The invention relates to the field of cell culture, in particular to a method for culturing NK cells from cord blood, which includes the following steps: PBMC cells isolated from cord blood are inoculated in a culture container coated with CD16 monoclonal antibody, and the culture system is based on VIVO 15 basic medium with FBS, IL 2, IL 12 and IL 15 added; after 4 to 4.5 days of culture, the PBMC cells are expanded and inoculated in the coating. CD16 monoclonal antibodies were cultured in containers. The culture system used for expansion was FBS, IL 2, IL 7, IL 12, IL 15 and IL 21 on the basis of GT T581 basic medium. The method for culturing NK cells from cord blood provided by the invention is simple in operation and low in cost by adding different components to different basic media for initial culture and expansion, and can obtain a large number of NK cells meeting the clinical use standard, thus making the method more conducive to popularization and application.
【技术实现步骤摘要】
一种脐带血NK细胞的培养方法
本专利技术涉及细胞培养领域,具体而言,涉及一种脐带血NK细胞的培养方法。
技术介绍
NK细胞又称为自然杀伤细胞,属于大颗粒淋巴细胞,来源于骨髓,分布于外周血、肝脏及脾脏,少量分布于淋巴结及其他组织中,占外周血淋巴细胞的5%~15%,是重要的免疫细胞。NK细胞是身体初期防御的重要机构,具有强力的细胞毒活性。同时发挥免疫调节作用,快速提升免疫力和康复质量科学家在1975年首次鉴定到了NK细胞,这类细胞能够在缺少T、B细胞的情况下直接杀伤肿瘤细胞。与具有细胞毒性的CD8+T细胞不同,NK细胞杀伤肿瘤细胞时不需要预先致敏可以直接杀伤MHC阴性的肿瘤细胞,这使得NK细胞在过继细胞免疫治疗中被广泛应用。但NK细胞在外周血淋巴细胞中所占的比例较低,所以有必要建立一种NK细胞体外扩增技术,用于研究NK细胞的功能并为肿瘤的细胞免疫治疗奠定基础。近年来,有人采用基因工程的方法在K562细胞上同时表达IL-15、CD137L等分子,并以此细胞来刺激NK细胞的增殖。或者使用磁珠筛选CD56-细胞等方法培养NK细胞。上述方法在操作条件和成本上都较高,为NK细胞的临床使用造成了一定的困难。有鉴于此,特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脐带血NK细胞的培养方法,操作简便,成本低,能得到大量满足临床使用标准的NK细胞,使该方法更利于推广和应用。为了实现本专利技术的上述目的,特采用以下技术方案:一种脐带血NK细胞的培养方法,包括以下步骤:由脐带血分离得到的PBMC细胞接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养,培养体系是在VIVO-15 ...
【技术保护点】
1.一种脐带血NK细胞的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:由脐带血分离得到的PBMC细胞接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养,培养体系是在VIVO‑15基础培养基的基础上添加以下组分:以培养体系的体积计,FBS 50±2μL/mL,IL‑2 500±10IU/mL,IL‑12 2.5±0.2ng/mL,IL‑15 20±2ng/mL;培养4‑4.5天后,进行扩培,扩培接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养,扩培所用的培养体系是在GT‑T581基础培养基的基础上添加以下组分:以培养体系的体积计,FBS 50±2μL/mL,IL‑2 500±10IU/mL,IL‑7 1ng±0.1ng/mL,IL‑12 2.5±0.2ng/mL,IL‑15 50±2ng/mL,IL‑21 2ng±0.2;所述扩培次数至少一次。
【技术特征摘要】
1.一种脐带血NK细胞的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:由脐带血分离得到的PBMC细胞接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养,培养体系是在VIVO-15基础培养基的基础上添加以下组分:以培养体系的体积计,FBS50±2μL/mL,IL-2500±10IU/mL,IL-122.5±0.2ng/mL,IL-1520±2ng/mL;培养4-4.5天后,进行扩培,扩培接种于包被有CD16单抗的培养容器中进行培养,扩培所用的培养体系是在GT-T581基础培养基的基础上添加以下组分:以培养体系的体积计,FBS50±2μL/mL,IL-2500±10IU/mL,IL-71ng±0.1ng/mL,IL-122.5±0.2ng/mL,IL-1550±2ng/mL,IL-212ng±0.2;所述扩培次数至少一次。2.根据权利要求1所述的脐带血NK细胞的培养方法,其特征在于,所述包被有CD16单抗的培养容器均采用以下方法制备:以所述培养面积为25cm2计,加入含有3±1μg的CD16单抗和1±0.2mL的D-PBS,在细...
【专利技术属性】
技术研发人员:施琳,
申请(专利权)人:汇麟生物科技北京有限公司,
类型:发明
国别省市:北京,11
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