一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，该方法制备步骤包括：(1)，包装细胞的培养；(2)，包装细胞的灭活；(3)，灭活的包装细胞与T淋巴细胞活化混合物的共同孵育；(4)，利用挤压技术(Extrusion)将细胞悬液制备为囊泡悬液；(5)，通过密度梯度离心法分离包裹有T淋巴细胞活化混合物的膜性囊泡。该方法能够满足药品生产质量管理规范(GMP)，且容易实现批量、标准化生产。利用该方法能够以相对较低廉的成本获取数量较多囊泡；该方法能够通过人为控制囊泡内含物(T淋巴细胞活性物质)的种类和数量进而制备满足不同应用需求的膜性囊泡。

【技术实现步骤摘要】
一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法
本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法。
技术介绍
T淋巴细胞在机体免疫中发挥不可替代的作用。目前T淋巴细胞相关的生物制品已经广泛应用于包括恶性肿瘤免疫细胞治疗在内的多个领域。因而，优化扩增T淋巴细胞方案能够推动T淋巴细胞制品在临床中的应用。传统的符合临床应用规范的T淋巴细胞扩增方案主要依赖于满足GMP要求的T淋巴细胞活化珠子(该珠子表面粘附有活化所需的抗CD3活化抗体和抗CD28抗体)和以游离状态提供的白细胞介素2(IL-2)的共同作用。该方案在以下两个方面具有改进的需求：一，该珠子价格昂贵且技术为跨国公司垄断，提高了临床推广难度；二，该珠子生物兼容性差，为避免珠子在患者体内积累，需要在T淋巴细胞制品回输患者前去除，增加了额外的操作步骤。囊泡是一种细胞分泌的具有磷脂双层膜结构的小囊泡。囊泡内部可以包裹蛋白、核酸等物质，可以作为生物活性物质运输或传递的天然载体(且具有较高的生物兼容性)。另外，囊泡表面存在的蛋白或磷脂可以作为运输的“向导”，能够实现囊泡内生物活性物质的靶向特定细胞递送。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于，它包含如下步骤：S1：包装细胞的培养；S2：包装细胞的灭活；S3：灭活的包装细胞与T淋巴细胞活化混合物的共孵育；S4：利用挤压技术(Extrusion)制备囊泡悬液；S5：利用密度梯度离心法纯化包裹T淋巴细胞活化混合物的囊泡。

【技术特征摘要】
1.一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于，它包含如下步骤：S1：包装细胞的培养；S2：包装细胞的灭活；S3：灭活的包装细胞与T淋巴细胞活化混合物的共孵育；S4：利用挤压技术(Extrusion)制备囊泡悬液；S5：利用密度梯度离心法纯化包裹T淋巴细胞活化混合物的囊泡。2.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S1中所述的包装细胞可以为除T淋巴细胞之外的原代细胞或永生化的细胞株(系)，且不限于未经基因修饰的细胞，培养在37℃、含5％的二氧化碳和95％空气的饱和湿度温箱中进行。3.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S2中所述的细胞灭活方法可以为一定剂量的伽马射线照射(例如20-500GR)，也可以为某些化疗药物的处理(例如15ug/ml的丝裂霉素处理4个小时)。4.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S3中所述的T淋巴细胞活化混合物的成分包...

【专利技术属性】
技术研发人员：李铁鹏，高全立，王瑶，
申请(专利权)人：河南省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：河南,41