一种过氧化氢酶纯净化提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种过氧化氢酶纯净化提纯方法，属于酶制品相关技术领域，所述的过氧化氢酶纯净化提纯方法包括如下步骤：步骤一，试剂与主要仪器的准备；步骤二，培养改性大肠杆菌；步骤三，粗酶液制备；步骤四，热处理去除杂质；步骤五，硫酸铵分级沉淀；步骤六，离子交换层析；步骤七，疏水作用层析；步骤八，凝胶层析；本发明专利技术详细介绍了在改性大肠杆菌中纯净提纯过氧化氢酶的方法，解决了现有技术中在动物肝脏中提取过氧化氢酶时纯化难度增加，产品纯度不高，酶活不稳定，得率低且生产周期长的技术问题，在酶制品相关技术领域具有广阔的应用前景。

A Purification and Purification Method of Catalase

The invention discloses a purification method of catalase, which belongs to the related technical field of enzyme products. The purification method of catalase includes the following steps: step 1, preparation of reagents and main instruments; step 2, cultivation of modified Escherichia coli; step 3, preparation of crude enzyme solution; step 4, removal of impurities by heat treatment; step 5, ammonium sulfate fractional precipitation. Step six, ion exchange chromatography; step seven, hydrophobic interaction chromatography; step eight, gel chromatography; the invention introduces in detail the method of purifying catalase in the modified Escherichia coli, and solves the technical problems in the existing technology that the extraction of catalase in animal liver is difficult to increase, the purity of the product is not high, the enzyme activity is unstable, the yield is low, and the production cycle is long. It has broad application prospects in the related technical fields of enzymatic products.

【技术实现步骤摘要】
一种过氧化氢酶纯净化提纯方法
本专利技术涉及酶制品相关
，具体是一种过氧化氢酶纯净化提纯方法。
技术介绍
过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。现有技术中的过氧化氢酶的提取主要在动物肝脏中提取，由于现有技术对过氧化氢酶提取的相关技术不够成熟，导致后续步骤中对过氧化氢酶的纯化难度增加，产品纯度不高，酶活不稳定，得率低且生产周期长；因此，本专利技术提供一种过氧化氢酶纯净化提纯方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种过氧化氢酶纯净化提纯方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种过氧化氢酶纯净化提纯方法，包括如下步骤：步骤一，试剂与主要仪器的准备；步骤二，培养改性大肠杆菌；步骤三，粗酶液制备；步骤四，热处理去除杂质；步骤五，硫酸铵分级沉淀；步骤六，离子交换层析；步骤七本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种过氧化氢酶纯净化提纯方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，试剂与主要仪器的准备；步骤二，培养改性大肠杆菌；步骤三，粗酶液制备；步骤四，热处理去除杂质；步骤五，硫酸铵分级沉淀；步骤六，离子交换层析；步骤七，疏水作用层析；步骤八，凝胶层析；所述步骤一中准备的主要仪器包括有：超声波细胞破碎仪、高速冷冻离心机、层析仪和凝胶图像分析仪，准备的试剂包括有：脱氧核糖核酸酶、苯酚盐、异丙基硫代半乳糖苷和凝胶过滤柱；所述步骤二的具体实施过程为：挑取一环大肠杆菌接入盛有LB培养基的三角瓶中培养，其中，LB培养基为30mL，三角瓶容量为100 mL，培养温度为32℃，培养转速为180rpm，培养时间为20...

【技术特征摘要】
1.一种过氧化氢酶纯净化提纯方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，试剂与主要仪器的准备；步骤二，培养改性大肠杆菌；步骤三，粗酶液制备；步骤四，热处理去除杂质；步骤五，硫酸铵分级沉淀；步骤六，离子交换层析；步骤七，疏水作用层析；步骤八，凝胶层析；所述步骤一中准备的主要仪器包括有：超声波细胞破碎仪、高速冷冻离心机、层析仪和凝胶图像分析仪，准备的试剂包括有：脱氧核糖核酸酶、苯酚盐、异丙基硫代半乳糖苷和凝胶过滤柱；所述步骤二的具体实施过程为：挑取一环大肠杆菌接入盛有LB培养基的三角瓶中培养，其中，LB培养基为30mL，三角瓶容量为100mL，培养温度为32℃，培养转速为180rpm，培养时间为20h；所述步骤三的具体实施过程为：将步骤二中得到的改性大肠杆菌菌液置于高速冷冻离心机中第一次离心，然后重悬于磷酸钠-磷酸钾缓冲液中，用超声波细胞破碎仪破碎处理，最后置于高速冷冻离心机中第二次离心，第二次离心后去除菌体碎片得到粗酶液；所述步骤四的具体实施过程为：向步骤三中得到的粗酶液中加入脱氧核糖核酸酶，然后进行热处理，热处理过后置于高速冷冻离心机中离心，离心过后收集上清液A；所述步骤五的具体实施过程为：向步骤四中得到的上清液A中第一次加入硫酸铵，离心去除沉淀后得到上清液B，在上清液B中第二次加入硫酸铵，离心收集沉淀；所述步骤六的具体实施过程为：将步骤五中得到的沉淀物置于磷酸钠-磷酸钾缓冲液中溶解，25℃温度下按照沉淀物与磷酸钠-磷酸钾缓冲液1:80的体积比进行透析脱盐，得到脱盐后酶液，脱盐后酶液用聚乙二醇8000浓缩得到浓缩后酶液，将浓缩后酶液加样到玻璃层析柱上，并用含氯化钠的磷酸钠-磷酸钾缓冲液洗脱得到洗脱后酶液；所述步骤七的具体实施过程为：将步骤六中得到的洗脱后酶液与磷酸钠-磷酸钾缓冲液按照体积比1:1的比例混合后加样到苯酚盐层析柱上，用磷酸钠-磷酸钾缓冲液洗脱后收集活性组份并浓缩得到浓缩产物；所述步骤八的具体实施过程为：将步骤七中得到的浓缩产物加样...

【专利技术属性】
技术研发人员：任全亮，
申请(专利权)人：枣庄全鼎生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37