一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法技术

本发明专利技术提供一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，包括收集奥氮平治疗的慢性精神分裂症患者血浆与奥氮平合并阿立派唑治疗的慢性精神分裂症患者血浆样本，处理后经色谱柱分离，并采用质谱检测分析，再进行LC/MS检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据。对数据进行分析得到代谢组轮廓，建立双重交叉验证筛选模型，筛选单独用奥氮平和奥氮平合并阿立派唑治疗患者的脂质差异特异性标记物。

A method of plasma metabonomics analysis based on aripiprazole to improve olanzapine in schizophrenic patients with abnormal lipid metabolism

The present invention provides a plasma metabonomics analysis method based on aripiprazole to improve the lipid metabolism of schizophrenic patients treated with olanzapine, including collecting plasma samples of chronic schizophrenic patients treated with olanzapine and chronic schizophrenic patients treated with aripiprazole, separating them after treatment by chromatographic column, detecting and analyzing them by mass spectrometry, and then LC/M. After S detection and analysis, the original data of the instrument are extracted and aligned to obtain the data without noise interference, which can be used for statistical analysis. The profiles of metabolites were obtained by analyzing the data, and a double cross validation screening model was established to screen specific markers of lipid differences in patients treated with olanzapine and olanzapine alone combined with aripiprazole.

【技术实现步骤摘要】
一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法
本专利技术涉及分析化学
，具体涉及一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法。
技术介绍
二代抗精神分裂症药物治疗精神分裂症常伴发脂代谢异常，出现肥胖甚至其他雌激素样副作用，如泌乳、喉结变小、ED等，因而降低患者的用药依从性和生活质量。过度的体重增加可能增加心血管疾病和糖尿病相关的致病率和死亡率，增加精神分裂症患代谢综合征的风险。奥氮平是目前最常用的二代抗精神分裂症药物，其副作用尤甚。阿立派唑作为治疗精神分裂症的主要用药之一，临床中，与奥氮平合并使用，可在很大程度上改善单独使用奥氮平治疗精神分裂症所致脂代谢异常，不仅减轻患者的痛苦，也增加了患者用药的依从性。代谢组学是一种高灵敏度，高通量分析方法，可用于研究病理生理状态下低分子量代谢物的特征变化。脂质组学是代谢组学的一个重要分支，旨在详细分析脂质物种及其在生物体系中的多重作用。超高效液相色谱-质谱(LC/MS)联用技术作为脂质组学分析中广泛采用的技术之一，具有高分离度、高速度和高灵敏度的特点。本技术方法与已有专利，申请号201310568472.2、申请公布号CN103592389A，相近似，但不完全一致，之前技术方法使用血清而非血浆作为检测样本：血浆正负离子总量相等，保持电中性，离子水平波动对生物代谢影响显著，同时血浆的理化特性相对恒定是内环境稳态的首要表现，二者表明使用血浆对代谢组学检测意义更大；精神分裂症罹患人群不断增加，此前类似专利并未检索到，因此使用新技术与新型样本开发此类技术方法，具有重要意义。技术方案本专利技术提供的基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，可以综合地体现奥氮平合并阿立派唑治疗慢性精神分裂症患者代谢产物的变异状况，可用于单独使用奥氮平、合并阿立派唑治疗慢性精神分裂症患者改善代谢综合征的早期预测和预后提供有利的技术支持。基于此，本专利技术提供一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，具体包括：第一步，样品制备；第二步，超高效液相色谱-质谱检测分析；第三步，数据分析获得差异性代谢物，进行鉴定和验证。所述第一步进一步具体为收集单用奥氮平及合用阿立哌唑精神分裂症患者的血浆样本，经处理后用于进行超高效液相色谱-质谱检测分析，所述血浆样品的处理方法为：将100μl血浆与900μl丙二醇混合，涡旋超过10秒后超声处理10分钟，混合物-20℃冻存1小时，然后在9500g的离心力的作用下离心10分钟，收集上层(800μl)，即为样品。所述第二步中的超高效液相色谱-质谱检测分析中的流动相A采用乙腈和水的混合溶液做溶剂，两者体积比为95：5，该流动相A中含有0.1％甲酸和10mM甲酸铵，流动相B采用丙二醇和乙腈按照体积比9∶1获得的混合溶液做溶剂，该流动相含有0.1％甲酸和10mM甲酸铵。所述第三步进一步具体为在进行检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据。采用正交偏最小二乘判别分析(0PLS-DA)和独立样本T检验对数据进行分析，其中OPLS-DA按照OPLS的VIP值挖掘差异代谢物，根据独立样本T检验与VIP值分别挖掘，各挖掘出一组差异代谢物，共得到2组差异脂质分子，通过交叉比较，得到共有差异脂质分子。再对共有脂质分子与患者奥氮平、阿立派唑药物浓度和生化指标(ALT、AST、GGT、TC、TG、LDL)做相关分析，通过分析相关性结果与临床症状的病理吻合性进行验证，得到代谢异常预测脂质分子。有益的效果以往研究中，常采用交叉验证方法建立代谢物筛选模型，特点是将样本的代谢组数据分为两个部分，其中一部分用来建立模型，另一部分用来评价模型的预测能力，根据预测能力的好坏选择模型参数，从而确定最终模型。但是这种建模方法存在一定缺陷：判别模型预测能力的不是独立样本。因为在建模过程中所有样本都会被用来建立模型，所以该过程存在一定程度的非独立性，干扰了模型预测能力的判别和模型预测误差的估计。缺乏完全独立性的建模科导致过拟合的可能，这样的模型不能真实有效地反映代谢组数据的信息，从而对标记物的筛选出现偏差。本专利技术抽取交叉验证的优异特点，采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和独立样本T检验对数据分析结果进行交叉比对，避免交叉验证方法非独立性的缺点，将其应用于阿立派唑合并奥氮平治疗对脂代谢异常有较大改善作用的脂质代谢标记物的研究中，通过与患者奥氮平、阿立派唑药物浓度和生化指标(ALT、AST、GGT、TC、TG、LDL)的相关分析确认并验证差异脂质代谢物，从而在全面、综合地考察阿立派唑合并奥氮平治疗对脂代谢异常有较大改善作用的脂质代谢相关标记物的同时，实现标记物的合理筛选。本方法对合用阿立派唑治疗慢性精神分裂症患者改善代谢综合征的早期预测和预后提供有利的技术支持。附图图1采用本专利技术提供的阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法流程图。具体实施方式本专利技术提供一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，包括收集奥氮平治疗的慢性精神分裂症患者血浆与奥氮平合并阿立派唑治疗的慢性精神分裂症患者血浆样本，处理后经色谱柱分离，并采用质谱检测分析，再进行LC/MS检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据。对数据进行分析得到代谢组轮廓，建立双重交叉验证筛选模型，筛选单独用奥氮平和奥氮平合并阿立派唑治疗患者的脂质差异特异性标记物。该方法具体包括：第一步，样品制备；第二步，超高效液相色谱-质谱检测分析；第三步，数据分析获得差异性代谢物，进行鉴定和验证。所述第一步进一步具体为收集单用奥氮平及合用阿立哌唑精神分裂症患者的血浆样本，经处理后用于进行超高效液相色谱-质谱检测分析，所述血浆样品的处理方法为：将100μl血浆与900μl丙二醇混合，涡旋超过10秒后超声处理10分钟，混合物-20℃冻存1小时，然后在9500g的离心力的作用下离心10分钟，收集上层(800μl)，即为样品。在每5个样品中放置空白样品和质量控制样品，所述空白样品为丙二醇与水按照体积比9∶1配合获得，质量控制样品通过合并所有血浆样品按照等分后配置成与空白样品相同体积获得。所述第二步中的超高效液相色谱-质谱检测分析中的流动相A采用乙腈和水的混合溶液做溶剂，两者体积比为95∶5，含有0.1％甲酸和10mM甲酸铵，流动相B采用丙二醇和乙腈按照体积比9∶1获得的混合溶液做溶剂，含有0.1％甲酸和10mM甲酸铵。所述第三步进一步具体为在进行检测分析后提取并对齐仪器原始数据，获得无噪音干扰、可用于统计分析的数据。采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和独立样本T检验对数据进行分析，其中OPLS-DA按照OPLS的VIP值挖掘差异代谢物，根据独立样本T检验与VIP值分别挖掘，各挖掘出一组差异代谢物，共得到2组差异脂质分子，通过交叉比较，得到共有差异脂质分子。再对共有脂质分子与患者奥氮平、阿立派唑药物浓度和生化指标(ALT、AST、GGT、TC、TG、LDL)做相关分析，通过分析相关性结果与临床症状的病理吻合性进行验证，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，其特征在于，包括：第一步，样品制备；第二步，超高效液相色谱‑质谱检测分析；第三步，数据分析获得差异性代谢物，进行鉴定和验证。

【技术特征摘要】
1.一种基于阿立派唑改善奥氮平治疗精神分裂症致脂代谢异常病人血浆代谢组学分析方法，其特征在于，包括：第一步，样品制备；第二步，超高效液相色谱-质谱检测分析；第三步，数据分析获得差异性代谢物，进行鉴定和验证。2.如权利要求1所述的代谢组学分析方法，其特征在于：所述第一步进一步具体为收集单用奥氮平及合用阿立哌唑精神分裂症患者的血浆样本，经处理后用于进行超高效液相色谱-质谱检测分析，所述血浆样品的处理方法为：将100μl血浆与900μl丙二醇混合，涡旋超过10秒后超声处理10分钟，混合物-20℃冻存1小时，然后在9500g的离心力的作用下离心10分钟，收集上层，即为样品。3.如权利要求1或2所述的代谢组学分析方法，其特征在于：所述第二步中的超高效液相色谱-质谱检测分析中的流动相A采用乙腈和水的混合溶液做溶剂，两者体积比为95∶5，该流动相...

【专利技术属性】
技术研发人员：王帆，李慧，康毅敏，刘彦隆，
申请(专利权)人：新疆医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：新疆,65