基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，包括：制备电化学发光探针；将电化学发光探针掺杂到聚合物微球；将检测抗体标记到聚合物微球表面，得到检测抗体和电化学发光探针双重编码聚合物微球；将捕获抗体共价标记到磁微球表面，得到捕获抗体标记的免疫磁微球；将双重编码聚合物微球和免疫磁微球放入待测溶液中，磁分离，再通过溶胀聚合物微球释放电化学探针；采集电化学探针在不同电位下的电化学发光信号，识别检测的抗原。本发明专利技术提供的抗原检测方法改善了单组分电化学发光免疫分析检测时间长、通量低等缺点，实现了多种肿瘤标志物的快速、高通量、高灵敏联合检测，非常适合针对目标肿瘤开发试剂盒，用于肿瘤早期大规模筛查。

Antigen detection method based on potential-resolved Electrochemiluminescence

The invention discloses an antigen detection method based on potential-resolved electrochemiluminescence, which includes: preparing electrochemiluminescence probes; doping electrochemiluminescence probes into polymer microspheres; labeling detection antibodies onto the surface of polymer microspheres to obtain double-coded polymer microspheres with detection antibodies and electrochemiluminescence probes; and covalently labeling capture antibodies onto the surface of magnetic microspheres to obtain capture. Immunomagnetic microspheres labeled with antibodies were prepared, double-coded polymer microspheres and immunomagnetic microspheres were placed in the solution to be tested, magnetic separation was carried out, and then electrochemical probes were released through swelling polymer microspheres. The electrochemiluminescent signals of electrochemical probes at different potentials were collected to identify the detected antigens. The antigen detection method provided by the invention improves the shortcomings of long detection time and low flux of single component electrochemiluminescence immunoassay, realizes rapid, high throughput and high sensitivity joint detection of multiple tumor markers, and is very suitable for developing kits for target tumors and for large-scale early screening of tumors.

【技术实现步骤摘要】
基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法
本专利技术属于肿瘤标志物同时识别与检测领域，尤其涉及基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法。
技术介绍
常规影像学检查在肿瘤早期诊断中捉襟见肘，而组织活检技术对患者侵害性较大，不适于预后判断和疗效监测。肿瘤标志物是肿瘤细胞通过基因表达而合成、分泌，或由机体对肿瘤发生反应而生成的一类物质，在肿瘤早期筛查、预后判断及疗效监测等方面有重要作用。因此，需要发展高灵敏度的免疫传感器用于肿瘤标志物的检测。目前已报道的免疫传感器大多用于单一肿瘤标志物检测。然而，肿瘤标志物并不具备器官特异性，单一肿瘤标志物对于肿瘤细胞异常表现的敏感性或特异性偏低。如癌胚抗原(CEA)在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、宫颈癌等多种癌症中均可检出。寻找针对某一种肿瘤，并具有100％特异性和敏感性的“理想”肿瘤标志物是十分困难的。临床上为了提高肿瘤检测的准确性和可靠性，往往都是检测与目标肿瘤相关的一组标志物，因此，亟待发展多组分免疫分析新方法与新技术。迄今为止，科研人员已结合免疫分析、核酸杂交等生化分析手段，将多种光电分析方法，如荧光分光光度法、化学发光法、电化学发光法、电化学法和光致电化学法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，包括以下步骤：(1)制备电化学发光探针，所述电化学发光探针的材料选自钌金属配合物或铱金属配合物中的一种或两种的组合；(2)将步骤(1)制备的电化学发光探针掺杂到聚合物微球；(3)将检测抗体标记到聚合物微球表面，得到检测抗体和电化学发光探针双重编码聚合物微球；(4)将捕获抗体共价标记到磁微球表面，得到捕获抗体标记的免疫磁微球；(5)将步骤(3)制备的双重编码聚合物微球和免疫磁微球放入待测溶液中，磁分离，再通过溶胀聚合物微球释放电化学探针；(6)采集步骤(5)释放的电化学探针在不同电位下的电化学发光信号，识别检测的抗原。

【技术特征摘要】
1.一种基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，包括以下步骤：(1)制备电化学发光探针，所述电化学发光探针的材料选自钌金属配合物或铱金属配合物中的一种或两种的组合；(2)将步骤(1)制备的电化学发光探针掺杂到聚合物微球；(3)将检测抗体标记到聚合物微球表面，得到检测抗体和电化学发光探针双重编码聚合物微球；(4)将捕获抗体共价标记到磁微球表面，得到捕获抗体标记的免疫磁微球；(5)将步骤(3)制备的双重编码聚合物微球和免疫磁微球放入待测溶液中，磁分离，再通过溶胀聚合物微球释放电化学探针；(6)采集步骤(5)释放的电化学探针在不同电位下的电化学发光信号，识别检测的抗原。2.根据权利要求1所述的基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述的电化学探针的电化学发光波长为491nm到636nm，发光电位位于0.7V至1.75V之间。3.根据权利要求2所述的基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，其特征在于，所述的电化学发光探针的材料选自二(2-(2,4-二氟苯基)-5-三氟甲基吡啶)(4,4′-二叔丁基-2,2′-联吡啶)铱、三(2-苯基吡啶)合铱、二(2-苯基吡啶)(4,4′-二叔丁基-2,2′-联吡啶)铱、二(2-苯基吡啶)(4,4′-二乙烯基苯基-2,2′-联吡啶)、三(2,2′-联吡啶)钌或二(2,2′-联吡啶)(4,4′-二乙烯基苯基-2,2′-联吡啶)钌中的一种或至少两种的组合。4.根据权利要求2所述的基于电位分辨电化学发光的抗原检测方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏彬，郭维亮，丁昊，刘燕欢，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33