【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养及毛发再生，具体涉及et-1促进真皮干细胞生发的用途。
技术介绍
1、随着生活节奏的加快以及年龄的增长，越来越多的人受到脱发问题的困扰。脱发不仅会影响美观，而且会对患者造成心理问题。目前，药物治疗、植发手术是临床上常采取的脱发治疗手段，但都面临着诸多的局限性。
2、皮肤干细胞具有多种类型，能够通过增殖、分化及调控机制来治疗各种器官的缺损，是组织修复中最重要的一类“种子细胞”。其中，真皮干细胞(dscs)作为一种多能性的前体干细胞，在毛囊及其它皮肤附属结构再生领域有着巨大的应用潜力。毛发的再生，离不开真皮与表皮的相互作用，研究表明，使用dscs，混同表皮干细胞移植到脱发部位，可再生毛发，而使用终末分化的真皮成纤维细胞，则不能再生毛发。
3、截止到目前为止，临床研究报道能够有效治疗脱发的依然是“原代”dscs的自体移植。即从自体皮肤中分离dscs，不经过扩培，通过注射直接移植到脱发部位。动物实验表明，要想达到比较理想的毛发再生效果，至少每厘米伤口需要100,000个dscs细胞；而人的皮肤比小鼠更厚，预计需要的dscs密度是小鼠的10倍以上。但dscs的体外扩增面临着两个难题，一是增殖缓慢，难以在短期内获得大量细胞；二是体外培养无法维持dscs的干性，从而使其失去毛囊再生能力。同时，难以体外扩培，就意味着要采集更大的患者皮肤才能获得足量的dscs，这给干细胞治疗脱发带来了很大的限制。因此，亟需开发一种提高dscs的增殖速率及干性的方法，以促进干细胞治疗在毛发再生领域中的应用，有着重要的研
4、内皮素家族(endothelins，ets)成员主要包括et-1、et-2和et-3，它们都是由21个氨基酸组成的小肽，最早发现其由血管内皮细胞合成，具有非常强烈的收缩血管的生物活性，且能够诱导血管生成、促分化、促细胞有丝分裂和类细胞生长因子的性质，调节机体各个器官的发育及功能。然而，目前尚未有将ets应用于生发或防脱发的报道。
技术实现思路
1、为了克服上述现有技术的不足，本专利技术经研究发现，et-1能够提高dscs的增殖速率及干性，促进dscs生发，可以解决目前dscs在现有体外培养方法下存在的增殖缓慢和无法维持干性的难题，进而满足脱发患者的移植应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、本专利技术第一方面提供了et-1在制备生发产品中的应用。
4、本专利技术经研究发现，et-1可对dscs在体外培养时进行干性调节，从而在维持毛发再生能力的同时实现dscs在体外的长期培养，对于干细胞治疗脱发症具有重要的研究意义和实际应用价值。推测其原因为，表皮细胞也是合成et-1的主要场所，通过自分泌和旁分泌作用，et-1能够引起细胞外基质的重塑，引起内皮向间充质的转移，促进真皮成纤维细胞和黑色素细胞的增殖。正因为如此，et-1能促进dscs的增殖以及对dscs在体外培养时进行干性调节，从而在维持毛发再生能力的同时实现dscs在体外的长期培养，对于干细胞治疗脱发症具有重要的研究意义和实际应用价值。
5、优选地，所述生发产品包括生发液、生发干粉、生发微针。
6、本专利技术第二方面提供了一种生发剂，所述生发剂以et-1作为主要活性成分。
7、经研究发现，将et-1直接在体内注射到受试者(小鼠)头皮中，能促进毛发的再生。
8、本专利技术第三方面提供了一种提高dscs生发能力的体外培养方法，具体为：用含et-1的体外无血清3d培养体系培养dscs。
9、所述et-1(ncbi gene id:1906)为内皮素家族(endothelins，ets)成员，通过在dscs的体外无血清3d培养体系中加入et-1，可以促进毛囊dscs的增殖。该方法培养所得细胞可用于移植，应用于毛发再生。比如，从受试者自体皮肤中分离dscs，在体外经过et-1的培养，通过注射直接移植到脱发部位。
10、优选地，所述无血清3d培养体系包括dmem培养基和ham's f12培养液，所述dmem培养基和ham's f12培养液的体积比为2-4:1。
11、优选地，培养时，将细胞按照3-10×104/ml的密度接种到不贴壁的培养皿或生物反应器中。
12、优选地，所述et-1的浓度为0.1-1000nm。
13、更优选地，所述et-1的浓度为100nm。本专利技术经研究发现，所加入的et-1的浓度为100nm时，促进dscs增殖和干性的效果最佳。
14、优选地，培养的第3天和第6天补充细胞因子，每次补充1-3％ b27，18-22ng/mlegf，35-45ng/ml bfgf，第7天进行传代。
15、本专利技术第四方面提供了一种非治疗目的的激活毛发生发的方法，具体为：将et-1皮内注射入皮肤内，激活真皮细胞进而促进毛囊的再生。
16、同样的，所述et-1的最佳浓度为100nm。此时促进dscs增殖和干性的效果最佳。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
18、(1)本专利技术通过体外试验发现，通过在dscs的体外无血清3d培养体系中加入et-1，能够有效提高dscs的增殖。并且，经et-1培养过的dscs，其再生毛囊的数量显著提高。另外，在体内采用et-1直接注射休止期皮肤，可直接在体内激活毛发生长。说明et-1可对dscs在体外培养时进行干性调节，从而在维持毛发再生能力，实现dscs在体外的长期培养，还可以在体内直接激活毛发生发，对于采用干细胞治疗脱发症具有重要的研究意义和实际应用价值，同时为研究新的生发或防脱发药物提供了新的思路，具有广阔的应用前景。
19、(2)本专利技术通过et-1对dscs进行处理，不仅可在短期内获得大量细胞，而且可在体外培养时维持其干性。同时，et-1可促进休止期毛囊进入生长期，可有效改善脱发问题。表明et-1在促进dscs增殖和维持干性方面均具有优异的效果，且具有较好的促生发作用，可以解决目前dscs在现有体外培养方法的难题，同时可满足脱发患者的移植需求。
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1.ET-1在制备生发产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生发产品包括生发液、生发干粉、生发微针。
3.一种生发剂，其特征在于，所述生发剂以ET-1作为主要活性成分。
4.一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，用含ET-1的体外无血清3D培养体系培养真皮干细胞。
5.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，所述无血清3D培养体系包括DMEM培养基和Ham's F12培养液，所述DMEM培养基和Ham's F12培养液的体积比为2-4:1。
6.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，培养时，将细胞按照3-10×104/mL的密度接种到不贴壁的培养皿或生物反应器中。
7.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，所述ET-1的浓度为0.1-1000nM。
8.根据权利要求7所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，所述ET-1的浓度为100n
9.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，培养的第3天和第6天补充细胞因子，每次补充1-3％B27，18-22ng/mL EGF，35-45ng/mLbFGF，第7天进行传代。
10.一种非治疗目的的激活毛发生发的方法，其特征在于，将ET-1皮内注射入皮肤内，激活真皮细胞进而促进毛囊的再生。
...【技术特征摘要】
1.et-1在制备生发产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生发产品包括生发液、生发干粉、生发微针。
3.一种生发剂，其特征在于，所述生发剂以et-1作为主要活性成分。
4.一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，用含et-1的体外无血清3d培养体系培养真皮干细胞。
5.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，所述无血清3d培养体系包括dmem培养基和ham's f12培养液，所述dmem培养基和ham's f12培养液的体积比为2-4:1。
6.根据权利要求4所述的一种提高真皮干细胞生发能力的体外培养方法，其特征在于，培养时，将细胞按照...
【专利技术属性】
技术研发人员：褚维伟，高颖，王旭升，樊智猛，
申请(专利权)人：蚌埠医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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