一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒及应用制造技术

一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒及应用，属于放射性药物及核医学技术领域。所述试剂盒内包含盛放抗体‑螯合剂官能化分子的第一小瓶，盛放缓冲液的第二小瓶，盛放pH调节剂的第三小瓶，盛放溶媒的第四小瓶，以及纯化柱、无菌滤膜、注射器、使用说明书，并进一步公开了试剂盒的使用方法。采用本发明专利技术的试剂盒操作方便，标记率高，且制备的放射性核素标记的抗体药物在体内外稳定性好；通过PET‑CT显像能客观准确地观察药物在动物体内的分布及代谢情况，特异性强，能达到精确诊断的目标，有望在临床上得到推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒及应用
本专利技术属于放射性标记
，具体涉及一种放射性核素标记的抗体药物、其试剂盒及应用。
技术介绍
正电子发射计算机断层扫描(PET)是利用正电子放射性的核素标记一些生理需要的化合物或代谢底物如葡萄糖、脂肪酸、氨基酸、受体的配体及水等，引入体内后，应用正电子扫描机而获得的体内化学影像技术。它以其能显示脏器或组织的代谢活性及受体的功能与分布而受到临床广泛的重视，也称之为“活体生化显像”。可以说，PET的出现使得医学影像技术达到了一个崭新的水平，使无创伤性的、动态的、定量评价活体组织或器官在生理状态下及疾病过程中细胞代谢活动的生理、生化改变，获得分子水平的信息成为可能，这是目前其他任何方法所无法实现的。因此，在发达国家，PET广泛应用于临床，已成为肿瘤、冠心病和脑部疾病这三大威胁人类生命疾病诊断和指导治疗的最有效手段。免疫-正电子发射断层显像技术(Immuno-PET)是用于体内追踪和定量单克隆抗体(mAb)的新兴方法，其有效地组合了PET的高灵敏度和mAb的高特异性，对于疾病的诊断具有积极的意义。对于放射性核素标记抗体这一技术点来说，找到匹配的、具有合适的半衰期的核素，且核素标记抗体后不能影响抗体的特异性、靶向性，标记产物在体内外具有良好的稳定性、较高的放射性化学纯度，PET显像时能准确观察药物在体内的代谢情况，成像效果良好等等，这些均是获得理想的放射性核素标记抗体需要综合考虑与解决的难题。目前，抗体的放射性核素标记方法存在以下缺点：1、需要从不同的供应商手中分别购买不同的原料，在场地现场对该原料进行分装、配制，耗时较长，原料供应不稳定；2、有些放射性核素的半衰期较短，合成和纯化必须快速和有效，同时对运输过程中保存条件的要求也较高。3、配比的准确性难以把握，收率不稳定，产品质量不稳定。
技术实现思路
为了克服现有放射性核素标记抗体的技术缺陷，本专利技术开发了一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒，为放射性抗体药物的制备开创性的提供了一种简易方便的方法。这种方法具有操作简便，重复性好，标记率高以及成本相对较低等特点。本专利技术的目的通过以下技术方案得以实现：通过本专利技术的试剂盒制备一种放射性核素标记的抗体药物，其结构式如式Ⅰ所示：具体地说，本专利技术提供了一种用于制备放射性核素标记抗体的试剂盒，其中试剂盒包括：-a)第一小瓶：抗体-螯合剂官能化分子，所述抗体-螯合剂官能化分子为标记前体；-b)第二小瓶：缓冲液，所述缓冲液能够使溶液的pH值保持恒定；-c)第三小瓶：pH调节剂，所述pH调节剂用来调节反应体系的pH值；-d)第四小瓶：溶媒，所述溶媒用来活化纯化柱；-还包含纯化柱、无菌滤膜、注射器、使用说明书；其中，抗体-螯合剂官能化分子为溶液形式，所述溶液为生理盐水、醋酸盐、磷酸盐中的任意一种，优选醋酸盐。在本专利技术优选的实施方式中，抗体选自KN035、Denosumab、Ipilimumab、Avastin、Herceptin中的任意一种；螯合剂选自DFO、NOTA、DOTA、DTPA及其衍生物中的任意一种；放射性核素选自64Cu、67Ga、68Ga、89Zr中的任意一种。进一步地，缓冲液可以选自pH＝5.0～8.0的醋酸盐、HEPES缓冲液、柠檬酸盐缓冲液中的一种或几种，优选pH＝7.0的醋酸盐缓冲液；pH调节选自碳酸盐、碳酸氢盐中的任意一种或几种，优选pH调节剂为碳酸钠溶液；纯化柱为凝胶脱盐柱，优选凝胶脱盐柱为PD10柱；溶媒为醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、生理盐水中的任意一种或几种，优选溶媒为醋酸盐缓冲液。一种用于制备上述放射性核素标记抗体药物的试剂盒，如图1所示，其结构分为上下两层：下层为一层格架，格架上放置第一～第四小瓶，格架采用海绵材质制成；上层放置纯化柱、无菌滤膜、注射器、使用说明书；盒体四周充满海绵作为缓冲材料。一种用于制备上述放射性核素标记抗体药物的试剂盒，每5～10mCi放射性核素对应的抗体-螯合剂官能化分子质量为1～5mg；每1～5mg抗体-螯合剂官能化分子对应的缓冲液体积为1～5ml。一种利用上述试剂盒制备放射性核素标记抗体药物的方法，步骤为：首先，将放射性核素溶液注射入缓冲液中，通过pH调节剂微调pH为5.0～8.0；其次，向其中加入抗体-螯合剂官能化分子溶液，轻轻晃匀，静置反应10～120min；最后，将反应液经过纯化柱、无菌滤膜，收集流出液，即得放射性核素标记的抗体。一种放射性核素标记的抗体药物在PET显像剂制备中的应用。本专利技术的有益效果：在本专利技术提供的技术方案中，试剂盒内配备了用于制备放射性核素标记抗体药物的各种试剂、其准确用量以及相应的纯化工具，因而能够直接完成对抗体的核素标记，而无需像现有技术那样另行单独购买、配制所需原料，工艺条件更稳定。通过本专利技术的试剂盒制备的放射性核素标记的抗体，标记率≥65％，纯化后放射性化学纯度≥90％。使用本专利技术提供的试剂盒得到的放射性核素标记的抗体药物，其体外稳定性较高，PET显像特异性强，且成像分辨率较高，完全能满足PET显像剂的要求。附图说明图1为试剂盒的上层、下层结构示意图。图2为本专利技术实施例1中[89Zr]-Df-Bz-NCS-KN035在猴子体内不同时间生物分布的PET显像。图3为本专利技术实施例1中[89Zr]-Df-Bz-NCS-KN035给药24h时在不同类型肿瘤模型鼠的PET显像。具体实施方式为了使本专利技术的内容更容易被清楚地理解，下文结合具体实施例对本专利技术的内容做进一步详细地说明，所述的实施例目的仅用于说明和描述本专利技术当前的最佳模式，但本专利技术的保护范围不以任何方式受此处所述实施例的限制。本专利技术实施例部分涉及的试剂均为市售商品，其中，抗体KN035由苏州康宁杰瑞生物科技有限公司提供。实施例1：1)标记前体制备取浓度为0.1mol/LpH＝8.4的NaHCO3溶液稀释抗体KN035的水溶液，使KN035浓度为10mg/mL，再用0.1mol/L的Na2CO3溶液调节pH＝9.0；然后向其中加入浓度为2mol/mL的螯合剂Df-Bz-NCS的DMSO溶液，使Df-Bz-NCS与KN035的摩尔比为5：1，混合后，在37℃下反应60min，即得标记前体Df-Bz-NCS-KN035粗品。将得到的粗品采用醋酸钠淋洗的PD10柱纯化，纯化后，待用。2)试剂盒组成a.第一小瓶：含Df-Bz-NCS-KN0353mgb.第二小瓶：含pH＝6.5的醋酸-醋酸钠缓冲液5mlc.第三小瓶：含碳酸钠溶液1mld.第四小瓶：含醋酸-醋酸钠缓冲液50ml还包含PD10柱1个、无菌滤膜1个、注射器4个、使用说明书。3)试剂盒的使用a.将5mCi89Zr溶液注射入醋酸-醋酸钠缓冲液中，通过碳酸钠溶液微调pH为6.8～7.2；b.向其中加入Df-Bz-NCS-KN035溶液，轻轻晃匀，静置反应30min；HPLC检测标记率70％。c.使用醋酸-醋酸钠缓冲液淋洗PD10柱；将反应液经过纯化柱、无菌滤膜，收集含蛋白的流出液，即得[89Zr]-Df-Bz-NCS-KN035。将标记产物[89Zr]-Df-Bz-NCS-KN035在室温下放置48h后，放射性化学纯度为96％；将其分别置于小鼠血清和生理盐水中，于37℃水浴箱中孵育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒，包括：‑a）第一小瓶：抗体‑螯合剂官能化分子，所述抗体‑螯合剂官能化分子为标记前体；‑b）第二小瓶：缓冲液，所述缓冲液能够使溶液的pH值保持恒定；‑c）第三小瓶：pH调节剂，所述pH调节剂用来调节反应体系的pH值；‑d）第四小瓶：溶媒，所述溶媒用来活化纯化柱；‑还包含纯化柱、无菌滤膜、注射器、使用说明书；其中，抗体‑螯合剂官能化分子为溶液形式，所述溶液为生理盐水、醋酸盐、磷酸盐中的任意一种。

【技术特征摘要】
1.一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒，包括：-a）第一小瓶：抗体-螯合剂官能化分子，所述抗体-螯合剂官能化分子为标记前体；-b）第二小瓶：缓冲液，所述缓冲液能够使溶液的pH值保持恒定；-c）第三小瓶：pH调节剂，所述pH调节剂用来调节反应体系的pH值；-d）第四小瓶：溶媒，所述溶媒用来活化纯化柱；-还包含纯化柱、无菌滤膜、注射器、使用说明书；其中，抗体-螯合剂官能化分子为溶液形式，所述溶液为生理盐水、醋酸盐、磷酸盐中的任意一种。2.根据权利要求1所述的一种放射性核素标记的抗体试剂盒，其特征在于，所述放射性核素选自64Cu、67Ga、68Ga、89Zr中的任意一种。3.根据权利要求1所述的一种放射性核素标记的抗体试剂盒，其特征在于，所述抗体选自KN035、Denosumab（狄诺塞麦）、Ipilimumab（易普利姆玛）、Avastin（阿瓦斯汀）、Herceptin（赫赛汀）中的任意一种；所述螯合剂选自DFO、NOTA、DOTA、DTPA及其衍生物中的任意一种。4.根据权利要求1所述的一种放射性核素标记的抗体试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为pH=5.0~8.0的醋酸盐、HEPES缓冲液、柠檬酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：王正，李世红，罗志刚，蔡飞，戴娟，徐建锋，
申请(专利权)人：南京江原安迪科正电子研究发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32