一种脱卤过氧化物酶及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于人工金属酶领域，公开了一种高效的脱卤过氧化物酶及其制备方法与应用。本发明专利技术所述脱卤过氧化物酶是利用运输氧功能的肌红蛋白作为蛋白质分子设计骨架，将肌红蛋白血红素活性中心附近43位突变为酪氨酸，同时将64位的组氨酸突变成酸性的天冬氨酸，从而构建具有催化功能的双点突变体蛋白F43Y/H64D Mb，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术所述人工脱卤过氧化物酶，能够在低H2O2浓度下数秒内催化卤代酚氧化成低毒的醌类产物，达到脱卤效果，在催化转化数相近的情况下，极大地提高了双突变体蛋白对卤代酚的亲和力，其催化效率比单点突变体蛋白明显提高，从而可以广泛应用到卤代酚类有机污染物的治理。

【技术实现步骤摘要】
一种脱卤过氧化物酶及其制备方法与应用
本专利技术属于人工金属酶领域，具体涉及一种脱卤过氧化物酶及其制备方法与应用，尤其是涉及一种基于肌红蛋白双点突变体的超高效人工脱卤过氧化物酶及其制备方法与应用。
技术介绍
随着现代工农业的迅速发展，卤代酚已经被广泛应用为农业化学品和生物杀伤剂。然而，卤代酚良好的水溶性也使得其对哺乳动物的肝脏和免疫系统均具有高生物学毒性。而且，卤代酚产生的自由基会对核酸碱基进行修饰，造成DNA损伤，已被视为一类潜在的致癌物。该类化合物被美国环境保护局(USEnvironmentalProtectionAgency,USEPA)列为优先控制的有机污染物(PriorityPollutants)。因此，对卤代酚类有机污染物进行有效治理具有重要意义，是环境生物无机化学领域的研究热点之一。其中，高效、专一及环保的生物修复(Bioremediation)方法引起了研究者的极大关注。脱卤过氧化物酶(Dehaloperoxidase,DHP，蛋白数据库编码1EW6)首先发现于生存在水环境中的面条虫Amphitriteornata中，该生物在被卤代酚污染的水环境中仍然具有生存能力，原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱卤过氧化物酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种脱卤过氧化物酶，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述的脱卤过氧化物酶的DNA分子。3.权利要求1所述脱卤过氧化物酶的制备方法，运用定点突变技术，将肌红蛋白血红素活性中心附近43位突变为酪氨酸、64位突变为天冬氨酸，宿主细胞中表达后分离纯化。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)；所述分离纯化的方法依次为盐酸胍变性透析、离子交换和凝胶柱层析分离。5.一种污水脱卤的方法，在H2O2存在下...

【专利技术属性】
技术研发人员：林英武，尹露露，何博，高淑琴，
申请(专利权)人：南华大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43