一种芦丁螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种芦丁螯合物HA‑RT的制备方法，其将HA水溶液与EDC水溶液混合均匀后，加入溶有芦丁的DMF溶液并于常温下反应18―25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得；所述HA、EDC和芦丁的摩尔比为1：1―2：1―2。本发明专利技术通过化学合成修饰改造得到水溶性极好的HA‑RT，并经试验发现：HA‑RT在抗氧化、抗菌等方面性能得到了极大的提高。

A Rutin Chelate and Its Preparation and Application

The invention relates to a preparation method of rutin chelate HA RT, which mixes HA aqueous solution with EDC aqueous solution evenly, adds rutin-soluble DMF solution and reacts at room temperature for 18-25 hours, after which the reaction solution is obtained by dialysis and freeze-drying; the molar ratio of HA, EDC and rutin is 1:1-2:1-2. The water-soluble HA_ RT is obtained by chemical synthesis modification, and it is found that the performance of HA_ RT in antioxidant, antimicrobial and other aspects has been greatly improved.

【技术实现步骤摘要】
一种芦丁螯合物及其制备方法和应用
本申请属于生物制药
，具体涉及一种芦丁螯合物及其制备方法和在抗菌和抗氧化方面的应用。
技术介绍
芦丁（Rutin，RT）是一种从植物中提取的黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌和降血压等作用。芦丁被广泛应用于医药、保健食品和化妆品中，具有很高的开发和利用价值。我国芦丁的生产主要从槐米中提取，含量最高可达30%，槐米为豆科植物槐的干燥花蕾及花，在我国各地均有分布。作为药食两用的植物，因其价格低廉，无毒无害，分布及应用相当广泛。但由于RT单体水溶性差，严重影响了其在抗菌和抗氧化等方面的进一步发展。透明质酸(hyaluronicacid，HA)是一种天然的带负电的由两个双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的大分子链状黏多糖，广泛存在于动物和人体的不同组织中；其具有高度的亲水性、良好的生物相容性、生物可降解性、低致敏性、高粘弹性以及与细胞表面特异受体专一性结合的能力，因此可以作为药物载体。近年来，为提高水溶性，RT多以配合物、成盐的形式存在，并在固体分散体、β-环糊精包合物等剂型中得到了一定的发展。然而，将HA与RT合成HA-RT而达到提高RT水溶性的方法却鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种芦丁螯合物及其制备方法和在抗菌和抗氧化方面的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种芦丁螯合物（HA-RT）的制备方法，其在EDC和DMF存在下，通过酯化反应合成了HA-RT，合成路线如图1所示；具体步骤为：将HA水溶液与EDC水溶液混合均匀后，加入溶有芦丁的DMF溶液并于常温下反应18―25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得；所述HA、EDC和芦丁的摩尔比为1：1―2：1―2。上述芦丁螯合物的制备方法中，透析用透析袋的截留分子量为2000―3500。进一步优选的，所述芦丁可以经下述方法提取获得：向粉碎过的槐米中加入槐米重量5―10倍的水，调pH至8―9，然后加入槐米重量2―3%的四硼酸钠，于50―60℃水浴中提取20―30min；提取结束后，过滤，滤液调节pH至2―3，静置，过滤，即得粗芦丁。具体的，获得粗芦丁后可按照下述步骤进一步纯化：粗芦丁加入适量水，用石灰水调pH为至8―9，加入槐米重量3%的四硼酸钠，加热溶解，趁热过滤，滤液用1mol/L的盐酸调节pH至2―3，静置过夜，过滤，烘干，即得精制芦丁。本专利技术提供了采用上述方法制备得到的芦丁螯合物。本专利技术还提供了上述芦丁螯合物在制备抗菌药物方面的应用。本专利技术还提供了上述芦丁螯合物在制备抗氧化药物方面的应用。和现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1）本专利技术将槐米以碱提酸沉法提取分离纯化得到纯度较高的RT，并通过化学合成得到水溶性极好的HA-RT。本专利技术的主要目的是通过修饰改造RT以提高其水溶性，并在抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌和降血压等方面得到更好的发展；2）本专利技术在对HA-RT合成的研究报道中，首次发现将HA与RT合成HA-RT能够极大的提高RT的水溶性。此外，本专利技术还研究了HA-RT的抗菌，抗氧化能力。在抗菌实验中，采用试管法测得HA、RT和HA-RT对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）。在抗氧化实验中，采用清除DPPH自由基法，清除ABTS+自由基法，清除超氧阴离子自由基（O2-）法测得RT、HA-RT和Vc的抗氧化能力。本专利技术经研究发现：HA-RT在抗菌，抗氧化能力方面得到了极大的提高。附图说明图1为芦丁螯合物HA-RT的合成路线图；图2为芦丁RT的核磁图谱；图3为透明质酸HA的核磁图谱；图4为芦丁螯合物HA-RT的核磁图谱；图5为RT、HA-RT和Vc对DPPH自由基清除能力；图6为RT、HA-RT和Vc对ABTS+自由基清除能力；图7为RT、HA-RT和Vc对超氧阴离子自由基（O2-）清除能力。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步地详细介绍，但本专利技术的保护范围并不局限于此。本专利技术中，如无特殊说明，常温指20―30℃。下述实施例中，透明质酸（HA，MW：8000）购自华熙福瑞达生物医药有限公司；N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）购自北京百灵威科技有限公司。实施例1、芦丁（RT）的提取槐米粉碎，加入槐米重量10倍的水，用石灰水调pH为8-9，然后加入槐米重量3%的四硼酸钠，于60℃水浴中提取30min；提取结束后，过滤。提取三次。合并滤液并用1mol/L盐酸调节pH为2-3，静置过夜，过滤，即得粗芦丁。粗芦丁加入适量水，用石灰水调pH为8-9，加入槐米重量3%的四硼酸钠，加热溶解，趁热过滤，滤液用1mol/L的盐酸调节pH为2-3，静置过夜，过滤，烘干，即得精制芦丁（RT）。产率为10.5%。芦丁结构式及核磁图谱见图2。产物精制芦丁（RT）为淡黄色固体，1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.6(1H，-OH)，δ10.85(1H，-OH)，δ9.65(1H，-OH)，δ9.20(1H，-OH)，δ7.55(2H，15-H，19-H)，δ6.85(18-H)，δ6.35(1H，2-H)，δ6.20(1H，6-H)，δ5.4(2H，32-H，42-H)，δ5.05(2H，31-H，43-H)，δ4.38(4H，23-H，24-H，34-H，36-H)，δ3.1-4.0(7H，26-H，28-H，30-H，38-H，39-H，40-H，41-H)，δ3.05(2H，27-H，35’-H)，δ1.0(3H，25-H)。实施例2、芦丁螯合物（HA-RT）的合成首先称取500mg（1.32mmol）的透明质酸HA置于圆底烧瓶中，用6ml蒸馏水使之溶解获得HA水溶液。后将304mg（1.584mmol）的EDC用1ml蒸馏水溶解获得EDC水溶液，并将EDC水溶液逐滴加入HA水溶液中，冰浴搅拌1h。然后将1.2g（1.98mmol）的RT完全溶解于4mlDMF并加入上述反应体系（即EDC和HA的混合溶液）中，常温搅拌反应24h。反应结束后将所得溶液转移至透析袋中（截留分子量3500）透析8h，冷冻干燥即得HA-RT。产物为亮黄色固体，可溶于水，且水溶性好于RT的水溶性。图3和图4分别为HA、HA-RT的核磁图谱。通过比较HA，芦丁（RT），和HA-RT的核磁图谱可知，在HA-RT的核磁图谱中，化学位移在2.15ppm的峰是透明质酸中乙酰氨基-OCCH3基团上的CH3，2.7-4ppm为透明质酸糖环结构中CH上的H的化学位移，而化学位移7.80ppm、7.55ppm、6.8ppm、6.35ppm、6.20ppm处新出现的吸收峰归属于RT的芳香环上的H，这就证明RT被成功地接枝到了透明质酸上。通过比较RT苯环上的H（7.80ppm）的积分与HA上H（2.15ppm）的积分得出，HA上RT的接枝率为50%。应用试验介绍具体应用例之前，对本专利技术所用到的主要实验试剂及仪器设备简要介绍如下。主要试剂、药品及样品：槐米购自毫州市中正中药材饮片有限公司；透明质酸（HA，MW：8000）购自华熙福瑞达生物医药有限公司；N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）购自北京百灵本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芦丁螯合物的制备方法，其特征在于，将HA水溶液与EDC水溶液混合均匀后，加入溶有芦丁的DMF溶液并于常温下反应18―25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得；所述HA、EDC和芦丁的摩尔比为1：1―2：1―2。

【技术特征摘要】
1.一种芦丁螯合物的制备方法，其特征在于，将HA水溶液与EDC水溶液混合均匀后，加入溶有芦丁的DMF溶液并于常温下反应18―25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得；所述HA、EDC和芦丁的摩尔比为1：1―2：1―2。2.如权利要求1所述芦丁螯合物的制备方法，其特征在于，透析用透析袋的截留分子量为2000―3500。3.如权利要求1所述芦丁螯合物的制备方法，其特征在于，所述芦丁经下述方法提取获得：向粉碎过的槐米中加入槐米重量5―10倍的水，调pH至8―9，然后加入槐米重量2―3%的四硼酸钠...

【专利技术属性】
技术研发人员：段少峰，吴东栋，余海兰，韩举国，杨波，董茜，李翠，刘玮，胡玉荣，姬新颖，王新春，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南,41