一种弹性蛋白肽的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种弹性蛋白肽的提取方法，属于生物活性物质提取技术领域。该方法为：鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，乙醇溶液浸泡；加入Tris‑HCl缓冲液，超声波处理；加入弹性蛋白酶，恒温水浴振荡培养；灭酶后将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；滤液进行第一次超滤，收集透过液；透过液，进行第二次超滤，收集超滤液；所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后的弹性蛋白多肽。本发明专利技术的提取方法简单快速，提取效率高，成本低。制备的弹性蛋白多肽，还原力强，能有效清除自由基，抗氧化效果佳，能够显著提高皮肤中胶原蛋白肽的含量。在食品、化妆品、医药行业具有广泛的应用价值。

A Method for Extracting Elastin Peptide

The invention discloses a method for extracting elastin peptide, which belongs to the technical field of extracting bioactive substances. The method includes: removing impurities such as fish meat, washing and grinding fish cartilage, soaking in ethanol solution; adding Tris HCl buffer solution, ultrasonic treatment; adding elastase, oscillating culture in constant temperature water bath; filtrating enzymatic hydrolysate after deactivation, discarding filtrate residue and collecting filtrate; first ultrafiltration of filtrate, collecting filtrate; second ultrafiltration of filtrate, collecting ultrafiltrate; Ultrafiltration, dialysis, desalination, rotary evaporation, freeze-dried elastin polypeptide. The extraction method of the invention is simple and fast, has high extraction efficiency and low cost. The prepared elastin polypeptide has strong reducing power, can effectively scavenge free radicals, has good antioxidant effect, and can significantly improve the content of collagen peptide in skin. It has wide application value in food, cosmetics and medicine industry.

【技术实现步骤摘要】
一种弹性蛋白肽的提取方法
本专利技术属于生物活性物质提取
，具体涉及一种弹性蛋白肽的提取方法。
技术介绍
弹性蛋白是弹性纤维的主要组成之一，弹性纤维是由均质状的弹性蛋白和外面包绕微原纤维壳组成。微原纤维是由一些糖蛋白构成的，为所必需的保持弹性纤维的完整性的成分。在机体发育的弹性组织内，糖蛋白微原纤维，是弹性蛋白附着的骨架，常先于弹性蛋白出现,对于弹性蛋白分子组装成弹性纤维具有重要的作用。弹性蛋白为一种高度交叉的水不溶性水解蛋白，分子量为70KDa。弹性蛋白分子中非极性氨基酸（疏水性氨基酸）占95%，甘氨酸含量占总量的1/3，脯氨酸占10%，羟脯氨酸占1%，其具有抗酸、碱水解作用。弹性蛋白除断裂肽键剂外，不溶于任何溶剂，是一种在有水情况下具有橡胶延展性和低弹性模量的聚合物质。虽然弹性蛋白分布没有胶原蛋白广泛，但也大量存在于肺、大动脉、某些韧带、皮肤及耳廓等富含弹性的组织内。在光老化过程中，基质金属蛋白酶表达上调从而引发弹性蛋白降解，致使皮肤组织出现日光性弹力纤维变性，致使皮肤老化。通过向化妆品中添加弹性蛋白水解产物用于延缓皮肤衰老、对抗光老化、促进皮肤细胞增殖和诱导皮肤年轻化。另外，弹性蛋白作为一种细胞外基质蛋白，在体内可与微原纤维结合形成弹性纤维，其主要功能是被动伸缩，赋予经常受力而形变的组织器官以伸缩性和可逆的形变能力。近年研究发现，单性蛋白的变化与多种疾病有关，如动脉瘤、动脉粥样硬化和面型阻塞性肺疾病等。随着市场对弹性蛋白肽需求的与日俱增，现有弹性蛋白肽的制备工艺，因制备工艺繁琐、成本高、效率低等问题，以远不能满足需要。因此，需要一种更高效的弹性蛋白肽制备工艺。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有弹性蛋白肽提取方法的不足，提供一种弹性蛋白肽的提取方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种弹性蛋白肽的提取方法，包括以下具体步骤：（1）鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入2-3倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，重复用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次。（2）经洗涤后的鱼软骨中加入Tris-HCl缓冲液，然后进行超声波处理；（3）经超声波处理后的软骨溶液中，加入弹性蛋白酶，恒温水浴振荡培养；（4）灭酶，将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；（5）步骤（4）所得滤液在超滤条件下，用超滤膜进行第一次超滤，收集透过液；（6）步骤（5）收集所得的透过液，加入1倍体积的pH9.0的Tris-HCl缓冲液，混匀后，在超滤条件下，进行第二次超滤，收集超滤液；（7）步骤（6）所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后的弹性蛋白多肽。步骤（2）中，Tris-HCl的pH为9.0，加入量为每100g鱼软骨中加入250-300mLTris-HCl缓冲液；超声处理的超声频率为60KHz，功率为150W，超声处理时间为30min。步骤（3）中，弹性蛋白酶的加入量为每100g超声波处理后的软骨溶液中加入400-500mg弹性蛋白酶；其中恒温水浴的温度为30℃，振荡速度为150r/min，振荡培养时间为1-1.5h。步骤（4）中，灭酶为水浴升温至40℃，保温10min。步骤（5）中，第一次超滤，选用截留分子量为10KDa的超滤膜进行超滤，超滤条件为操作压力为0.05-1.0MPa，操作温度为30℃。步骤（6）中，第二次超滤，选用截留分子量为1KDa的超滤膜进行超滤，超滤条件为操作压力为0.05-1.0MPa，操作温度为30℃。一种上述方法制备的弹性蛋白肽。一种上述方法制备的弹性蛋白肽在护肤品、保健品或药品中的应用。含上述单性蛋白肽的护肤品、保健品或药品。本专利技术的优点在于：（1）本专利技术利用鱼软骨为原料，实现鱼的低值化高效利用。（2）本专利技术的提取方法简单快速，提取效率高，成本低。（3）本专利技术制备的弹性蛋白多肽，还原力强，能有效清除自由基，抗氧化效果佳，能够显著提高皮肤中胶原蛋白肽的含量。在食品、化妆品、医药行业具有广泛的应用价值。具体实施方式本专利技术用下列实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术的保护范围并不限于下列实施例。实施例1一种弹性蛋白肽的提取方法，包括以下具体步骤：（1）500g鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入2倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，重复用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次；（2）经洗涤后的鱼软骨中每100g中加入250mLpH9.0的Tris-HCl缓冲液，然后超声频率60KHz，功率150W，超声处理时间为30min；（3）每100g超声波处理后的软骨溶液中加入400mg弹性蛋白酶，30℃恒温水浴，150r/min振荡培养1h；（4）水浴升温至40℃，保温10min灭酶后将，将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；（5）步骤（4）所得滤液，选用截留分子量为10KDa的超滤膜进行第一次超滤，超滤条件为操作压力为1.0MPa，操作温度为30℃，收集透过液；（6）步骤（5）收集所得的透过液，加入1倍pH9.0的Tris-HCl缓冲液，混匀后，选用截留分子量为1KDa的超滤膜进行第二次超滤，超滤条件为操作压力为1.0MPa，操作温度为30℃；（7）步骤（6）所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后的弹性蛋白多肽。检测本实施例制备所得弹性蛋白肽的抗氧化值（还原力，DPPH清除能力、ABTS清除率），及对模型裸鼠皮肤弹性蛋白含量的影响。实施例2一种弹性蛋白肽的提取方法，包括以下具体步骤：（1）1000g鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入3倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，鱼软骨重复用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次；（2）经洗涤后的鱼软骨中每100g中加入300mLpH9.0的Tris-HCl缓冲液，然后超声频率60KHz，功率150W，超声处理时间为30min；（3）每100g超声波处理后的软骨溶液中加入500mg弹性蛋白酶，30℃恒温水浴，150r/min振荡培养1h；（4）水浴升温至40℃，保温10min灭酶后将，将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；（5）步骤（4）所得滤液，选用截留分子量为10KDa的超滤膜进行第一次超滤，超滤条件为操作压力为0.8MPa，操作温度为30℃，收集透过液；（6）步骤（5）收集所得的透过液，加入1倍pH9.0的Tris-HCl缓冲液，混匀后，选用截留分子量为1KDa的超滤膜进行第二次超滤，超滤条件为操作压力为0.8MPa，操作温度为30℃；（7）步骤（6）所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后的弹性蛋白多肽。检测本实施例制备所得弹性蛋白肽的抗氧化值（还原力，DPPH清除能力、ABTS清除率），及对模型裸鼠皮肤弹性蛋白含量的影响。实施例3一种弹性蛋白肽的提取方法，包括以下具体步骤：（1）600g鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入2.5倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，鱼软骨重复用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次；（2）经洗涤后的鱼软骨中每100g中加入280mLpH9.0的Tris-HCl缓冲液，然后超声频率60KHz，功率150W，超声处理时间为30min；（3）每100g超声波处理后的软骨溶液中加入450mg弹性蛋白酶，30℃恒温水浴，150r/min振荡培养1h；（本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种弹性蛋白肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入2‑3倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次；（2）经洗涤后的鱼软骨中加入Tris‑HCl缓冲液，然后进行超声波处理；（3）经超声波处理后的软骨溶液中，加入弹性蛋白酶，恒温水浴振荡培养；（4）灭酶，将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；（5）步骤（4）所得滤液在超滤条件下，用超滤膜进行第一次超滤，收集透过液；（6）步骤（5）收集所得的透过液，加入1倍体积pH 9.0的Tris‑HCl缓冲液，混匀后，在超滤条件下，进行第二次超滤，收集超滤液；（7）步骤（6）所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后得弹性蛋白多肽。

【技术特征摘要】
1.一种弹性蛋白肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）鱼软骨剔除鱼肉等杂质，洗净绞碎后，加入2-3倍体积的95%乙醇溶液浸泡6小时，去乙醇，用95%乙醇溶液重复浸泡一次，去乙醇，蒸馏水洗涤2次；（2）经洗涤后的鱼软骨中加入Tris-HCl缓冲液，然后进行超声波处理；（3）经超声波处理后的软骨溶液中，加入弹性蛋白酶，恒温水浴振荡培养；（4）灭酶，将酶解液抽滤，弃滤渣，收集滤液；（5）步骤（4）所得滤液在超滤条件下，用超滤膜进行第一次超滤，收集透过液；（6）步骤（5）收集所得的透过液，加入1倍体积pH9.0的Tris-HCl缓冲液，混匀后，在超滤条件下，进行第二次超滤，收集超滤液；（7）步骤（6）所得超滤液，透析除盐，旋转蒸发，冷冻干燥后得弹性蛋白多肽。2.根据权利要求1所述的一种弹性蛋白肽的提取方法，其特征在于：步骤（2）中，Tris-HCl的pH为9.0，其加入量为每100g鱼软骨中加入250-300mLTr...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国荣，黄轲，
申请(专利权)人：福建康是美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35