The invention discloses a method for detecting fatty acid content in nematodes by gas chromatography and mass spectrometry, which belongs to the technical field of analytical chemistry. The method consists of the following steps: (1) preparing standard substances, detecting them by gas chromatography-mass spectrometry, and comparing them with mass spectrometry database, obtaining fatty acid components corresponding to different retention times, which are identified as the compounds when similarity is more than 95%; (2) preparing standard mixture, establishing qualitative and quantitative methods for gas chromatography-mass spectrometry by internal standard method; (3) pretreatment line. Insect samples were obtained for analysis; (4) Steps were taken: (2) Gas chromatography and mass spectrometry were established for qualitative and quantitative analysis of the samples to be tested; (5) Calculating and determining the content of fatty acids in nematode samples. The method has the advantages of fast detection speed, low detection limit and high sensitivity. It is suitable for rapid analysis of fatty acid composition and content in nematodes.
【技术实现步骤摘要】
气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法
本专利技术属于分析化学
,特别涉及一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法。
技术介绍
线虫其生命周期相对其他实验动物而言非常短暂便于周期性观察;培养条件非常简单,适于实验室培养;体型小,繁殖量大,保证实验样本的需求;而且它是一种有复杂调控的多细胞真核生物,意味它可能与高等动物有相似的细胞分子结构以及控制通路。因为它这些独特的生物学特性,被广泛应用于生命医学学科研究,是一种优秀的模式生物。线虫体内的多不饱和脂肪酸合成通路结合了植物和动物的过程,与高等动物相比,具有完整的从头合成多不饱和脂肪酸的能力,适合开展游离脂肪酸相关的各类代谢组学研究。通过研究这些物质在线虫体内的作用机理进一步寻找在高等动物上的机制,为以后的深入研究提供准确的实验数据和理论依据。深入开展游离脂肪酸相关的各类代谢组学研究,需要高效的、稳定的、能同时检测多种脂肪酸的分析测定方法。最常用的分析游离脂肪酸的方法有高效液相色谱、近红外以及气相色谱火焰离子化检测器等分析方法。然而,高效液相色谱方法检测游离脂肪酸,利用柱前衍生耗时长,近红外透射光谱技术分析的测定中相关系数都低于80%,结果相对较差,气相色谱火焰离子化检测器检测游离脂肪酸的响应时间长,灵敏度较低。
技术实现思路
本专利技术实施例提供了一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,以解决现有检测分析测定方法耗时长、结果相对较差、响应时间长和灵敏度较低的问题,快速分析线虫中的脂肪酸组成及含量。所述技术方案如下:本专利技术实施例提供了一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中 ...
【技术保护点】
1.一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)配制标准品,用气相色谱、质谱联用方法进行检测,得各脂肪酸的保留时间和GC‑MS图谱,并与质谱数据库进行比对,得到不同保留时间对应的脂肪酸组分;(2)配制标准混合液,用内标法,建立气相色谱、质谱联用定性定量方法,所述定性定量方法是将目标化合物的质谱在质谱库中检索并对比,同时在相同的GC‑MS条件下,待测物中目标脂肪酸与分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性,相似度≥95%时确认为该种化合物,定量方法为内标法;(3)预处理线虫样品,获得分析试样;(4)采用步骤(2)建立气相色谱、质谱联用定性定量方法对待测分析试样进行分析检测,得分析试样各脂肪酸的保留时间和GC‑MS图谱;(5)计算确定线虫样品中各脂肪酸的含量,所述线虫样品中各脂肪酸的含量按下式计算:
【技术特征摘要】
1.一种气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)配制标准品,用气相色谱、质谱联用方法进行检测,得各脂肪酸的保留时间和GC-MS图谱,并与质谱数据库进行比对,得到不同保留时间对应的脂肪酸组分;(2)配制标准混合液,用内标法,建立气相色谱、质谱联用定性定量方法,所述定性定量方法是将目标化合物的质谱在质谱库中检索并对比,同时在相同的GC-MS条件下,待测物中目标脂肪酸与分析标准样品得到的保留时间和质谱对比定性,相似度≥95%时确认为该种化合物,定量方法为内标法;(3)预处理线虫样品,获得分析试样;(4)采用步骤(2)建立气相色谱、质谱联用定性定量方法对待测分析试样进行分析检测,得分析试样各脂肪酸的保留时间和GC-MS图谱;(5)计算确定线虫样品中各脂肪酸的含量,所述线虫样品中各脂肪酸的含量按下式计算:mi:样品中脂肪酸甲酯的含量;As:脂肪酸甲酯标样中内标物的峰面积;Ai:样品中脂肪酸甲酯的峰面积;Asi:样品中内标物的峰面积;Ar:脂肪酸甲酯标样中脂肪酸甲酯的峰面积;mr:脂肪酸甲酯标样中脂肪酸甲酯含量。2.根据权利要求1所述的气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,其特征在于,步骤(1)中所述标准品为棕榈酸甲酯16:0,棕榈油酸甲酯16:1,十八硬酸甲酯18:0,油酸甲酯18:1n9,亚麻油酸甲酯18:2n6,α-亚麻酸甲酯18:3n3,十八碳四烯酸甲酯18:4n3,花生四烯酸甲酯20:4n6,类花生酸甲酯20:5n3。3.根据权利要求1所述的气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,其特征在于,所述内标法选用的内标物为十五碳烷酸甲酯C15:0。4.根据权利要求1所述的气相色谱、质谱联用技术检测线虫中脂肪酸含量的方法,其特征在于,步骤(2)中所述标准混合液配制:分别取步骤(1)中脂肪酸甲酯标准品,用正己烷配制成9种100μg/mL的标准储备液,将所述9种标准储备液用所述正己烷配制成10μg/mL的9种脂肪酸甲酯标准混合液,并用正己烷逐级稀释,得到质量浓度梯度为...
【专利技术属性】
技术研发人员:周珍,黄子纯,梁勇,蒋琳,
申请(专利权)人:江汉大学,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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