一种有助于体外获得Th22细胞的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种有助于体外获得Th22细胞的组合物及其用途，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，包括：幼稚性B细胞或Breg细胞，以及TGF‑β、IL‑6、IL‑1β、抗IL‑4抗体、抗IFN‑γ抗体、抗IL‑2抗体、抗CD3抗体和抗CD28抗体。本发明专利技术扩增的Th22细胞可用来治疗一些自身免疫性疾病，如红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化、自身免疫性肝炎；慢性炎症性疾病，如糖尿病、冠心病、高脂血症、湿疹、白癜风、异位性皮炎、扁平苔藓等。

A Composition Helping to Obtain Th22 Cells in Vitro and Its Application

The invention provides a composition for obtaining Th22 cells in vitro and its use. The composition is characterized by immature B cells or Breg cells, as well as TGF_beta, IL_6, IL_1beta, anti-IL_4 antibody, anti-IFN_gamma antibody, anti-IL_2 antibody, anti-CD3 antibody and anti-CD2 antibody. The expanded Th22 cells of the invention can be used to treat some autoimmune diseases, such as lupus erythematosus, dermatomyositis, vasculitis, Sjogren's syndrome, scleroderma, rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, multiple sclerosis, autoimmune hepatitis, and chronic inflammatory diseases, such as diabetes, coronary heart disease, hyperlipidemia, eczema, vitiligo, ectopic dermatitis and lichen planus. And so on.

【技术实现步骤摘要】
一种有助于体外获得Th22细胞的组合物及其用途
本专利技术涉及体外Breg细胞联合细胞因子体外诱导获得Th22细胞的方法，涉及一种有助于体外获得Th22的组合物、方法及其在红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病等炎症性疾病中的应用。
技术介绍
调节性B细胞(Breg)是一群具有免疫调节作用的B细胞，因其膜标记为CD19+CD5+CD1dhigh并主要分泌抑制性的细胞因子IL-10，故又称为B10细胞。Breg细胞具有免疫抑制作用，可抑制其他效应性T细胞的增殖和分泌。基于Breg细胞的负向调控作用，因此有潜力用于治疗自身免疫性疾病如红斑狼疮(SLE)、胶原诱导关节炎(CIA)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、慢性结肠炎(CC)等。但Breg细胞治疗自身免疫性疾病的具体机制并不清楚，进而限制了其临床的使用。Th22细胞是一群分泌IL-22的CD4+T细胞，Th17细胞也可以分泌部分的IL-22，TNF-α和IL-6可具有促进Th22分化的作用，其可通过分泌的IL-22起负向的免疫调节作用，在自身免疫性疾病发病过程可能发挥调控免疫反应的作用。但在自身免疫性疾病病情活动和发病过程中，Th22细胞减少，分泌IL-22的量减少，进而不能控制亢进的自身免疫炎症损伤。但Th22细胞的体外诱导分化和扩增较难，目前并没有找到Th22细胞有效的体外扩增方法。如能找到体外扩增Th22的方法，可帮助快捷和高效的扩增Th22细胞，扩增后的Th22可用于自身免疫性疾病的细胞治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种有助于体外获得Th22细胞的组合物。本专利技术的另一目的是提供上述组合物的用途。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，包括：幼稚性B细胞或Breg细胞，以及TGF-β、IL-6、IL-1β、抗IL-4抗体、抗IFN-γ抗体、抗IL-2抗体、抗CD3抗体和抗CD28抗体。优选地，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物还包括抗IgM抗体和抗CD40L抗体。优选地，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物包括：幼稚性B细胞，以及抗CD3抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD28抗体1.8-2.2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体8-12μg/ml、抗IFN-γ抗体8-12μg/ml、抗IL-2抗体8-12μg/ml，抗IgM抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD40L抗体1.8-2.2μg/ml；或包括：Breg细胞，以及抗CD3抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD28抗体1.8-2.2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体8-12μg/ml、抗IFN-γ抗体8-12μg/ml、抗IL-2抗体8-12μg/ml。更优选地，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物包括：幼稚性B细胞，以及抗CD3抗体2μg/ml、抗CD28抗体2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体10μg/ml、抗IFN-γ抗体10μg/ml、抗IL-2抗体10μg/ml、抗IgM抗体2μg/ml和抗CD40L抗体2μg/ml；或包括：Breg细胞，以及抗CD3抗体2μg/ml、抗CD28抗体2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体10μg/ml、抗IFN-γ抗体10μg/ml、抗IL-2抗体10μg/ml。更优选地，所述的幼稚性B细胞或Breg细胞的个数为1×106-5×106个/ml。本专利技术还提供了上述的有助于体外获得Th22细胞的组合物在体外获得Th22细胞中的用途。本专利技术还提供了一种体外获得Th22细胞的方法，其特征在于，应用上述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，具体步骤包括：向幼稚性T细胞的培养液中加入上述任一组合物进行诱导分化。本专利技术还提供了一种体外获得Th22细胞的方法，其特征在于，应用上述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，具体步骤包括：将幼稚性B细胞在含有抗IgM抗体1-3μg/ml和抗CD40L抗体1-3μg/ml的培养基中预先培养1-3天，诱导向Breg细胞分化，然后与T细胞共培养，加入抗CD3抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD28抗体1.8-2.2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体8-12μg/ml、抗IFN-γ抗体8-12μg/ml、抗IL-2抗体8-12μg/ml，继续培养。本专利技术还提供了一种体外获得Th22细胞的方法，其特征在于，应用上述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，具体步骤包括：将幼稚性B细胞在含有抗IgM抗体2μg/ml和抗CD40L抗体2μg/ml的培养基中预先培养2天，诱导向Breg细胞分化，然后与T细胞共培养，加入抗CD3抗体2μg/ml、抗CD28抗体2μg/ml、TGF-β0.5ng/ml、IL-650ng/ml、IL-1β10ng/ml、抗IL-4抗体10μg/ml、抗IFN-γ抗体10μg/ml、抗IL-2抗体10μg/ml，继续培养。本专利技术还提供了上述的有助于体外获得Th22细胞的组合物在制备治疗自身免疫性疾病或免疫炎症性疾病药物中的应用。优选地，所述的自身免疫性疾病或免疫炎症性疾病为红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化和自身免疫性肝炎；慢性炎症性疾病，如糖尿病、冠心病、高脂血症、湿疹、白癜风或异位性皮炎。本专利技术采用了以下两种技术方案：第一种方案为：一种体外获得Th22细胞的方法，所述的方法包括以下步骤：向幼稚性T细胞的培养液中加入如上任一所述的组合物进行诱导分化。另一种方案为：B细胞在含有抗IgM抗体和抗CD40L抗体的培养基中预先培养，诱导向Breg细胞分化，然后与幼稚性T细胞共培养，在培养液加入抗CD3抗体、抗CD28抗体、TGF-β、IL-6、IL-1β、抗IL-4抗体、抗IFN-γ抗体和抗IL-2抗体。本专利技术中首次创新性发现Breg细胞具有促进Th22细胞分化和IL-22分泌的作用，Breg细胞通过促进Th22细胞分化发挥对狼疮的治疗作用。本专利技术以Th22细胞为靶点，发现一种体外促进幼稚性T细胞向Th22细胞分化的新方法，即Breg细胞联合细胞因子刺激可有效促进Th22细胞的分化和具有免疫抑制作用的细胞因子的分泌。而Breg细胞体外扩增后回输的也是通过促进Th22细胞的方式发挥对自身免疫性疾病的治疗作用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1)新颖：本专利技术中使用Breg细胞，以及TGF-β+IL-6+IL-1β可有效促进CD4+IL-22+Th22细胞的分化和扩增。Breg细胞联合TGF-β+IL-6+IL-1β扩大了Th22细胞的分化以及IL-22的分泌。该方法可开发用于体外Th22细胞的扩增。即便根据现有的技术很难想到将Breg细胞，抗CD3抗体、抗CD28抗体、抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，包括：幼稚性B细胞或Breg细胞，以及TGF‑β、IL‑6、IL‑1β、抗IL‑4抗体、抗IFN‑γ抗体、抗IL‑2抗体、抗CD3抗体和抗CD28抗体。

【技术特征摘要】
1.一种有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，包括：幼稚性B细胞或Breg细胞，以及TGF-β、IL-6、IL-1β、抗IL-4抗体、抗IFN-γ抗体、抗IL-2抗体、抗CD3抗体和抗CD28抗体。2.如权利要求1所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物包括：幼稚性B细胞，以及抗CD3抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD28抗体1.8-2.2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体8-12μg/ml、抗IFN-γ抗体8-12μg/ml、抗IL-2抗体8-12μg/ml，抗IgM抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD40L抗体1.8-2.2μg/ml；或包括：Breg细胞，以及抗CD3抗体1.8-2.2μg/ml、抗CD28抗体1.8-2.2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体8-12μg/ml、抗IFN-γ抗体8-12μg/ml、抗IL-2抗体8-12μg/ml。3.如权利要求1所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物包括：幼稚性B细胞，以及抗CD3抗体2μg/ml、抗CD28抗体2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体10μg/ml、抗IFN-γ抗体10μg/ml、抗IL-2抗体10μg/ml、抗IgM抗体2μg/ml和抗CD40L抗体2μg/ml；或包括：Breg细胞，以及抗CD3抗体2μg/ml、抗CD28抗体2μg/ml、TGF-β0.5-5ng/ml、IL-620-100ng/ml、IL-1β10-20ng/ml、抗IL-4抗体10μg/ml、抗IFN-γ抗体10μg/ml、抗IL-2抗体10μg/ml。4.如权利要求1所述的有助于体外获得Th22细胞的组合物，其特征在于，所述的幼稚性B细胞或...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨骥，李明，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31