检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测替格瑞洛中(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺的方法，它包括了以下步骤：a、取(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺(R)‑扁桃酸盐，制备对照品溶液，用液相色谱‑质谱联用(LC‑MS)法进行检测；b、取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液，用LC‑MS法进行检测；c、计算替格瑞洛样品中的(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺含量。本发明专利技术LC‑MS方法，通过特定的质核比(m/z)进行定性及定量，其他杂质不干扰(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺的检测。

DETERMINATION OF (1R, 2S) -2-(3,4-DIFLUOROPHENYL) CYCLOPROLAMINE IN TEGRELLO

The invention discloses a method for detecting (1R, 2S) 2 (3,4 difluorophenyl) Cyclopropylamine (1R, 2S) 2 2 (3,4 difluorophenyl) Cyclopropylamine (R) mandelite in teglilolo, which comprises the following steps: a, taking (1R, 2S) 2 (3,4 difluorophenyl) Cyclopropylamine (R) mandelinatate, preparing reference solution, using liquid chromatography mass spectrometry (LC MS) method for detection; b, B M C. Calculate the content of (1R, 2S) 2 (3,4 difluorophenyl) Cyclopropylamine in Tigrillo samples. The LC MS method of the present invention can qualitatively and quantitatively determine Cyclopropylamine by specific mass-nucleus ratio (m/z), and other impurities do not interfere with the detection of Cyclopropylamine (1R, 2S) 2 (3,4 difluorophenyl).

【技术实现步骤摘要】
检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种替格瑞洛基因毒性杂质(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的含量检测方法。
技术介绍
替格瑞洛，通用名称：替格瑞洛；英文名称：Ticagrelor；汉语拼音：Tigeruiluo；化学名称为：(1S,2S,3R,5S)-3-[7-[[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙硫基)-3H-1,2,3-三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羟基乙氧基)-1,2-环戊二醇。替格瑞洛是由英国阿斯利康公司研制开发的一种新的治疗急性冠状动脉综合征的药物，2011年美国FDA批准上市。其是选择性P2Y12受体抑制剂，通过抑制新血凝块的形成，帮助患者降低动脉粥样化血栓形成事件的发生。急性冠状动脉综合征(ACS)已成为威胁人类健康的疾病。血小板受体拮抗剂作为抗血小板聚集药，在ACS的治疗过程中发挥了重要的作用。因此，替格瑞洛与氯吡格雷虽同为血小板抑制剂，但替格瑞洛临床试验表明安全性和有效性都更优，具有替代氯吡格雷的潜力，所以市场潜力巨大，应用前景广阔。目前,替格瑞洛主要通过以下路线合成：式中，R1为F、Br、I、OH或OA，其中A为羟基活化基。其中，式Ⅴ所示的化合物为(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(R)-扁桃酸盐，是合成替格瑞洛的起始原料。由于受到工艺技术和控制水平的限制，生产得到的替格瑞洛产品中，很容易存在有未反应的作为杂质存在的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺。(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺具有致癌性警示结构，根据ICHQ3A(R2)、M7以及文献1(文献1：RomualdoBenigni,CeciliaBossa,OlgaTcheremenskaia.Developmentofstructuralalertsfortheinvivomicronucleusassayinrodents[J].JRCScientificandTechnicalReports,24.)，文献2(文献2：替格瑞洛片(JXHL1000319、320)国际多中心临床试验申请药学审评报告.)中明确提到该物质为基因毒性杂质，需要将替格瑞洛中的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的含量控制在7ppm以内，保证每日总摄入量不超过1.5μg；因而，十分有必要对替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺含量进行监控。CN105424822A报道了采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，B为乙腈，梯度洗脱的方法，为解决分离检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺提供一种思路，但该方法采用较低的检测波长(210nm)、梯度洗脱、较高的供试品溶液浓度(10mg/ml)、采用保留时间定性等必将导致专属性不强，结果重现性差等问题。本专利技术提供了一种新的液相色谱-质谱联用(LC-MS)的检测方法，用于检测替格瑞洛中的基因毒性杂质(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺，该方法专属性强，灵敏度高，为检测该基因毒性杂质含量提供了一种行之有效的方法，进一步保证了替格瑞洛的产品质量和患者的用药安全。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法。本专利技术提供的一种检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法，包括以下步骤：a、取(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(R)-扁桃酸盐，制备对照品溶液，用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法进行检测；b、取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液，用LC-MS法进行检测；c、计算替格瑞洛样品中的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺含量；步骤a和b所用LC-MS的检测条件为：色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为40℃；以甲酸溶液(1→1000)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；质谱条件为：采用电喷雾电离正离子模式，ESI+。进一步的，步骤a中，制备对照品溶液的溶剂为流动相A-乙腈；步骤b中，制备供试品溶液的溶剂为流动相A-乙腈。进一步的，所述的流动相A-乙腈中，流动相A与乙腈的体积比为90:10。进一步的，所述的色谱条件中，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱为WatersXBridgeShieldRP18柱，长度为150mm，内径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。进一步的，所述的色谱条件中，梯度程序中0-10分钟流动相B的比例为5％～20％；优选的，流动相B的比例为10％。进一步的，所述的质谱条件中，采用电喷雾电离正离子模式，选择离子检测(SIM)，定量离子(m/z)为170和/或153。进一步的，所述的质谱条件中，采用电喷雾电离正离子模式，ESI+，离子源接口电压为4.5kV；雾化气(氮气)流速为每分钟1.5L；干燥气(氮气)流速为每分钟15L；脱溶剂管温度为350℃；加热块温度为200℃；选择离子检测(SIM)，定量离子(m/z)为170和/或153；待(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺峰洗脱完毕后将流路切换至废液。在某些实施方案中，本专利技术提供的一种检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法，包括以下步骤：a、取(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(R)-扁桃酸盐，制备对照品溶液，用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法进行检测；b、取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液，用LC-MS法进行检测；c、计算替格瑞洛样品中的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺含量；步骤a和b所用LC-MS的检测条件为：照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为40℃；以甲酸溶液(1→1000)为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；照质谱法(中国药典2015年版四部通则0431)测定，采用电喷雾电离正离子模式，ESI+；离子源接口电压为4.5kV；雾化气(氮气)流速为每分钟1.5L；干燥气(氮气)流速为每分钟15L；脱溶剂管温度为350℃；加热块温度为200℃；选择离子检测(SIM)，定量离子(m/z)为170和/或153；待(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺峰洗脱完毕后将流路切换至废液；进一步的，所述的检测方法，用于(1S,2R)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的检测。本专利技术提供了一种检测替格瑞洛中(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的液相色谱-质谱联用(LC-MS)的检测方法，通过特定的质核比(m/z)进行定性，其他杂质不干扰(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的检测；同时，本专利技术方法具有良好的专属性、线性关系、精密度、灵敏度和重复性，加样回收率高，检测结果准确、可靠，为监控替格瑞洛药物中的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺含量提供了一种行之有效的检测方法，进一步保证了替格瑞洛药物的用药安全。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测替格瑞洛中((1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺的方法，其特征在于：包括以下步骤：a、取(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺(R)‑扁桃酸盐，制备对照品溶液，用液相色谱‑质谱联用(LC‑MS)法进行检测；b、取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液，用LC‑MS法进行检测；c、计算替格瑞洛样品中的(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺含量；步骤a和b所用LC‑MS的检测条件为：色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为40℃；以甲酸溶液(1→1000)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；质谱条件为：采用电喷雾电离正离子模式，ESI+。

【技术特征摘要】
1.一种检测替格瑞洛中((1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺的方法，其特征在于：包括以下步骤：a、取(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺(R)-扁桃酸盐，制备对照品溶液，用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法进行检测；b、取待检的替格瑞洛样品，制备供试品溶液，用LC-MS法进行检测；c、计算替格瑞洛样品中的(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺含量；步骤a和b所用LC-MS的检测条件为：色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为40℃；以甲酸溶液(1→1000)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；质谱条件为：采用电喷雾电离正离子模式，ESI+。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤a中，制备对照品溶液的溶剂为流动相A-乙腈；步骤b中，制备供试品溶液的溶剂为流动相A-乙腈。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于：所述的流动相A-乙腈中，流动相A与乙腈的体积比为90:10。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述的色谱条件中，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱为WatersXBridgeS...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡登稳，任东，刘波，余泉毅，曾兴蓉，刘芳，邓鹂，
申请(专利权)人：四川海思科制药有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51