从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术和免疫学领域，具体是涉及一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法。该方法通过对天然髓过氧化物酶生化特性的研究，以增加细胞组织的分离以及目标组织的提取和再研磨的方式来改进初级白细胞组织液提取过程，以利于大幅度提高色谱层析前髓过氧化物酶的富集度和相对纯度。然后结合完善合理的色谱层析方法，来减少色谱层析后的髓过氧化物酶的产量损耗，使整个纯化工艺更加适用于批量生产。经过一系列高规格的质量检测表明，经由本工艺生产的天然髓过氧化物酶抗原在产量、纯度、活性、特异性以及稳定性上均有大幅度提高，其高质量更适用于医学检测以及科学研究。

【技术实现步骤摘要】
从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法
本专利技术涉及生物技术和免疫学领域，具体地说是涉及一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法。
技术介绍
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体。这些抗体大部分属于IgG类型，在乙醇固定的中性粒细胞和单核细胞的间接免疫荧光(IFA)反应中有很明显的阳性反应，它们其中一个主要靶点是髓过氧化物酶(MPO)抗原(即是所谓的核周p-ANCA)。纯化后的髓过氧化物酶(MPO)抗原可用于免疫检测、免疫化学和生化MPO研究中检测抗髓过氧化物酶(MPO)自身抗体。抗髓过氧化物酶(MPO)抗体是某些系统性血管疾病的重要血清学标志之一，与特发性微血管炎、新月体肾炎、结节性动脉炎和丘尔格-施特劳斯综合征密切相关。目前中性粒白细胞间接免疫荧光检测(IIF)和标准化的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体ELISA检测相结合的检测方法被广泛适用于以上疾病的检测。对髓过氧化物酶(MPO)抗体进行高灵敏度，高准确性的检测，需要诊断试剂中的核心原料髓过氧化物酶(MPO)抗原具备高纯度、高活性、高特异性等特质，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一、提取正常人体血液中白细胞；步骤二、提取层析初始蛋白溶液：首先破碎步骤一中人体血液白细胞来释放中性粒细胞嗜天青颗粒，后经离心分离获得富含髓过氧化物酶抗原的层析初始蛋白溶液；步骤三、阳离子交换层析：使用阳离子交换层析柱，利用梯度盐度层析法得到富含髓过氧化物酶(MPO)抗原的初级纯化蛋白样品；步骤四、染色配体层析：用染色配体层析柱分离初级纯化蛋白样品，得到富含MPO抗原的二级蛋白样品；步骤五、分子筛层析：用分子筛层析柱分离二级蛋白样品，得到含高纯度MPO的三级纯化蛋白样品；步骤六、亲和层析：...

【技术特征摘要】
1.一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一、提取正常人体血液中白细胞；步骤二、提取层析初始蛋白溶液：首先破碎步骤一中人体血液白细胞来释放中性粒细胞嗜天青颗粒，后经离心分离获得富含髓过氧化物酶抗原的层析初始蛋白溶液；步骤三、阳离子交换层析：使用阳离子交换层析柱，利用梯度盐度层析法得到富含髓过氧化物酶(MPO)抗原的初级纯化蛋白样品；步骤四、染色配体层析：用染色配体层析柱分离初级纯化蛋白样品，得到富含MPO抗原的二级蛋白样品；步骤五、分子筛层析：用分子筛层析柱分离二级蛋白样品，得到含高纯度MPO的三级纯化蛋白样品；步骤六、亲和层析：用亲和层析柱分离三级纯化蛋白样品，去除剩余少量杂抗原，获得最终成品天然髓过氧化物酶；步骤七、稳定及保存：将最终成品天然髓过氧化物酶保存于保存溶液中。2.根据权利要求1所述的一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方法，其特征在于，步骤二中提取层析初始蛋白溶液的具体方法为：(1)用裂解缓冲液洗涤从人体血液中提取出的白细胞，将洗涤过的白细胞和裂解缓冲液加入细胞匀浆器，高压匀浆破碎白细胞得到白细胞全细胞匀浆液，此匀浆液中富含中性粒细胞胞质嗜天青颗粒；所述裂解缓冲液为包括15～25mMTris-HCl(pH6.5-7.0)、1.5～2.5mMNaCl和3.0～4.0mMMgCl2的水溶液；(2)将白细胞全细胞匀浆液离心分离，取上清液，即为富含髓过氧化物酶抗原的层析初始蛋白溶液；所述离心分离条件为：转速为1400～1600rpm、离心时间为5～7分钟。3.根据权利要求1所述的一种从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中制备天然髓过氧化物酶的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙鹏，康雅明，
申请(专利权)人：武汉博百欧生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42