本高等技术缺陷，本专利技术的目的是提供针对H3K64Ac/H3K64片段的纳米抗体及其氨基酸序列，同时提供针对H3K64Ac/H3K64片段纳米抗体的DNA编码序列，构建该纳米抗体的真核质粒系统，用于替代传统抗体工具，以此研究该位点的生物学功能。本专利技术筛选能够特异性识别H3K64Ac的纳米抗体，验证其特异性和结合靶抗原的能力，再通过基因工程技术将纳米抗体基因序列构建入真核质粒载体系统pcDNA5-FRT(Flag标签)中，用于替代传统单抗工具，以此来研究H3K64Ac的生物学功能，也大大降低了研究成本。此外，我们也筛选到能够识别H3K64的纳米抗体，可以用于鉴定体内H3K64位点分布，同时可以作为H3K64位点乙酰化修饰验证的对照工具。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：针对H3K64Ac片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述(1)-(4)中的至少一种：(1)SEQIDNO:5所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；(2)SEQIDNO:12所示CDR1，SEQIDNO:13所示CDR2，SEQIDNO:14所示CDR3；(3)SEQIDNO:16所示CDR1，SEQIDNO:17所示CDR2，SEQIDNO:18所示CDR3；(4)SEQIDNO:20所示CDR1，SEQIDNO:21所示CDR2，SEQIDNO:22所示CDR3。抗H3K64Ac片段的纳米抗体为VHH链，具有SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36的至少一条所示的氨基酸序列。所述的纳米抗体序列还包括框架区FR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列；框架区FR的氨基酸序列分别为：SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4(对应于上述的互补决定区CDR的序列(1)；或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:9所示FR2，SEQIDNO:10所示FR3，SEQIDNO:11所示FR4(对应于上述的互补决定区CDR的序列(2)；或SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:15所示FR3,，SEQIDNO:4所示FR4(对应于上述的互补决定区CDR的序列(3)；或SEQIDNO:19所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4((对应于上述的互补决定区CDR的序列(4)；上述所有FR1、FR2、FR3和FR4的序列可替换为其保守序列变体。本专利技术还提供针对H3K64片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述(1)-(2)中的至少一种；(5)SEQIDNO:24所示CDR1，SEQIDNO:25所示CDR2，SEQIDNO:26所示CDR3；(6)SEQIDNO:30所示CDR1，SEQIDNO:31所示CDR2，SEQIDNO:32所示CDR3。抗H3K64片段的纳米抗体为VHH链，具有SEQIDNO:37、SEQIDNO:38的至少一条所示的氨基酸序列。所述的纳米抗体序列还包括框架区FR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列；框架区FR的氨基酸序列分别为：SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:9所示FR2，SEQIDNO:24所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4(对应于上述的互补决定区CDR的序列(5)；或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:28所示FR2，SEQIDNO:29所示FR3，SEQIDNO:30所示FR4(对应于上述的互补决定区CDR的序列(6)；上述所有FR1、FR2、FR3和FR4的序列可替换为其保守序列变体。本专利技术还提供针对H3K64Ac/H3K64片段的纳米抗体，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述(1)-(6)中的至少一种：(1)SEQIDNO:5所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；(2)SEQIDNO:12所示CDR1，SEQIDNO:13所示CDR2，SEQIDNO:14所示CDR3；(3)SEQIDNO:16所示CDR1，SEQIDNO:17所示CDR2，SEQIDNO:18所示CDR3；(4)SEQIDNO:20所示CDR1，SEQIDNO:21所示CDR2，SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.针对H3K64Ac片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述（1）‑（4）中的至少一种：（1）SEQ ID NO:5所示CDR1，SEQ ID NO:6所示CDR2，SEQ ID NO:7所示CDR3；（2）SEQ ID NO:12所示CDR1，SEQ ID NO:13所示CDR2，SEQ ID NO:14所示CDR3；（3）SEQ ID NO:16所示CDR1，SEQ ID NO:17所示CDR2，SEQ ID NO:18所示CDR3；（4）SEQ ID NO:20所示CDR1，SEQ ID NO:21所示CDR2，SEQ ID NO:22所示CDR3。

【技术特征摘要】
1.针对H3K64Ac片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述（1）-（4）中的至少一种：（1）SEQIDNO:5所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；（2）SEQIDNO:12所示CDR1，SEQIDNO:13所示CDR2，SEQIDNO:14所示CDR3；（3）SEQIDNO:16所示CDR1，SEQIDNO:17所示CDR2，SEQIDNO:18所示CDR3；（4）SEQIDNO:20所示CDR1，SEQIDNO:21所示CDR2，SEQIDNO:22所示CDR3。2.根据权利要求1所述的针对H3K64Ac片段的纳米抗体，其特征在于，抗H3K64Ac片段的纳米抗体为VHH链，具有SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36的至少一条所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的针对H3K64Ac片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体序列还包括框架区FR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列；框架区FR的氨基酸序列分别为：SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:9所示FR2，SEQIDNO:10所示FR3，SEQIDNO:11所示FR4；或SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:15所示FR3,，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:19所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；上述所有FR1、FR2、FR3和FR4的序列可替换为其保守序列变体。4.针对H3K64片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体的序列包括互补决定区CDR；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列；所述的纳米抗体的互补决定区CDR的序列包括下述（1）-（2）中的至少一种；（1）SEQIDNO:24所示CDR1，SEQIDNO:25所示CDR2，SEQIDNO:26所示CDR3；（2）SEQIDNO:30所示CDR1，SEQIDNO:31所示CDR2，SEQIDNO:32所示CDR3。5.根据权利要求4所述的针对H3K64片段的纳米抗体，其特征在于，抗H3K64片段的纳米抗体为VHH链，具有SEQIDNO:37、SEQIDNO:38的至少一条所示的氨基酸序列。6.根据权利要求4所述的针对H3K64片段的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体序列还包括框架区FR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列；框架区FR的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢维，于笑笑，苏志鹏，
申请(专利权)人：南京融捷康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32