A method for purification of milk peroxidase from milk. The invention uses agarose gel hydrophobic chromatography column to purify the milk peroxidase in liquid milk by one-step hydrophobic chromatography. Compared with the existing technology, the multi-step and complex extraction and purification steps are omitted, and the advantages of the method are fast, efficient and low cost, and the purity of the purified peroxidase is more than or equal to 90%, and the protein is dissolved in the gel. PH = 7 of the eluent buffer can be used for subsequent experiments or operations without ammonium sulfate removal.
【技术实现步骤摘要】
一种牛乳中乳过氧化物酶的纯化方法
本专利技术涉及一种液态乳(例如牛乳)中乳过氧化物酶的快速纯化方法，更具体地说是采用快速蛋白纯化层析技术，经一步疏水层析纯化液态乳中乳过氧化物酶，属于蛋白纯化
技术介绍
乳过氧化物酶(lactoperoxidase,LPO,EC1.11.1.7)作为乳液中的内源酶之一，广泛存在于哺乳动物的乳腺、唾液腺、泪腺及其各自分泌物(乳、唾液、眼泪)中。LPO有较高的热稳定性，可作为超巴氏杀菌的评定指标之一。LPO是一种有效的抗菌剂，不仅可以用来减少奶及奶制品中的细菌菌群，通过添加过氧化氢和硫氰酸盐来活化乳过氧化物酶体系(LPOS)延长冷冻原料乳的保存期限，还可以在保存食品，化妆品和滴眼液中有着广泛的应用。同时，LPO已经在牙科和伤口治疗中得到应用，适用于治疗牙龈炎和牙周病等；牙膏或漱口水中加入LPO可以杀死口腔细菌，并减少由这些细菌产生的酸。此外，LPO在医学上可以用作抗肿瘤和抗病毒剂。开发LPO的最大问题是其分离过程烦琐、纯化困难、制造成本较高，难以实现商业化，所以使用不同的分离纯化技术来提取LPO一直是许多研究的重点，探索操作简...
【技术保护点】
1.一种液态乳中乳过氧化物酶的纯化方法，其特征在于，使用琼脂糖凝胶疏水层析柱对硫酸铵乳清溶液进行疏水层析，分离纯化得到乳过氧化物酶，非必要地，可进一步纯化得到的乳过氧化物酶；优选，所述液态乳为人乳、羊乳、牛乳或其它动物乳，特别优选为牛乳。
【技术特征摘要】
1.一种液态乳中乳过氧化物酶的纯化方法，其特征在于，使用琼脂糖凝胶疏水层析柱对硫酸铵乳清溶液进行疏水层析，分离纯化得到乳过氧化物酶，非必要地，可进一步纯化得到的乳过氧化物酶；优选，所述液态乳为人乳、羊乳、牛乳或其它动物乳，特别优选为牛乳。2.如权利要求1所述纯化方法，其中，琼脂糖凝胶疏水层析柱选自丁基-琼脂糖凝胶疏水层析柱、苯基-琼脂糖凝胶疏水层析柱、辛基-琼脂糖凝胶疏水层析柱，特别优选为辛基-琼脂糖凝胶疏水层析柱。3.如权利要求1-2任一所述纯化方法，其中，所述硫酸铵乳清溶液为含有硫酸铵的乳清溶液，其中所述硫酸铵的浓度为硫酸铵的饱和度为30-70％，优选60-40％，最优选45-55％。4.如权利要求1-3之任一所述纯化方法，其中，所述方法还包括硫酸铵乳清制备步骤；优选进一步还包括制备乳清溶液的步骤；优选进一步还包括液态乳脱脂步骤。5.如权利要求1-4之任一所述纯化方法，其中所述硫酸铵乳清溶液制备步骤包括：2-1.将饱和硫酸铵溶液加入乳清溶液混合，制备30-70％，优选40-60％，最优选45-55％的硫酸铵浓度的乳清溶液，搅拌，离心或过滤，分离得到清液，即为硫酸铵乳清溶液；非必要地，所述硫酸铵乳清制备步骤还包括：2-2.通过超滤膜或超滤管，处理分离得到的硫酸铵乳清溶液，去除粒径大于0.2μm的大颗粒杂质；2-3.如果需要，进一步使用30kDa孔径的超滤膜或超滤管处理2-2步骤得到的硫酸铵乳清溶液，分离去除小于30kDa的杂蛋白，同时浓缩硫酸铵乳清溶液。6...
【专利技术属性】
技术研发人员：王加启，张养东，郑楠，李松励，赵圣国，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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