通过过表达腺相关病毒受体提高基因治疗效率的方法技术

本发明专利技术提供了一种通过过表达腺相关病毒受体提高基因治疗效率的方法，具体地，本发明专利技术提供了一种感染增强元件，所述元件具有如下结构：Z1‑Z2‑Z3‑Z4(I)，其中，Z1为任选的信号肽元件；Z2为PKD‑1结构域、PKD‑2结构域、或PKD‑1‑PKD‑2结构域；Z3为无或PKD‑3结构域；Z4为跨膜元件；“‑”表示连接上述各元件的肽键；附加条件是，当Z3为PKD‑3元件时，Z4不是AAVR的跨膜元件。本发明专利技术的感染增强元件可显著提高AAV病毒载体系统的感染效率，同时也提高了基因编辑效率，并可显著降低苯丙酮尿症患病小鼠血苯丙氨酸含量，从而治疗苯丙酮尿症。

【技术实现步骤摘要】
通过过表达腺相关病毒受体提高基因治疗效率的方法
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及通过过表达腺相关病毒受体提高基因治疗效率的方法。
技术介绍
随着对于疾病发病机理认识的加深和基因组学研究的深入，目前已证实3276个单基因的失调与疾病有关。对于基因失调类疾病，尤其是对于遗传性疾病，现有治疗手段或者不能从根本上(即DNA层面)进行治疗，或者治疗效率低下，因此治疗不仅耗时耗力且效果难以令人满意，给患者和临床治疗带来障碍。基因治疗作为一种从根本治疗遗传性疾病的方法，自上世纪七十年代被提出后，一直被认为是遗传性疾病的有效治疗手段。传统的基因治疗分为两种：基因替代性疗法和RNA干扰技术。基因替代性疗法针对功能缺失性基因突变而导致的疾病，基因替代性疗法通过将外源基因表达系统导入病人体内，替代病人体内原有功能丧失或降低的基因行使生理功能。该方法是最早以及最广泛的基因治疗手段。目前该方法已被成功进行血友病的临床治疗实验。基因替代性疗法依赖外源基因表达系统进行治疗，因此治疗效果往往不具有持续性，目前使用的腺相关表达载体虽然能够长期存在于不分裂的细胞中，但是机体内不断的细胞更新以及体内的免疫机制的清本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种感染增强元件，其特征在于，所述元件具有如下结构：Z1‑Z2‑Z3‑Z4  (I)其中，Z1为任选的信号肽元件；Z2为PKD‑1结构域、PKD‑2结构域、或PKD‑1‑PKD‑2结构域；Z3为无或PKD‑3结构域；Z4为跨膜元件；“‑”表示连接上述各元件的肽键；附加条件是，当Z3为PKD‑3元件时，Z4不是AAVR的跨膜元件。

【技术特征摘要】
1.一种感染增强元件，其特征在于，所述元件具有如下结构：Z1-Z2-Z3-Z4(I)其中，Z1为任选的信号肽元件；Z2为PKD-1结构域、PKD-2结构域、或PKD-1-PKD-2结构域；Z3为无或PKD-3结构域；Z4为跨膜元件；“-”表示连接上述各元件的肽键；附加条件是，当Z3为PKD-3元件时，Z4不是AAVR的跨膜元件。2.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有从5'-3'的式II结构：X1-X0-P1-X2-X3-X4(II)其中，X1为ITR元件；X0为任选的增强子；P1为第一启动子；X2为权利要求1所述的感染增强元件的编码序列；X3为polyA元件；X4为ITR元件；并且，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列。3.一种载体产品，其特征在于，所述载体产品包括第一载体，所述第一载体含有权利要求2所述的核酸构建物；任选的第二载体，所述第二载体含有表达Cas9核酸酶的表达盒，所述表达Cas9核酸酶的表达盒具有5'-3'的式III结构：Y1-Y0-P2-Y2-Y3-Y4(III)其中，Y1为ITR元件；Y0为任选的增强子；P1为第二启动子序列；Y2为编码Cas9核酸酶的编码序列；Y3为polyA元件；Y4为ITR元件；并且，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；和任选的第三载体；所述第三载体含有表达sgRNA的第三表达盒；任选的第四载体，所述第四载体含有表达供体DNA的表达盒；所述表达供体DNA的表达盒具有5'-3'的式IV结构：Z1-Z2-Z3(IV)其中，Z1为ITR元件；Z2为供体DNA元件；Z3为ITR元件；并且，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列。4.一种基因工程细胞，其特征在于，所述细胞被权利要求3所述的载体产品所转化或转染。5.一种感染细胞的方法，其特征在于，包括步骤：(i)提供一细胞；(ii)将第一载体转染所述细胞，获得经第一载体感染的细胞；经过T1时间后，用腺相关病毒载体感染所述经第一载体感染的细胞；其中，所述第一载体含有权利要求2所述的核酸构建物。6.一种组合物，其特征在于，包括：(i)第一药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李大力，尹树明，邵婷婷，王立人，马列，张晓辉，刘明耀，
申请(专利权)人：华东师范大学，上海邦耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31