一种与复发性流产相关的微生物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与复发性流产相关的微生物及其应用，具体的所述微生物为Anaerococcus hydrogenalis，Anaerococcus hydrogenalis在不明原因复发性流产患者中的丰度显著增加，提示可以将Anaerococcus hydrogenalis作为微生物标志物应用于不明原因复发性流产的早期诊断。

【技术实现步骤摘要】
一种与复发性流产相关的微生物及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种与复发性流产相关的微生物及其应用。
技术介绍
复发性流产(habitualabortion)指连续发生自然流产2次或2次以上。大多数复发性流产出现在妊娠早期，并且大多数复发性流产病人妊娠终止于相同妊娠天数，复发性流产病人流产时的临床表现及过程与常见病人的自然流产一致。早期妊娠流产发生原因复杂，常为子宫发育异常、内分泌原因、周围环境物理、化学因素等，但找不到具体原因的复发性流产占50％左右，临床上统一归类为原因不明的复发性流产。近年来随着免疫学的研究进展，由免疫因素引起的复发性流产逐渐被国内外同行接受认可，并认为是主要原因之一。随着生殖医学及人工助孕技术的广泛开展，目前一致接受胚胎的生长发育与免疫耐受密切相关，其过程多种免疫分子参与其中，并影响正常胚胎着床及胚胎免疫排斥导致流产的发生。近年来随着社会发展，食品、辐射、空气质量等因素对人体的影响，复发性流产的发病率逐年升高，母体及胚胎原因导致早期妊娠组织丢失问题逐渐得到有效解决，但仍有近1/2的复发性流产病人的原因不明，导致这样的病人无法从病因上得到有效的治疗，怎样做到早发现及胚胎发育停止提前预测，及应用某种药物来干预复发性流产的发生或评价某种药物的治疗效果，成为目前的研究热点。人体内存在数量庞大的微生物群，这些微生物编码基因的数量是人类基因组的100倍之多。宿主的黏膜表面基本都被微生物覆盖，其中大部分微生物位于肠道内，参与机体新陈代谢、神经认知功能、炎症反应和免疫调控等多项生理过程，其代谢能力与人体的肝脏相当，因此被看作人体的又一个器官。近年来随着高通量测序技术以及组学技术的发展，人们逐渐认识到肠道微生物可以影响疾病发生，参与调控疾病治疗相关的代谢、免疫、炎症等多个过程。研究与不明原因复发性流产相关的肠道菌群，对于实现复发性流产的早发现以及胚胎发育的提前预测具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于发现与复发性流产相关的肠道菌群，通过检测所述菌群的丰度，可以在疾病早期进行预警以及干预，提高生活质量，加强防护。本专利技术提供了微生物标志物在制备诊断复发性流产的产品的应用，所述微生物标志物为Anaerococcushydrogenalis。进一步，所述产品通过测定样本中微生物标志物的丰度来判断是否为复发性流产，其中Anaerococcushydrogenalis的丰度显著增加时，可以预测或诊断为复发性流产。进一步，所述样本为阴道分泌物样本。进一步，所述复发性流产为不明原因复发性流产。进一步，所述产品可以包括本领域常用的任何物质，优选的为试剂盒、制剂、芯片。进一步，所述产品为试剂盒。本专利技术提供了一种诊断复发性流产的试剂盒，所述试剂盒包括检测Anaerococcushydrogenalis的丰度的试剂。进一步，所述试剂包括检测Anaerococcushydrogenalis的特异性的引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。进一步，所述特异性引物为能够扩增Anaerococcushydrogenalis16SrRNA的引物。进一步，所述试剂盒还包括PCR预混液。本专利技术提供了Anaerococcushydrogenalis在构建预测复发性流产的计算模型中的应用。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术首次发现了Anaerococcushydrogenalis与复发性流产相关，Anaerococcushydrogenalis在不明原因复发性流产患者中丰度显著增加，说明Anaerococcushydrogenalis可作为检测靶标应用于复发性流产的诊断和预测。本专利技术提供了一种诊断复发性流产的试剂盒，所述试剂盒能在疾病早期进行诊断，实现早期预警，提高患者的生活质量。附图说明图1是Anaerococcushydrogenalis在不明原因复发性流产患者中的丰度图。具体实施方式本专利技术通过将正常妊娠的人群和不明原因复发性流产的人群作为对象，首次查明了肠内细菌与不明原因复发性流产的临床医学指标的相关性，并以此为基础提供了不明原因复发性流产的早期诊断技术。为了评估肠道共生菌群组成能否作为不明原因复发性流产的预测因子，本专利技术通过收集正常人群与不明原因复发性流产的阴道分泌物，综合分析16SrRNA测序、宏基因组测序和针对特定菌群的定量聚合酶链反应结果，发现与复发性流产相关的肠道菌群，本专利技术通过16SrRNA测序，首次发现了Anaerococcushydrogenalis的丰度在复发性流产和正常人群中呈现显著性差异，说明Anaerococcushydrogenalis可作为复发性流产诊断的生物标记物。在本专利技术中，“生物标记物”是指，将发生复发性流产的人的试样与对照组试样进行比较时，由于在两个试样中存在有差别而可以成为预测复发性流产的危险程度或者诊断是否发生疾病时的基准的物质。在本申请中，“预测危险程度”是指辨别个体是否存在复发性流产的可能性，其可以为了通过对发生复发性流产危险程度高的个体进行特别且适当的管理，推迟发病时间或尽可能杜绝发病，或者为了治疗决定，选择最合适的治疗方式而应用于临床。此外，“诊断”的意思是确认病理状态的存在或特征，针对本专利技术的目的，诊断的意思可以是复发性流产发病与否。根据本专利技术的实施例，分析不同肠道菌群的复发性流产的阴道分泌物样本。基于高通量测序数据，对不同菌群对复发性流产的效果进行统计，从而确定与复发性流产相关的特异性序列。作为一种优选的实施方案，包括以下步骤：(1)样品的收集与处理：收集相关阴道分泌物样本，使用试剂盒进行DNA提取，得到核酸样本；(2)文库构建和测序：利用高通量测序进行DNA文库构建和测序，以便得到样品中所包含微生物的核酸序列；(3)通过生物信息学的分析方法确定复发性流产相关的特异性微生物核酸序列。首先，获得所述个体的阴道分泌物样本中的核酸序列的测序数据，所述测序数据包括多个读段；组装所述读段，获得基因集，所述基因集包括多个组装片段，所述基因集中的组装片段为非冗余序列；确定所述标志物中的各种微生物包含的组装片段；依据所述测序数据，分别确定所述基因集中的各个组装片段的丰度，其中包括，分别确定所述标志物中的各种微生物包含的组装片段的丰度；分别依据所述确定的组装片段的丰度，确定各种微生物的丰度。在本专利技术中，测序依据所选的测序平台的不同，可选择但不限于半导体测序技术平台比如PGM，合成测序的技术平台比如Illumina公司的HISeq、Miseq序列平台以及单分子实时测序平台比如PaCBio序列平台。测序方式可以选择单端测序，也可以选择双末端测序，获得的下机数据是测读出来的片段，称为读段。在本专利技术中，所称的组装可以利用已知序列组装方法或软件进行，例如利用SOAPdenovo、velvet等。根据本专利技术的一个实施例，通过将基因集中的组装片段与微生物参考序列运用软件MetaGeneMark比对，依据与某种微生物参考序列的相似程度来判断组装片段是否来自该种微生物。所称参考序列指预先确定的序列，可以是预先获得的待测样本所属或者所包含的生物类别的任意参考模板，例如，若目标是待测样本中的微生物，参考序列可选择NCBI数据库中的各种微生物的参考基因组和或MetaHIT项目公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.微生物标志物在制备诊断复发性流产的产品的应用，其特征在于，所述微生物标志物为Anaerococcus hydrogenalis。

【技术特征摘要】
1.微生物标志物在制备诊断复发性流产的产品的应用，其特征在于，所述微生物标志物为Anaerococcushydrogenalis。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品通过测定样本中微生物标志物的丰度来判断是否为复发性流产。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本为阴道分泌物样本。4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述复发性流产为不明原因复发性流产。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、制剂、芯片。6.一种诊断复发性流产的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦雪娟，王立群，宋倩倩，
申请(专利权)人：蚌埠医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：安徽,34