一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合及其试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，用于扩增甲状腺髓样癌RET基因突变中的如SEQ ID NO.1所示的序列，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16的组合，本发明专利技术还公开了该引物组合的试剂盒及该引物组合的用途。本发明专利技术的引物组合，特异性强，准确覆盖目标区域片段，检测多种已知突变位点。本发明专利技术采用特异性引物和带有荧光边标记的混合溶液，对批量样本进行PCR扩增，再进行sanger测序分析，一次性可分析大量样本，同时对多个已知和未知突变进行检测，减少操作步骤，节省资源，提高效率。本发明专利技术试剂盒可广泛应用于临床甲状腺髓样瘤的辅助诊断检测，具有广阔的应用前景。

A specific primer combination for identifying RET gene mutations in medullary thyroid carcinoma and its kit and Application

The invention discloses a specific primer combination for rapid identification of RET gene mutation in medullary thyroid cancer. The primer combination is characterized by amplifying the sequence shown in SEQ ID NO.1 in the RET gene mutation of medullary thyroid cancer. The primer combination includes primer RET8, primer RET10, primer RET11, primer RET13, primer RET14, primer RET15 and primer RET16. The invention also discloses a combination of primers. The kit of the primer combination and the use of the primer combination were described. The primer combination of the invention has strong specificity, accurately covers the target region fragment and detects a variety of known mutation sites. The invention uses specific primers and a mixed solution with fluorescent edge markers to amplify batch samples by PCR, and then carries out Sanger sequencing analysis, which can analyze a large number of samples at one time, and detect multiple known and unknown mutations at the same time, so as to reduce operation steps, save resources and improve efficiency. The kit can be widely used in clinical diagnosis and detection of medullary thyroid tumors, and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合及其试剂盒及其用途
本专利技术属于生物
，涉及一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合及其试剂盒及其用途。
技术介绍
甲状腺髓样癌(MTC)是甲状腺恶性肿瘤之一，约占甲状腺癌的2％，MTC包括遗传性MTC和散发性MTC，散发性MTC通常发生在四十到六十岁之间，临床表现不可预测，诊断时的年龄和疾病阶段与预后显著相关。遗传性MTC主要为MEN2，MEN2有两种综合征MEN2A和MEN2B。MEN2A占MEN2病例的95％，有四种变体：经典MEN2A(由统一存在的MTC和不太常见的嗜铬细胞癌(PHEO)或甲旁亢(HPTH)或两者出现)，MEN2A与皮肤苔藓淀粉样变(CLA)，MEN2A与先天性巨结肠病(HD)以及FMTC(具有MTC但不是PHEO和HPTH的具有RET种系突变的家族或个体)。几乎所有MEN2A，MEN2B，FMTC患者都携带RET胚系突变，约50％的散发性MTC患者有RET突变，18％-80％缺乏体细胞RET突变的散发性MTC有HRAS，KRAS或极少NRAS的体细胞突变。散发性MTC中体细胞RET密码子M918T突变似乎预示着进展的临床病程和不良预后。基于甲状腺髓样瘤RET，对于临床的应用指导有实际的意义，能够及时有效的筛查和区分高危人群，辅助疾病的诊断治疗以及预后。目前针对甲状腺髓样瘤风险检测的同类服务项目较少，主要是针对甲状腺结节良恶性判断和分化型甲状腺癌的检测服务，我们依据临床指南中的明确要求，选择甲状腺髓样瘤相关的高风险的位点进行检测分析,弥补市场空白。甲状腺髓样瘤的基因检测包含PCR定量或NGS检测的方法。PCR定量每次可检测突变位点数量较少，同时进行多人多位点检测，工作量巨大；NGS检测价格高昂，检测周期长。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的目的之一在于提供一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合。本专利技术的目的之二在于提供一种包含鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的试剂盒。本专利技术的目的之三在于提供一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的用途。为了实现本专利技术的目的之一，所采用的技术方案是：一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16：引物RET8的序列为：F:TCCCTGTCCTTGGGCACTAGCR:CTTGGGCGTTTCCAGGGCTTA引物RET10的序列为：F:GGGACACTGCCCTGGAAATATR:TGCTGTTGAGACCTCTGTGGG引物RET11的序列为：F:AGCCATGAGGCAGAGCATACGR:TGGGGAGGGCAGGGGATCTTC引物RET13的序列为：F:AAGCCTCAAGCAGCATCGTCTR:GGAAACAGGGCAGGAGCAGTA引物RET14的序列为：F:ACACGAGCAGCAGGAGGCAGAGR:TGGCTGGGTGCAGAGCCATAT引物RET15的序列为：F:GCCTGACGACTCGTGCTATTTR:AAGATTTGGGGTGAGGGCTAT引物RET16的序列为：F:TCTGTGCCCAGGAGTGTCTACAR:GCCATTTGCCTCACGAACA在本专利技术的一个优选实施例中，所述的甲状腺髓样癌RET基因突变包括：外显子8.10.11.13.14.15.16中的G533C,C609F/G/R/S/Y,C611F/G/S/Y/W,C618F/R/S,C620F/R/S,C630R/Y,D631Y,C634F/G/R/S/W/Y,K666E,E768D,L790F,V804L/M,A883F,S891A,R912P,M918T热点突变中的任意一种或多种。为了实现本专利技术的目的之二，所采用的技术方案是：一种包含快速鉴别XX的特异性引物组合的试剂盒，包括如下组成部分：(1)PCR反应预混液，所述PCR反应预混液为qPCRSYBRGreenMasterMix；(2)快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合其中，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16：引物RET8的序列为：F:TCCCTGTCCTTGGGCACTAGCR:CTTGGGCGTTTCCAGGGCTTA引物RET10的序列为：F:GGGACACTGCCCTGGAAATATR:TGCTGTTGAGACCTCTGTGGG引物RET11的序列为：F:AGCCATGAGGCAGAGCATACGR:TGGGGAGGGCAGGGGATCTTC引物RET13的序列为：F:AAGCCTCAAGCAGCATCGTCTR:GGAAACAGGGCAGGAGCAGTA引物RET14的序列为：F:ACACGAGCAGCAGGAGGCAGAGR:TGGCTGGGTGCAGAGCCATAT引物RET15的序列为：F:GCCTGACGACTCGTGCTATTTR:AAGATTTGGGGTGAGGGCTAT引物RET16的序列为：F:TCTGTGCCCAGGAGTGTCTACAR:GCCATTTGCCTCACGAACA为了实现本专利技术的目的之三，所采用的技术方案是：一种鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的用途，所述的甲状腺髓样癌RET基因突变包括外显子8.10.11.13.14.15.16中的G533C,C609F/G/R/S/Y,C611F/G/S/Y/W,C618F/R/S,C620F/R/S,C630R/Y,D631Y,C634F/G/R/S/W/Y,K666E,E768D,L790F,V804L/M,A883F,S891A,R912P,M918T热点突变中的任意一种或多种。本专利技术的有益效果在于：本专利技术的引物组合，特异性强，准确覆盖目标区域片段，检测多种已知突变位点。本专利技术采用特异性引物和带有荧光边标记的混合溶液，对批量样本进行PCR扩增，再进行sanger测序分析，一次性可分析大量样本，同时对多个已知和未知突变进行检测，减少操作步骤，节省资源，提高效率。本专利技术试剂盒可广泛应用于临床甲状腺髓样瘤的辅助诊断检测，具有广阔的应用前景。附图说明图1：引物组合RET11-1产物熔解曲线；图2：引物组合RET16-1产物熔解曲线图3：引物组合RET11-2产物熔解曲线；图4：引物组合RET16-2产物熔解曲线。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但这些实施例不得用于解释对本专利技术的限制。实施例1使用本专利技术的引物检测甲状腺髓样瘤组织样本RET基因突变1材料与方法1.1样本来源通过合作关系收集2017年1月1日到2018年6月30日复旦大学附属肿瘤医院头颈外科甲状腺髓样瘤组织标本25例，进行检测，抽取9例，分别记为样本一～样本九。1.2标本提取甲状腺髓样瘤组织标本液氮冷冻，-80℃冻存，4℃运送至实验室，-80℃保存备用。用天根血液/细胞/组织提取试剂盒(DP304-02)提取样本中的DNA，-20℃保存备用。1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16的组合：引物RET8的序列为：F:TCCCTGTCCTTGGGCACTAGCR:CTTGGGCGTTTCCAGGGCTTA引物RET10的序列为：F:GGGACACTGCCCTGGAAATATR:TGCTGTTGAGACCTCTGTGGG引物RET11的序列为：F:AGCCATGAGGCAGAGCATACGR:TGGGGAGGGCAGGGGATCTTC引物RET13的序列为：F:AAGCCTCAAGCAGCATCGTCTR:GGAAACAGGGCAGGAGCAGTA引物RET14的序列为：F:ACACGAGCAGCAGGAGGCAGAGR:TGGCTGGGTGCAGAGCCATAT引物RET15的序列为：F:GCCTGACGACTCGTGCTATTTR:AAGATTTGGGGTGAGGGCTAT引物RET16的序列为：F:TCTGTGCCCAGGAGTGTCTACAR:GCCATTTGCCTCACGAACA。...

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物RET8、引物RET10、引物RET11、引物RET13、引物RET14、引物RET15、引物RET16的组合：引物RET8的序列为：F:TCCCTGTCCTTGGGCACTAGCR:CTTGGGCGTTTCCAGGGCTTA引物RET10的序列为：F:GGGACACTGCCCTGGAAATATR:TGCTGTTGAGACCTCTGTGGG引物RET11的序列为：F:AGCCATGAGGCAGAGCATACGR:TGGGGAGGGCAGGGGATCTTC引物RET13的序列为：F:AAGCCTCAAGCAGCATCGTCTR:GGAAACAGGGCAGGAGCAGTA引物RET14的序列为：F:ACACGAGCAGCAGGAGGCAGAGR:TGGCTGGGTGCAGAGCCATAT引物RET15的序列为：F:GCCTGACGACTCGTGCTATTTR:AAGATTTGGGGTGAGGGCTAT引物RET16的序列为：F:TCTGTGCCCAGGAGTGTCTACAR:GCCATTTGCCTCACGAACA。2.如权利要求1一种快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合，其特征在于，所述的甲状腺髓样癌RET基因突变包括：外显子8.10.11.13.14.15.16中的G533C,C609F/G/R/S/Y,C611F/G/S/Y/W,C618F/R/S,C620F/R/S,C630R/Y,D631Y,C634F/G/R/S/W/Y,K666E,E768D,L790F,V804L/M,A883F,S891A,R912P,M918T热点突变中的任意一种或多种。3.如权利要求1或2所述的一种包含快速鉴别甲状腺髓样癌RET基因突变的特异性引物组合的试剂盒，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宇清，宣涛，裴婷婷，孙子奎，魏友伯，
申请(专利权)人：上海派森诺医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31