一种神经细胞快速逆行跨突触标记的方法及应用技术

本发明专利技术属于辅助病毒的构建领域，公开了一种神经细胞快速逆行跨突触标记的方法及应用。本发明专利技术利用双链腺相关病毒（SCAAV）作为辅助病毒载体分别装载TVA受体和狂犬病毒外膜糖蛋白（RVG），并包装成病毒，用于ENVA外膜包裹的缺陷型重组狂犬病毒的特异性识别和逆行跨突触标记。经过活体测试结果表明，本发明专利技术建立的重组缺陷型狂犬病毒RV‑△G‑X‑ENVA与辅助病毒SCAAV组合系统，可以实现快速逆行跨突触标记，较传统的单链AAV病毒辅助方法节省1‑2周的实验时间，节省物力人力，为缺陷型狂犬病毒在神经网络逆向跨突触标记中的应用上提供了更好的研究工具，为神经网络的结构与功能解析奠定了很好的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种神经细胞快速逆行跨突触标记的方法及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种神经细胞快速逆行跨突触标记的方法及应用。
技术介绍
解析大脑神经网络连接，是理解大脑工作机制及脑疾病网络变异机制的基础。传统的神经网络示踪方法，少数蛋白质类示踪剂，如WGA、HRP等,能初步实现大脑核团间的投射关系，但这些示踪方法具有信号间接、方向不特异、跨突触后信号衰减严重等问题。上述传统示踪方法促进了人们对大脑神经网络结构的认识，但难以用于研究由多个脑区、多种类型神经元通过突触连接形成的复杂神经网络。利用改造的嗜神经工具病毒(Neurotropicvirus)，跨突触追踪大脑的神经网络，是目前最有效的标记结构神经网络的技术。嗜神经病毒是一类能感染神经细胞，且能沿神经环路传播增殖的病毒。利用嗜神经病毒作为示踪工具，与传统的示踪剂相比有如下特点：(1)可以跨突触传播；(2)跨突触方向可控，可特异顺行或逆行传播；(3)病毒跨突触后可复制，信号不衰减；(4)可携带多种标示物。上述特性使其在示踪大脑神经网络结构的研究中显示出独特优势。改造的狂犬工具病毒(RV)能实现严谨的跨单突触标记，可精确解析神经回路，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.将SCAAV‑hSyn‑DIO‑RVG和 SCAAV‑hSyn‑DIO‑EGFP‑T2A‑TVA病毒混合后对目的位点进行注射；注射后的第3~9天再注射ENVA包裹的缺陷型狂犬病毒；所述的SCAAV‑hSyn‑DIO‑RVG为SEQ ID NO.2所示的多核苷酸；所述的SCAAV‑hSyn‑DIO‑EGFP‑T2A‑TVA为SEQ ID NO.1所示的多核苷酸。

【技术特征摘要】
1.将SCAAV-hSyn-DIO-RVG和SCAAV-hSyn-DIO-EGFP-T2A-TVA病毒混合后对目的位点进行注射；注射后的第3~9天再注射ENVA包裹的缺陷型狂犬病毒；所述的SCAAV-hSyn-DIO-RVG为SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：林坤章，苏鹏，何晓斌，徐富强，
申请(专利权)人：中国科学院武汉物理与数学研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42