一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针、制备方法、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开了一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针、制备方法、试剂盒及其应用，本发明专利技术将三种DNA探针，其中一种为包含有核酸适配体序列的DNA探针，一种标记有辣根过氧化物酶，进行杂交制得自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针，采用核酸适配体功能化的磁纳米颗粒作为磁分离固相载体，用于血液中人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞(CCRF‑CEM)的特异性捕获，提升对目标物的捕获效率，与上述自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针配合使用，检测CCRF‑CEM的线性范围宽、检测限低、精密度和准确度高，可实现对外周血样品中CCRF‑CEM的高灵敏度、高特异性和快速检测，对于白血病的辅助诊断、疗效评估和预后判断具有重大意义。

A self-assembled aptamer/protein composite nanoprobe, its preparation method, kit and Application

The invention discloses a self-assembled nucleic acid adapter/protein composite nanoprobe, a preparation method, a kit and its application. The invention discloses three DNA probes, one of which is a DNA probe containing a sequence of nucleic acid adapters, and the other is a DNA probe labeled with horseradish peroxidase, which is hybridized to prepare a self-assembled nucleic acid adapter/protein composite nanoprobe, using the function of nucleic acid adapter. As a solid phase carrier for magnetic separation, the magnetized magnetic nanoparticles can be used for specific capture of human acute lymphoblastic leukemia T lymphocyte (CCRF CEM) in blood and enhance the capture efficiency of target. The detection of CCRF CEM can be achieved with wide linear range, low detection limit, high precision and accuracy by using the self-assembled nucleic acid aptamer/protein composite nanoprobe. The high sensitivity, specificity and rapid detection of CCRF CEM in peripheral blood samples is of great significance for the auxiliary diagnosis, therapeutic evaluation and prognosis judgement of leukemia.

【技术实现步骤摘要】
一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针、制备方法、试剂盒及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针、制备方法、试剂盒及其应用。
技术介绍
目前，自组装，作为一种以可控方式将功能结构单元自发地组织或聚集为多功能材料的有力技术，已被成功用于生物医学中的传感和载药等领域。特别地，基于核酸杂交调控的自组装，因核酸具备结构和功能的多样性，及可程序化设计其序列等优点，使得其在纳米材料的有序构建，核酸、酶活性、重金属离子检测等方面具有广阔的应用前景。近年来，以核酸适配体(Aptamer)作为亲和配体的核酸组装体的构建和应用亦获得了广泛关注。Aptamer是从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的单链寡核苷酸，能够通过分子内折叠形成特定的三维结构，从而与靶物质(如小分子、蛋白质、细胞等)高亲和力、高特异性结合。Aptamer作为“化学家的抗体”，具有分子量小、易于合成与修饰、低成本、高稳定性和序列设计可程序化等优点，作为新一代分子识别探针在生物成像、检测和治疗等领域发挥重要作用。目前的研究表明Aptamer结合无机纳米材料如量子点、金纳米颗粒、石本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针，其特征在于，由三种DNA探针杂交而成，其中第一种为包含有核酸适配体序列的DNA探针，记为杂交探针1，其核苷酸序列为：5'‑ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGAAAAAAAAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG‑3'；第二种为标记辣根过氧化物酶的DNA探针，记为杂交探针2，其核苷酸序列为：5'‑HRP‑AAAAAAAAAATACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGT‑3'；第三种DNA探针标记为杂交探针3，其核苷酸序列为：5'‑GCACCTGGGGGAGTAAAAACTAAAA...

【技术特征摘要】
1.一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针，其特征在于，由三种DNA探针杂交而成，其中第一种为包含有核酸适配体序列的DNA探针，记为杂交探针1，其核苷酸序列为：5'-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGAAAAAAAAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'；第二种为标记辣根过氧化物酶的DNA探针，记为杂交探针2，其核苷酸序列为：5'-HRP-AAAAAAAAAATACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGT-3'；第三种DNA探针标记为杂交探针3，其核苷酸序列为：5'-GCACCTGGGGGAGTAAAAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3'。2.一种如权利要求1所述自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针的制备方法，其特征在于，取杂交探针1、杂交探针2和杂交探针3在室温环境下涡旋杂交，即完成，该复合纳米探针记为SAPPs。3.一种试剂盒，其特征在于，包括用于捕获目标产物的捕获探针、和如权利要求1所述的自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括目标物捕获载体、化学发光板、化学发光底液、洗涤缓冲液、结合缓冲液。5.一种如权利要求3或4所述试剂盒的应用，其特征在于，应用于外周血中人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞的检测。6.根据权利要求5所述试剂盒的应用，其特征在于，所述捕获探针的核苷酸序列为：5'-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGAAAAAAAAAAA-3'。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：何磊良，邓猛聪，赵梦瑶，沙吉旦·布拉了，高宁振，刘焕，岳帅，汪俊，朱星晨，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41