测定乳品中左旋咪唑的方法技术

本发明专利技术提出了检测乳品中左旋咪唑的方法。所述方法包括：将乳品、三氯乙酸溶液与乙腈进行混合处理，以便得到混合液；所述混合液进行固相萃取处理，以便得到洗脱液；以及将所述洗脱液进行色谱检测，并基于检测结果确定所述乳品中左旋咪唑含量。利用本发明专利技术的方法能够准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。

Determination of Levamisole in Dairy Products

The invention provides a method for detecting levamisole in dairy products. The method includes: mixing dairy products, trichloroacetic acid solution and acetonitrile to obtain mixed solution; solid phase extraction to obtain eluent; and chromatographic detection of the eluent, and determination of levamisole content in the dairy products based on the test results. The method of the invention can accurately detect levamisole in dairy products, and has high recovery rate, high precision, high sensitivity and simple operation.

【技术实现步骤摘要】
测定乳品中左旋咪唑的方法
本专利技术涉及食品领域。具体地，本专利技术涉及检测乳品中左旋咪唑的方法。
技术介绍
左旋咪唑(levamisole)，化学名称为盐酸左旋咪唑，中文别名为(S)-6-苯基-2,3,5,6-四氢-咪唑[2,1-B]噻唑单盐酸盐、L-2,3,5,6-四氢-6-苯基咪唑[2,1-6]噻唑盐酸盐，分子式为C11H12N2S，相对分子量为204.29，CAS16595-80-5。主要用于治疗畜禽胃肠道线虫和胃线虫等，不合理地使用左旋咪唑会造成动物生产中残留，残留的左旋咪唑对人体的主要潜在危害是致畸和致突变。然而，目前检测左旋咪唑的方法仍待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提出了检测乳品中左旋咪唑的方法。利用本专利技术的方法能够准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：目前，适用于提取乳品中左旋咪唑的溶剂较多，针对不同溶剂，所起到的效果不尽相同。有些溶剂在提取左旋咪唑的同时，会使样品乳化，无法充分提取包埋在蛋白质和脂肪中的左旋咪唑，使得检测结果偏低，例如乙酸乙酯。另外，有些溶剂在提取左旋咪唑的同时，夹带少量蛋白质、脂肪等杂质，对后续结果产生干扰且不利于色谱柱的长期使用，例如丙酮。有鉴于此，专利技术人经过大量实验发现，采用乙腈作为提取剂，不仅能够提取出乳品中的左旋咪唑，还可以使得乳品中蛋白质的构象发生改变，使之沉淀聚集，避免了乳品中的蛋白质对结果的干扰。进一步地，专利技术人发现，由于乳品中蛋白质含量较高，若仅采用乙腈作为提取剂，无法完全沉淀蛋白，仍有少量蛋白存留在提取的上清液中，对后续检测造成干扰，使得检测结果准确性较低。专利技术人经过深入研究发现，将乙腈与三氯乙酸结合使用，三氯乙酸能够进一步沉淀蛋白，且为后续萃取提供酸性条件，无需额外添加酸性物质，使得操作简便，效率高。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。为此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种测定乳品中左旋咪唑的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将所述乳品、三氯乙酸溶液与乙腈进行混合处理，以便得到混合液；将所述混合液进行固相萃取处理，以便得到洗脱液；以及将所述洗脱液进行色谱检测。专利技术人发现，采用乙腈作为提取剂，不仅能够提取出乳品中的左旋咪唑，还可以使得乳品中蛋白质的构象发生改变，使之沉淀聚集，避免了乳品中的蛋白质对结果的干扰。进一步地，专利技术人发现，由于乳品中蛋白质含量较高，若仅采用乙腈作为提取剂，无法完全沉淀蛋白，仍有少量蛋白存留在提取的上清液中，对后续检测造成干扰，使得检测结果准确性较低。专利技术人经过深入研究发现，将乙腈与三氯乙酸结合使用，三氯乙酸能够进一步沉淀蛋白，且为后续萃取提供酸性条件，无需额外添加酸性物质，使得操作简便，效率高。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，上述检测乳品中左旋咪唑的方法还可以进一步具有下列附加的技术特征：根据本专利技术的实施例，基于1克所述乳品，所述三氯乙酸溶液的体积为8～10毫升乙腈为1～3毫升。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，所述三氯乙酸溶液的浓度为0.1体积％。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，所述混合处理包括：将所述乳品与三氯乙酸溶液进行第一混合处理，以便得到第一混合液；将所述第一混合液与乙腈进行第二混合处理，以便得到第二混合液；将所述第二混合液依次进行超声及震荡处理，以便得到所述混合液。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，所述离心处理是在10000rpm的转速下进行10分钟。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，在进行所述固相萃取处理之前，进一步包括：将所述混合液进行离心处理，收集上清液；以及将所述上清液进行第一过滤处理，以便得到第一过滤液。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，在进行所述色谱检测之前，预先包括：将所述洗脱液进行干燥处理，并用乙腈-水溶液将所得到的产物进行溶解处理，得到溶解液；以及将所述溶解液进行第二过滤处理，以便得到第二过滤液，优选地，所述第二过滤处理是采用0.22微米的过滤膜进行的。由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。根据本专利技术的实施例，采用液相色谱-串联质谱对所述洗脱液进行检测，所述液相色谱-串联质谱的检测条件如下：离子源控制条件：电离方式：电喷雾电离，正离子；毛细管电压：3.0kV；锥孔电压：39V；离子源温度：120℃；锥孔反吹气流量：50L/h；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：500L/h；电子倍增电压：650V；扫描方式：多离子反应监测；离子选择参数：母离子205.1，子离子99.70和177.80，碰撞能量是36和21，驻留时间是0.05min，液相色谱条件：流动相流动速度：0.2mL/min；色谱柱柱温：35℃；试液温度：4℃；进样体积：10μL；流动相：A相，0.1％甲酸溶液；B相，乙腈溶液；梯度洗脱：由此，利用根据本专利技术实施例的检测乳品中左旋咪唑的方法能够进一步准确地对乳品中左旋咪唑进行检测，且回收率高、精密度高、灵敏度高、操作简便。在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种测定奶粉中左旋咪唑的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：称取样品1.0克，加入8毫升三氯乙酸溶液(浓度为0.1体积％)，涡旋震荡1分钟，再加入2毫升乙腈，涡旋震荡1分钟，超声20分钟，涡旋震荡10分钟，在10000rpm下离心10分钟，收集上清液；采用预先经过三氯乙酸溶液润洗的定量滤纸对所述上清液进行过滤，再用三氯乙酸溶液洗涤所述定量滤纸，收集滤液；将所述滤液加入到预先经3毫升甲醇、3毫升水和3毫升0.2mol/mL盐酸活化的MCX固相萃取小柱，上样完毕后，依次用3毫升水、1毫升0.2mol/mL盐酸和3毫升甲醇淋洗，用氨化甲醇4.0毫升洗脱，收集洗脱液；用氮气吹干所述洗脱液，用乙腈-水溶液(乙腈与水的体积比为3：17)定容至1毫升，过0.22μm有机滤膜，得到待测液；利用液相色谱-串联质谱分别测定所述待测液和不同浓度左旋咪唑标准工作液，并基于测定结果确定所述奶粉中左旋咪唑含量，其中，离子源控制条件：电离方式：电喷雾电离，正离子；毛细管电压：3.0kV；锥孔电本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定奶粉中左旋咪唑的方法，其特征在于，包括：称取样品1.0克，加入8毫升三氯乙酸溶液(浓度为0.1体积％)，涡旋震荡1分钟，再加入2毫升乙腈，涡旋震荡1分钟，超声20分钟，涡旋震荡10分钟，在10000rpm下离心10分钟，收集上清液；采用预先经过三氯乙酸溶液润洗的定量滤纸对所述上清液进行过滤，再用三氯乙酸溶液洗涤所述定量滤纸，收集滤液；将所述滤液加入到预先经3毫升甲醇、3毫升水和3毫升0.2mol/mL盐酸活化的MCX固相萃取小柱，上样完毕后，依次用3毫升水、1毫升0.2mol/mL盐酸和3毫升甲醇淋洗，用氨化甲醇4.0毫升洗脱，收集洗脱液；用氮气吹干所述洗脱液，用乙腈‑水溶液(乙腈与水的体积比为3：17)定容至1毫升，过0.22μm有机滤膜，得到待测液；利用液相色谱‑串联质谱分别测定所述待测液和不同浓度左旋咪唑标准工作液，并基于测定结果确定所述奶粉中左旋咪唑含量，其中，离子源控制条件：电离方式：电喷雾电离，正离子；毛细管电压：3.0kV；锥孔电压：39V；离子源温度：120℃；锥孔反吹气流量：50L/h；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：500L/h；电子倍增电压：650V；扫描方式：多离子反应监测；离子选择参数：母离子205.1，子离子99.70和177.80，碰撞能量是36和21，驻留时间是0.05min，液相色谱条件：流动相流动速度：0.2mL/min；色谱柱柱温：35℃；试液温度：4℃；进样体积：10μL；流动相：A相，0.1％甲酸溶液；B相，乙腈溶液；梯度洗脱：...

【技术特征摘要】
1.一种测定奶粉中左旋咪唑的方法，其特征在于，包括：称取样品1.0克，加入8毫升三氯乙酸溶液(浓度为0.1体积％)，涡旋震荡1分钟，再加入2毫升乙腈，涡旋震荡1分钟，超声20分钟，涡旋震荡10分钟，在10000rpm下离心10分钟，收集上清液；采用预先经过三氯乙酸溶液润洗的定量滤纸对所述上清液进行过滤，再用三氯乙酸溶液洗涤所述定量滤纸，收集滤液；将所述滤液加入到预先经3毫升甲醇、3毫升水和3毫升0.2mol/mL盐酸活化的MCX固相萃取小柱，上样完毕后，依次用3毫升水、1毫升0.2mol/mL盐酸和3毫升甲醇淋洗，用氨化甲醇4.0毫升洗脱，收集洗脱液；用氮气吹干所述洗脱液，用乙腈-水溶液(乙腈与水的体积比为3：17)定容至1毫升，过0.22μm有机滤膜，得到待测液；利用液相色谱-串联质谱分别测定所述待测液和不同浓度左旋咪唑标准工作液，并基于测定结果确定所述奶粉中左旋咪唑含量，其中，离子源控制条件：电离方式：电喷雾电离，正离子；毛细管电压：3.0kV；锥孔电压：39V；离子源温度：120℃；锥孔反吹气流量：50L/h；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：500L/h；电子倍增电压：650V；扫描方式：多离子反应监测；离子选择参数：母离子205.1，子离子99.70和177.80，碰撞能量是36和21，驻留时间是0.05min，液相色谱条件：流动相流动速度：0.2mL/min；色谱柱柱温：35℃；试液温度：4℃；进样体积：10μL；流动相：A相，0.1％甲酸溶液；B相，乙腈溶液；梯度洗脱：2.一种测定乳品中左旋咪唑的方法，其特征在于，包括，将所述乳品、三氯乙酸溶液与乙腈进行混合处理，以便得到混合液；将所述混合液进行固相萃取处理，以便得到洗脱液；以及将所述洗脱液进行色谱检测。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，基于1克所述乳品，所述三氯乙酸溶液的体积为8～10毫升，乙腈为1～3毫升。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：李照，常建军，宋晓东，郭波，刘娜，徐向峰，袁凤琴，任丽，赵媛，解鑫，薛志清，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15